不同畜禽血样采集哺乳动物白细胞分离重点课件.ppt
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1、华中农业大学动物科技学院华中农业大学动物科技学院实验一实验一 哺乳动物白细胞分离哺乳动物白细胞分离 左左 波、柴波、柴 进进 了解哺乳动物白细胞分离原理了解哺乳动物白细胞分离原理 掌握兔及猪白细胞分离方法掌握兔及猪白细胞分离方法 明确畜禽血液细胞组成差异明确畜禽血液细胞组成差异一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理真核基因组真核基因组DNA存在于细胞核的染色质中存在于细胞核的染色质中血液血液新鲜组织新鲜组织福尔马林浸泡标本福尔马林浸泡标本石蜡标本石蜡标本冰冻组织冰冻组织毛发毛发体腔液体腔液洗嗽液洗嗽液精液精液1 1 常用于常用于DNADNA提取的材料:提取的材料:血液血液 血血 浆(
2、浆(50-60%)晶体物质晶体物质 2-3%水份水份 90-92%血浆蛋白血浆蛋白 5-8%血细胞(血细胞(40-50%)红细胞红细胞 白细胞白细胞 血小板血小板 2 血液组成血液组成 红细胞红细胞 又称红血球或红血细胞,是血液中最又称红血球或红血细胞,是血液中最多的一种血细胞。红细胞中含有血红多的一种血细胞。红细胞中含有血红蛋白,因而使血液呈红色。蛋白,因而使血液呈红色。人和哺乳动物的成熟红细胞无细胞核人和哺乳动物的成熟红细胞无细胞核白细胞白细胞 白细胞无色呈球形,白细胞无色呈球形,有细胞核有细胞核,体积比红细胞大,体积比红细胞大光镜下,根据白细胞胞质有无光镜下,根据白细胞胞质有无特殊颗粒,
3、可将其分为有粒白特殊颗粒,可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞。有粒白细细胞和无粒白细胞。有粒白细胞又根据颗粒的嗜色性,分为胞又根据颗粒的嗜色性,分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。无粒白细胞有嗜碱性粒细胞。无粒白细胞有单核细胞和淋巴细胞两种单核细胞和淋巴细胞两种白白细细胞胞有粒有粒嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞中性粒细胞中性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞无粒无粒单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞血小板血小板 也称血栓细胞,是体内最小的血细胞,是由骨也称血栓细胞,是体内最小的血细胞,是由骨髓中成熟的巨核细胞裂解、胞质脱落而成,呈髓中成熟的巨核细胞裂解、胞质脱落而成,呈圆形
4、、椭圆或不规则的形状,圆形、椭圆或不规则的形状,无细胞核无细胞核。但它并非只是细胞碎片,它有一定的结构,能但它并非只是细胞碎片,它有一定的结构,能进行新陈代谢。进行新陈代谢。血小板的功能主要是促进止血和加速凝血血小板的功能主要是促进止血和加速凝血 血小板遇到粗糙的血小板遇到粗糙的血管壁伤口,就被血管壁伤口,就被破坏并释放出促使破坏并释放出促使血液凝固的凝血酶。血液凝固的凝血酶。这种酶的前身是凝这种酶的前身是凝血酶原,在血酶原,在Ca2+参参与下,凝血酶原激与下,凝血酶原激活物可催化凝血酶活物可催化凝血酶原转化为具有活性原转化为具有活性的凝血酶。的凝血酶。在凝血酶、在凝血酶、Ca2+和和其它一些
5、因子的作其它一些因子的作用下,经过一系列用下,经过一系列变化,变化,可溶性的纤可溶性的纤维蛋白原就变成了维蛋白原就变成了不溶性的丝状纤维不溶性的丝状纤维蛋白蛋白。这种蛋白形。这种蛋白形成后,互相交织成成后,互相交织成网,并把血细胞网网,并把血细胞网罗在内,使原来的罗在内,使原来的血液凝集成块。血液凝集成块。3 抗凝抗凝可通过以下几种途径来实现:可通过以下几种途径来实现:(1)往血液中加入适量的抗凝剂(如柠檬酸钠)往血液中加入适量的抗凝剂(如柠檬酸钠)将将Ca2+夺去,使其成为夺去,使其成为失钙血失钙血,这样可以防,这样可以防止纤维蛋白原变成纤维蛋白,从而避免了血止纤维蛋白原变成纤维蛋白,从而避
6、免了血液凝固。液凝固。(2)用试管刷反复搅拌,取出血液中的纤维蛋白,)用试管刷反复搅拌,取出血液中的纤维蛋白,这种血叫这种血叫去纤维蛋白血去纤维蛋白血。由于缺少了凝血必需。由于缺少了凝血必需物质(纤维蛋白),所以血液不再凝固。物质(纤维蛋白),所以血液不再凝固。(3)降低血液温度,使酶的活性降低)降低血液温度,使酶的活性降低。(4)保护血小板,减少凝血酶的释放。)保护血小板,减少凝血酶的释放。抗凝剂抗凝剂(1)乙二胺四乙酸()乙二胺四乙酸(EDTA)盐,)盐,EDTA有二钠、有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子形成螯合物,从二钾和三钾盐。均可与钙离子形成螯合物,从而阻止血液凝固。而阻止血液凝固。
7、Na2C10H14O8N2+Ca2+CaC10H12O8N2+2Na+2H+适用于全血细胞分析及血细胞比容测定。适用于全血细胞分析及血细胞比容测定。(2)柠檬酸钠()柠檬酸钠(trisodium citrate),柠檬酸盐可与血),柠檬酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物,从而阻止血液凝固中钙离子形成可溶性螯合物,从而阻止血液凝固2Na3C6H5O7+2Ca2+2CaC6H5O7+6Na+适用于红细胞沉降率和凝血功能测定。适用于红细胞沉降率和凝血功能测定。(3)草酸钠()草酸钠(sodium oxalate),草酸盐可与血中),草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀,从而阻止血液凝固。钙离子生成草酸
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