人教版选修3课件 第1部分 专题2 2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体.ppt
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1、理解理解 教材新知教材新知 把握把握 命题热点命题热点 应用应用 落实体验落实体验 课下综合检测课下综合检测 课堂回扣练习课堂回扣练习 命题点一命题点一 命题点二命题点二 知识点一知识点一 知识点二知识点二 2 22 2 动物动物 细胞细胞 工程工程 专专 题题 2 2 2 22.2. 2 2 22 动物细胞工程动物细胞工程 22.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体 1动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个 动物细胞结合形成一个细胞的过程。动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇动物细胞融合常用的诱导因
2、素有聚乙二醇 (PEG)、灭活的病毒、电激等。、灭活的病毒、电激等。 3动物细胞融合的主要用途是制备单克隆抗体。动物细胞融合的主要用途是制备单克隆抗体。 4杂交瘤细胞是由经免疫的杂交瘤细胞是由经免疫的 B 淋巴细胞和骨髓瘤淋巴细胞和骨髓瘤 细胞融合而成的,具有既能无限增殖又能产生细胞融合而成的,具有既能无限增殖又能产生 专一抗体的能力。专一抗体的能力。 5单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度 高,并可大量制备。高,并可大量制备。 6单克隆抗体的主要用途有:作为诊断试剂、用单克隆抗体的主要用途有:作为诊断试剂、用 于治疗疾病和运载药物。于治疗疾病和运载
3、药物。 动物细胞融合动物细胞融合 (1)概念:是指概念:是指_动物细胞结合形成动物细胞结合形成_ 的过程,也称的过程,也称_。 (2)原理:原理:_。 (3)结果:形成结果:形成_细胞。细胞。 (4)诱导因素:诱导因素:_ (PEG)、_、电电 激等。激等。 两个或多个两个或多个 一个细胞一个细胞 细胞杂交细胞杂交 细胞膜的流动性细胞膜的流动性 杂交杂交 聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒 (5)应用:应用: 研究研究_、细胞免疫、肿瘤和生物、细胞免疫、肿瘤和生物_等等 的重要手段。的重要手段。 制备制备_。 (6)意义:克服了意义:克服了_的不亲和性。的不亲和性。 细胞遗传细胞遗传 新品
4、种培育新品种培育 单克隆抗体单克隆抗体 远缘杂交远缘杂交 1植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同?植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同? 提示:提示:灭活的病毒是动物细胞融合常用的诱导方法,植物体灭活的病毒是动物细胞融合常用的诱导方法,植物体 细胞杂交不用此方法。细胞杂交不用此方法。 植物细胞融合过程中,首先要除去细胞壁,制备原生质体,植物细胞融合过程中,首先要除去细胞壁,制备原生质体, 而动物细胞无细胞壁,可直接诱导融合。而动物细胞无细胞壁,可直接诱导融合。 2细胞融合的实质是什么?动物细胞融合完成的标志是什细胞融合的实质是什么?动物细胞融合完成的标志是什 么?么? 提示
5、:提示: 细胞融合的实质是核融合。 动物细胞融合完成的标志细胞融合的实质是核融合。 动物细胞融合完成的标志 是两个或多个细胞核融合为一个细胞核。是两个或多个细胞核融合为一个细胞核。 1动物细胞融合动物细胞融合 (1)操作步骤:操作步骤: 细胞准备细胞准备 贴壁:直接将两亲本细胞混合培养贴壁:直接将两亲本细胞混合培养 悬浮:制成一定浓度的细胞悬液悬浮:制成一定浓度的细胞悬液 细胞融合:加促融因子于待融合的细胞之中,诱导融合细胞融合:加促融因子于待融合的细胞之中,诱导融合 杂种细胞选择:利用选择性培养基等,使亲本细胞死亡,而杂种细胞选择:利用选择性培养基等,使亲本细胞死亡,而 让杂种细胞存活让杂种
6、细胞存活 杂种细胞克隆:对选出的杂种细胞进行克隆,经过培养,就杂种细胞克隆:对选出的杂种细胞进行克隆,经过培养,就 能获得所需要的细胞能获得所需要的细胞 (2)过程分析:过程分析: 细胞融合的过程包括细胞膜融合、 细胞质融合和细胞核细胞融合的过程包括细胞膜融合、 细胞质融合和细胞核 融合, 其中细胞膜融合是细胞融合的先导, 在细胞膜融合中融合, 其中细胞膜融合是细胞融合的先导, 在细胞膜融合中 体现出细胞膜具有一定的流动性。体现出细胞膜具有一定的流动性。 2植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 比较项目比较项目 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合动物细胞
7、融合 原理原理 细胞膜的流动性、细胞的全细胞膜的流动性、细胞的全 能性能性 细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、 细胞的增殖细胞的增殖 融合前处理融合前处理 先除去细胞壁先除去细胞壁 先使细胞分散开先使细胞分散开 使用的酶使用的酶 纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶 胰蛋白酶胰蛋白酶 诱导手段诱导手段 物理法:离心、电激、振动物理法:离心、电激、振动 化学法:聚乙二醇等试剂诱化学法:聚乙二醇等试剂诱 导导 除物理法和化学法除物理法和化学法 外,也可用灭活的外,也可用灭活的 病毒诱导病毒诱导 比较项目比较项目 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合动物细胞融合 过程过程 细胞细胞 A、B 去壁去壁
8、 原生质体原生质体 A、B 融合融合 融合的原生质体融合的原生质体 再生出再生出 细胞壁细胞壁 杂种细胞杂种细胞 植物组植物组 织培养织培养 杂种植株杂种植株 细胞细胞 A、B 融合融合 杂交细胞杂交细胞 有丝分裂有丝分裂 多个相同杂交细胞多个相同杂交细胞 比较项目比较项目 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合动物细胞融合 结果结果 杂种植株杂种植株 杂交细胞杂交细胞 应用应用 培育植物新品种培育植物新品种 主要用于制备单克隆抗体主要用于制备单克隆抗体 意义意义 克服了远缘杂交不亲和的障碍,打破了生殖克服了远缘杂交不亲和的障碍,打破了生殖 隔离,扩展了杂交的亲本组合隔离,扩展了杂交的亲本
9、组合 特别提醒特别提醒 (1)动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。 (2)灭活的病毒只适用于动物细胞融合。灭活的病毒只适用于动物细胞融合。 单克隆抗体单克隆抗体 1传统抗体的获得传统抗体的获得 (1)方法方法 向动物体内注射向动物体内注射_,使之产生抗体,使之产生抗体 从动物从动物_中分离抗体中分离抗体 (2)缺点:产量低、缺点:产量低、_低、低、_差。差。 血清血清 抗原抗原 纯度纯度 特异性特异性 2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备 (1)过程:过程: 妙学妙记妙学妙记 记忆单克隆抗体制备过程的记忆单克隆抗体制备过程的“122”: “
10、一融合,二筛选,二培养一融合,二筛选,二培养”,即一次融合,两次筛选,即一次融合,两次筛选, 两种培养方式。两种培养方式。 (2)杂交瘤细胞的特点:杂交瘤细胞的特点: 既能迅速既能迅速_,又能产生,又能产生_。 3单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点 (1)_。 (2)_。 (3)可大量制备。可大量制备。 大量繁殖大量繁殖 专一的抗体专一的抗体 特异性强特异性强 灵敏度高灵敏度高 4单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用 (1)作为作为_,具有准确、高效、简易、快速,具有准确、高效、简易、快速 的优点。的优点。 (2)用于用于_和和_。 诊断试剂诊断试剂 治疗疾病治疗疾病 运载药物运载药物 根据上面单克
11、隆抗体的制备过程思考下列问题:根据上面单克隆抗体的制备过程思考下列问题: (1)为什么要对小鼠注射抗原?为什么要对小鼠注射抗原? 提示:提示:以获得能产生相应抗体的以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞淋巴细胞(浆细胞浆细胞)。 诱导融合的诱导融合的B淋巴细胞是经免疫产生的淋巴细胞是经免疫产生的B淋巴细胞,未经免淋巴细胞,未经免 疫的疫的B淋巴细胞不能产生抗体。淋巴细胞不能产生抗体。 (2)制备单克隆抗体时,为什么要选用制备单克隆抗体时,为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤淋巴细胞和骨髓瘤 细胞融合形成杂交瘤细胞?细胞融合形成杂交瘤细胞? 提示:提示:每一个每一个B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体,但不能淋巴
12、细胞能分泌一种特异性抗体,但不能 无限增殖;骨髓瘤细胞可大量快速增殖,却不能产生抗体。将无限增殖;骨髓瘤细胞可大量快速增殖,却不能产生抗体。将 两种细胞融合形成的杂交瘤细胞,既能产生特异性抗体又能快两种细胞融合形成的杂交瘤细胞,既能产生特异性抗体又能快 速增殖。速增殖。 (3)细胞融合后会得到哪些杂交细胞?我们需要的是哪种杂交细胞融合后会得到哪些杂交细胞?我们需要的是哪种杂交 细胞?细胞? 提示:提示:融合后形成的杂交细胞有多种,若仅考虑细胞两两融融合后形成的杂交细胞有多种,若仅考虑细胞两两融 合的情况,融合细胞有三种,即两个合的情况,融合细胞有三种,即两个B淋巴细胞的融合细胞、两淋巴细胞的融
13、合细胞、两 个骨髓瘤细胞的融合细胞、一个个骨髓瘤细胞的融合细胞、一个B淋巴细胞与一个骨髓瘤细胞的淋巴细胞与一个骨髓瘤细胞的 融合细胞。其中最后一种是我们需要的。融合细胞。其中最后一种是我们需要的。 1血清抗体与单克隆抗体的比较血清抗体与单克隆抗体的比较 名称名称 产生产生 特点特点 血清抗体血清抗体 由由B淋巴细淋巴细 胞分泌胞分泌 一般从血清中分离,产量低、纯度一般从血清中分离,产量低、纯度 低、特异性差低、特异性差 单克隆抗体单克隆抗体 由杂交瘤由杂交瘤 细胞分泌细胞分泌 特异性强、灵敏度高,能大量制备特异性强、灵敏度高,能大量制备 2.制备单克隆抗体过程中的两次筛选制备单克隆抗体过程中的
14、两次筛选 (1)第一次筛选:从多种融合细胞中用选择性培养基筛选第一次筛选:从多种融合细胞中用选择性培养基筛选 出杂交瘤细胞。因为细胞融合是随机的,融合形成的融合细出杂交瘤细胞。因为细胞融合是随机的,融合形成的融合细 胞有多种,还有未融合的细胞,因此必须从中筛选出由胞有多种,还有未融合的细胞,因此必须从中筛选出由B淋淋 巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。 (2)第二次筛选:将产生特定抗体的杂交瘤细胞通过细胞第二次筛选:将产生特定抗体的杂交瘤细胞通过细胞 培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取
15、免疫过 的的B淋巴细胞时会取出很多种,形成的杂交瘤细胞有很多淋巴细胞时会取出很多种,形成的杂交瘤细胞有很多 种,所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。种,所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。 例例1 下图所示为细胞融合技术的一些过程:下图所示为细胞融合技术的一些过程: (1)从从A细胞和细胞和B细胞到细胞到C细胞的过程中,采用的方法中与诱导细胞的过程中,采用的方法中与诱导 植物原生质体融合不同的是植物原生质体融合不同的是_处理。处理。 结合植物体细胞杂交技术,考查动物细胞融合结合植物体细胞杂交技术,考查动物细胞融合 (2)若若A、B细胞为单倍体烟草植物的体细胞,那么这样的细细胞为单倍体烟草植
16、物的体细胞,那么这样的细 胞已经用酶降解脱掉了胞已经用酶降解脱掉了_。这种酶可能是。这种酶可能是_、 _,由此生成的细胞经培养形成的细胞团称为,由此生成的细胞经培养形成的细胞团称为_。 (3)若若A、B分别是基因型为分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花两个烟草品种的花 粉,且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性粉,且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性 纯合基因纯合基因(rr或或hh)的作用,在光照强度大于的作用,在光照强度大于800 lx时都不能生时都不能生 长。要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为长。要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种
17、细的杂种细 胞,较为简便的筛选方法是胞,较为简便的筛选方法是_ _。 (4)若将基因型为若将基因型为AaBB的番茄细胞与基因型为的番茄细胞与基因型为AAbb的番茄的番茄 细胞融合,由融合细胞培养成的愈伤组织细胞的基因型是细胞融合,由融合细胞培养成的愈伤组织细胞的基因型是_ _。 (5)若若A、B分别为骨髓瘤细胞和分别为骨髓瘤细胞和B淋巴细胞,则淋巴细胞,则D细胞的特细胞的特 点是点是_。 由由D细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较,具有细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较,具有_ _的特点。生产上一般不能通过直接培养的特点。生产上一般不能通过直接培养B淋巴细胞的淋巴细胞的 方法生产单克隆抗体的主要
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