红细胞血型检测课件.ppt

1、输输 血血 前前 检检 查查 主要内容u输血前免疫血液学检查输血前免疫血液学检查u盐水介质试验技术盐水介质试验技术u酶处理试验技术酶处理试验技术u抗球蛋白试验技术抗球蛋白试验技术u聚凝胺介质试验技术聚凝胺介质试验技术u微柱凝集试验技术微柱凝集试验技术u吸收放散试验吸收放散试验u凝集抑制试验凝集抑制试验第一节 输血前免疫血液学检查 一、受血者标本处理一、受血者标本处理 二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 三、不规则抗体的筛选和鉴定三、不规则抗体的筛选和鉴定 四、交叉配血试验四、交叉配血试验 五、实验结果的规范化报告五、实验结果的规范化报告输血前检查的主要程序输血

2、前检查的主要程序受血者病史和血样的检查、核对及处理受血者病史和血样的检查、核对及处理受血者血样本受血者血样本为什么输血前检查用血清比血浆更好？为什么输血前检查用血清比血浆更好？ABO正反定型不符分析基本程序u重复试验重复试验u重新采集献血者与受血者血液标本重新采集献血者与受血者血液标本u查询受血者既往病史及输血史和用药史等查询受血者既往病史及输血史和用药史等u多次洗涤标本红细胞多次洗涤标本红细胞u应用抗应用抗-AB-AB、抗、抗-A-A1 1、抗、抗-H-H检测红细胞检测红细胞u分析分析O O型筛选细胞检测结果型筛选细胞检测结果l 复检正定型血型结果的准确性，纠正漏检、误报复检正定型血型结果的

3、准确性，纠正漏检、误报l 亚型亚型l 能够纠正因疾病原因造成的红细胞抗原减弱造成的血型错误能够纠正因疾病原因造成的红细胞抗原减弱造成的血型错误l 排除获得性抗原（如类排除获得性抗原（如类B B抗原）和冷凝集现象对红细胞定型抗原）和冷凝集现象对红细胞定型的干扰的干扰l 不规则抗体不规则抗体ABO正反定型的临床意义错加试剂或标本错加试剂或标本技术和技术和操作操作受血者受血者红细胞红细胞或血清或血清ABO正反定型不一致的原因试剂失效或污染试剂失效或污染细胞与血清间细胞与血清间比例不适当比例不适当溶血现象未能识别溶血现象未能识别漏加试剂漏加试剂结果记录或判断错结果记录或判断错误误l血清异常血清异常l红

4、细胞致敏红细胞致敏l近期输血近期输血l疾病导致抗原疾病导致抗原减弱减弱l抗体减弱抗体减弱l不规则抗体不规则抗体l年龄年龄l近期进行大量近期进行大量血浆置换治疗血浆置换治疗(1)假凝集（串钱状凝集）假凝集（串钱状凝集）较多见，本身不是抗原与抗体的反应。较多见，本身不是抗原与抗体的反应。原因：原因：A 某些肝病、肾病等所致的纤维蛋白原及球某些肝病、肾病等所致的纤维蛋白原及球蛋白的增高。蛋白的增高。B 玻片法实验长，水分蒸发。玻片法实验长，水分蒸发。C 右旋糖酐、输注某些造影剂等右旋糖酐、输注某些造影剂等处理：用生理盐水洗涤多次，重新配制悬液。处理：用生理盐水洗涤多次，重新配制悬液。(2)冷凝集（自

5、身凝集）冷凝集（自身凝集）冷凝集素正常人血清中存在，但效价不高，冷凝集素正常人血清中存在，但效价不高，1：16以下，室温不反应。冷凝集素综合征是免疫球以下，室温不反应。冷凝集素综合征是免疫球蛋白蛋白M(IgM)抗体引起的自体免疫性疾病，又叫抗体引起的自体免疫性疾病，又叫“冷血凝集素病冷血凝集素病”或或“冷凝集素病冷凝集素病”。原因：。原因：（1）自身免疫性溶血性贫血、病毒性肺炎等）自身免疫性溶血性贫血、病毒性肺炎等（2）室温过低）室温过低 处理：处理：37生理盐水洗涤，并在生理盐水洗涤，并在37做凝集实验。做凝集实验。高效价冷凝集素患者的血型鉴定及配输血高效价冷凝集素患者的血型鉴定及配输血的处

6、理的处理1 临床资料患者，女，56岁，贫血，Hb30g/L，该患皮肤苍白，呈极度贫血貌，需输血治疗，血型鉴定为AB型，但与AB型交叉配血分歧。2 ABO定型重新血型鉴定，正定型为AB型，反定型ABO均凝集，该患者无输血史，考虑可能为冷凝集素所致。逐将做血型之玻片置于37温箱，10min后观察可见：抗B侧凝集颗粒变小，抗A侧不变；升温至45，抗B侧凝集消失，抗A测不变。取出室温1min后，抗B侧复又出现凝集，初步定型为A型；用37盐水将患者RBC洗涤3次，做正定型为A型；将洗涤RBC 1份加患者血清内的冷凝集素用自家吸收后的血清做反定型，也为A型。3 血清冷凝集效价测定患者不同稀释浓度的血清与洗

7、涤后的O型RBC做玻片凝集试验，室温时测得冷凝集效价为1:2000。4 配血及输血用A型血按常规方法做盐水配血试验，主侧出现凝集次侧因该患RBC自家凝集成颗粒状，不能进行。用37盐水洗涤后的RBC配成0.05L/L的RBC悬液与A型血清做次侧交叉，无凝集及溶血。用前述自家吸收后的血清与A型RBC做次侧交叉，无凝集及溶血。交叉显示可以输血，考虑该患冷凝集素效价太高，要求临床保温输血，室温控制在2530。输A型血200ml，无不良反应。后按同样方法两次继续输A型血800ml。患者均无不良反应。因本地缺免疫抑制药，患者自行出院往北京，在中日友好医院诊断为冷凝集素引起的免疫性溶血性贫血。经北京红 十字

8、中心血站鉴定冷凝集素为抗I。5 讨论多数正凡人的血清中有低效价冷凝集素，但效价一般不超过1:16，且在20时凝集即可消失。本例患者由于病理变化，血清中出现高效价冷凝集素抗-I，在37还能与自身RBC发生明显凝集，使血型鉴定出现误判，并影响交叉配血。碰到此种情况应该留意：血型鉴定时先用37盐水洗涤被检RBC 23次，以消除冷凝集素造成的鉴定错误。交叉配血时，次侧RBC也应该用37盐水洗3次，主侧血清先做自家吸收试验吸收冷凝集素，以防冷凝集素造成的配血困难。冷凝集素效价太高时，提高室温2530下反应是行之有效的方法。(3)类类B 现象：现象：原因：原因：被肠道杆菌感染的病人（被肠道杆菌感染的病人（

9、O、A型），其红细胞获得一种型），其红细胞获得一种“类类B”抗原（变成抗原（变成B、AB型），但血清中含有正常的抗型），但血清中含有正常的抗B。现象：现象：凝集较疏松，游离凝集较疏松，游离RBC多，不受温度的影响，唾液中多，不受温度的影响，唾液中无无B型血型物质，与型血型物质，与AB血清不凝集，只与抗血清不凝集，只与抗B反应病情好转，反应病情好转，类类B消失。消失。处理：用唾液定血型处理：用唾液定血型 吸收放散试验（吸附的抗体通过加热等从吸收放散试验（吸附的抗体通过加热等从RBC上释放上释放出来）出来）RhD定型及其常见问题1.Rh1.Rh定型定型RhDRhD定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶

10、卡定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶卡2.2.RhD阴性确认阴性确认IgM抗抗-D阴性阴性三个厂家三个厂家IgGIgG抗抗-D进行确认进行确认l抗人球蛋白法进行确认抗人球蛋白法进行确认l三种三种IgG抗抗-D试剂均为阴性，报试剂均为阴性，报RhD阴性阴性l一种或一种以上一种或一种以上IgG抗抗-D试剂为阳性，报弱试剂为阳性，报弱D三三.交叉配血（交叉配血（Crossmatching）目的：验证血型、发现不规则抗体目的：验证血型、发现不规则抗体 输血前必做，是安全输血的根本保证。输血前必做，是安全输血的根本保证。主侧：检测病人血清中有无破坏供者主侧：检测病人血清中有无破坏供者RBC的的 抗体存在

11、。（抗体存在。（受血者血清受血者血清+供血者供血者RBC）次侧：检测供者血清中有无破坏病人次侧：检测供者血清中有无破坏病人RBC的的 抗体存在。（抗体存在。（供血者血清供血者血清+受血者受血者RBC）交叉配血的主次侧交叉配血的主次侧接收申请单和血标本接收申请单和血标本 核对无误核对无误（如有错误与医生（如有错误与医生/护士联系）护士联系）进行交叉配血进行交叉配血 相合相合结果输入微机结果输入微机不相合不相合打印发血单打印发血单血液中心血液中心交叉配血工作流程交叉配血工作流程交叉配血的要求交叉配血的要求试验方法试验方法盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验l 悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合

12、，悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。交叉联结形成肉眼可见的凝集。l 主要检测主要检测IgM类抗体（类抗体（ABO系统、抗系统、抗E）。）。l 抗抗A抗抗B特异性特异性IgG类抗体有时可直接凝集悬浮于类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。抗原决定簇位置有关。盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验l 方法：玻片法方法：玻片法-便于显微镜观察结果便于显微镜观察结果 试管法试管法-适用于不同温度、便于洗涤适用于不同温度、便于洗涤l 反应温度：反应温度：4 42222l 临床意义：

13、盐水凝集试验阳性，并在临床意义：盐水凝集试验阳性，并在3737也有活性的抗体也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，3737无活性者临床意义不大。无活性者临床意义不大。试验记录试验记录 4+4+（+）：一个大凝集块，背景透明，无游离）：一个大凝集块，背景透明，无游离细胞细胞 3+3+（+）：数个大凝集块，背景透明，无游离）：数个大凝集块，背景透明，无游离细胞细胞 2+2+（+）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离细胞细胞 1+1+（+）：细小的凝集块，背景浑浊）：细小的凝集块，背景浑浊

14、W+W+（）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果 0 0（-）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态 PHPH：部分溶血：部分溶血 H H：完全溶血：完全溶血试管法结果判定试管法结果判定红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验结果分析：阳性结果分析：阳性-凝集或溶血凝集或溶血 阴性阴性-无凝集或溶血无凝集或溶血先观察有无溶血、再观察有无凝集先观察有无溶血、再观察有无凝集注意事项：细胞浓度注意事项：细胞浓度2 25%5%（严格按说明（严格按说明书操作）、血清与细胞比例、反应温度、弱凝集书操作

15、）、血清与细胞比例、反应温度、弱凝集分析分析优点：优点：酶介质凝集试验酶介质凝集试验 原理：原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，使红细胞相互排斥。负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，使斥力，缩短了红细胞之间的距离，使IgGIgG分分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。酶介质凝集试验酶介质凝集试验 常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、

16、无花果酶。果酶。方法：方法：期法期法-酶液直接加入血清和细胞酶液直接加入血清和细胞的混合物中。的混合物中。期法期法-用酶处理细胞再与血清进用酶处理细胞再与血清进行反应。行反应。两种方法比较：两种方法比较：期法期法 操作方便操作方便 期法期法 敏感敏感 优点优点：成本低，快速。成本低，快速。缺点缺点：（：（1）破坏某些抗原（如）破坏某些抗原（如MN，Duffy）（2）酶批次不同，活性不同，难以标）酶批次不同，活性不同，难以标 准化。准化。（3）需确定最适孵育时间，处理过度）需确定最适孵育时间，处理过度 则会降解则会降解IgG。（4）假阳性高。）假阳性高。应用应用：现已少用，主要用于：现已少用，主

17、要用于ABO新生儿溶血病新生儿溶血病 检查，检查，Rh抗体筛检。抗体筛检。酶介质法酶介质法 用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。用不完全抗体测定红细胞血型，如用不完全抗体测定红细胞血型，如RhRh血型。血型。交叉配血。交叉配血。3抗人球蛋白法抗人球蛋白法：又称Coombs试验。是最早用于检查不完全抗体的方法。主要用于检测IgG、IgA等抗体参与的抗原-抗体反应，也可测定补体组分C3、C4片段参与的免疫反应抗球蛋白试剂不纯抗球蛋白试剂不纯假阳性假阳性假阴性假阴性红细胞洗涤已凝集红细胞洗涤已凝集红细胞质量红细胞质量不抗凝标本不抗凝标本漏加试剂漏加试剂离心过度

18、离心过度l红细胞、血清红细胞、血清及试剂质量及试剂质量l洗涤不充分洗涤不充分l操作过程不连操作过程不连续续l离心过度离心过度l红细胞过多或红细胞过多或过少过少l血清浓度过大血清浓度过大l孵育时间和温孵育时间和温度不当度不当l前带现象前带现象间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验盐水保存不当盐水保存不当红细胞直抗阳性红细胞直抗阳性 优点优点：经典，特异（金标准），可测补体致：经典，特异（金标准），可测补体致 敏，受冷凝集素影响相对少。敏，受冷凝集素影响相对少。缺点缺点：烦琐（需两次三洗），孵育时间长，不适：烦琐（需两次三洗），孵育时间长，不适用于急诊和血库存的大批量工作。且易受残留血用于急诊和血库存的

19、大批量工作。且易受残留血清蛋白影响。清蛋白影响。注意事项注意事项：每次试验要设有阴性和阳性对照；实每次试验要设有阴性和阳性对照；实验器材清洁；注意抗原抗体比例、孵育时间、温验器材清洁；注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件，严格按照实验方法操作；排除自身抗度等条件，严格按照实验方法操作；排除自身抗体干扰体干扰抗人球蛋白法抗人球蛋白法低离子聚凝胺技术低离子聚凝胺技术1 1 红细胞间有一定间距红细胞间有一定间距2 2 加入聚凝胺后，可以加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝离，使其非特异性凝集集3 3 加入枸橼酸钠，可以加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺中和聚凝胺4 4

20、 红细胞的非特异性凝红细胞的非特异性凝集消失集消失聚凝胺聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠1 1 红细胞上已有不完全红细胞上已有不完全抗体致敏抗体致敏2 2 加入聚凝胺后，缩短加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特两个红细胞结合使其特异性凝集异性凝集3 3 加入枸橼酸钠中和聚加入枸橼酸钠中和聚凝胺凝胺4 4 由于不完全抗体的结由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性合，红细胞的特异性凝集不消失凝集不消失聚凝胺聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠不完全抗体不完全抗体优点优点：快速，方便，适于急诊，试剂易保存，：快速，方便，适于急诊，试剂易保存，可

21、测可测IgG、IgM。缺点缺点：易受冷凝集素和肝素等多价阴离子的干：易受冷凝集素和肝素等多价阴离子的干扰，且作效价测定时易造成溶血；不能检测扰，且作效价测定时易造成溶血；不能检测补体致敏。补体致敏。对无唾液酸的红细胞无作用（多对无唾液酸的红细胞无作用（多凝集红细胞）。凝集红细胞）。注意事项注意事项：抗原抗体比例适当；实验步骤过程：抗原抗体比例适当；实验步骤过程中聚凝胺应去除干净中聚凝胺应去除干净。聚凝胺法聚凝胺法微柱凝胶试验微柱凝胶试验 原理：微柱凝胶技术是用特定的化学原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。胶的间隙，沉积到底部。结果判定结果判定新乡医学院第三临床检验教研室