第八章-免疫标记技术课件.ppt
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4、血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学子生物学等学科广泛应用。等学科广泛应用。43-精品文档-44-精品文档-FACS组成示意图组成示意图Fluorescence-activated cell sorter(FACS)46-精品文档-流式细胞仪实验原理流式细胞仪实验原理47-精品文档-48-精品文档-表达量检测表达量检测 49-精品文档-细胞凋亡研究细胞凋亡研究 PI染色染色50-精品文档-AV-PI双染色双染色51-精品文档-血液学应用血液学应用:包括包括DNA倍倍体分析及细胞周期分析,淋体分析及细胞周期分析,淋巴细胞亚群测定,白血病免巴细胞亚群测定,
5、白血病免疫分型,淋巴瘤免疫分型,疫分型,淋巴瘤免疫分型,红细胞疾病诊断,血小板功红细胞疾病诊断,血小板功能分析和血小板病诊断,微能分析和血小板病诊断,微小残留白血病检测,白细胞小残留白血病检测,白细胞吞噬功能测定,吞噬功能测定,NK和和LAK细胞活性测定,造血干细胞活性测定,造血干/祖祖细胞测定等细胞测定等 52-精品文档-胞内细胞因子的检测胞内细胞因子的检测53-精品文档-T细胞亚群分析细胞亚群分析54-精品文档-55-精品文档-56-精品文档-一、原理一、原理E:酶;:酶;S:底物;底物;P:有色产物;有色产物;D1:供氢体;:供氢体;D2:D1的氧化型有色化合物的氧化型有色化合物将抗原和
6、抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。57-精品文档-58-精品文档-59-精品文档-60-精品文档-61-精品文档-62-精品文档-二、基本类型二、基本类型均相酶免疫测定法均相酶免疫测定法 酶增强免疫技术;酶减弱免疫技术;酶增强免疫技术;酶减弱免疫技术;辅基标记技术辅基标记技术2.非均相酶免疫测定法非均相酶免疫测定法 ELISA(直接法、间接法、夹心法、竞直接法、间接法、夹心法、竞争法、抗酶抗体法)争法、抗酶抗体法)63-精品文档-直接直接ELISA间接间接ELISA64-精品文档-65-精品文档-返回66-精品文档-67-精品文档-68-精品文档-返回69-精品
7、文档-70-精品文档-71-精品文档-返回72-精品文档-73-精品文档-74-精品文档-加加Ab,清洗清洗加加Ag形成复形成复合物,洗涤合物,洗涤加该加该Ag的另的另一一Ab(酶(酶标),洗涤标),洗涤加底物,读数加底物,读数加加Ag,清洗,清洗加加Ab形成复形成复合物,洗涤合物,洗涤加酶标二抗加酶标二抗加底物,读数加底物,读数聚苯乙烯微聚苯乙烯微量反应板量反应板75-精品文档-76-精品文档-抗酶抗体法(抗酶抗体法(PAP)77-精品文档-78-精品文档-实验方法实验方法包被酶标反应板:加马抗人抗体(),孔 孵育小时后洗涤次,分钟次,孔,过夜孔孵育后,洗涤同上酶标记抗体:加入适当稀释度的酶
8、标抗体,孔孵育后,洗涤同上底物:加入(邻苯二胺)溶液,孔室温分钟终止液:加入,孔内,用酶标仪测定各孔值,测定波长实验结果 用待测标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均吸收值的比值()表示,当大于某一数值时(如)判断为阳性,数值的大小依具体检测要求而定。79-精品文档-80-精品文档-81-精品文档-b b固相抗原竞争法固相抗原竞争法返回82-精品文档-夹心夹心ELISA竞争竞争ELISA83-精品文档-返回84-精品文档-85-精品文档-返回86-精品文档-酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot,ELISPOT)在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸在
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