无菌操作技术一课件.ppt
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- 无菌 操作 技术 课件
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1、1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制 1、洗涤液的种类及配制、洗涤液的种类及配制(1)去垢剂溶液(常用洗涤液)。)去垢剂溶液(常用洗涤液)。生化去垢剂(生化去垢剂(detergent)A中性去垢剂 又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售有 聚乙二醇类,如PEG200;多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司班和吐温类:司班-80和吐温-20 B阴离子去垢剂:常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基
2、璜酸钠。常用于核酸的提取。C阳离子去垢剂:如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等,消毒灭菌类居多。D天然表面活性剂:又称为生物表面活性剂,如各种树胶(阿拉伯胶、果胶)、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类(如环糊精)等。E两性表面活性剂:在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质,起泡性好,去污力也强;在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征,其杀菌性很强。(2)铬酸洗液:又称重铬酸钾(或钠)浓硫酸洗涤液,简称洗液广泛用于玻璃仪器的洗涤。其配制方法如下:称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中,加5ml水,尽量使其溶解。然后边搅拌,边缓缓注入浓H2SO4l00ml,待洗液温度冷却至40以
3、下,将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中,加水20ml,尽量使其溶解。然后慢慢注入浓H2SO4180ml,随加随搅拌。冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。(3)浓HCl(工业用)常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。(4)浓HNO3(常用于洗涤除去金属离子)。(5)1mol/LKOH溶液。(6)8mol/L尿素洗涤液(PH1.0)适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。(7)10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。(8)5%-10%磷酸三钠(Na3PO412H2O)溶液(用于洗涤油污物)。(9)氢氧化钾(KOH)的乙醇溶液和含
4、有高锰酸钾的氢氧化钠(NaOH)溶液,适用于清除容器内壁污垢,但这两种强碱性洗涤液对玻璃仪器的侵蚀性很强,故洗涤时间不宜过长,使用时应小心慎重。(10)有机溶剂:丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗脱油脂、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脱油漆类污垢。2玻璃仪器的清洗(1)初用玻璃仪器的洗涤 新购置的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质,可先用去垢剂(0.5%水溶液)或肥皂水洗刷,再用自来水洗净。然后浸泡1%2%HCl溶液中过液,次日取出用自来水充分冲洗,最后再用蒸馏水漂洗数次,置烘箱内烘干或倒置晾干备用。(2)使用过的玻璃仪器的洗涤 一般玻璃仪器洗涤 自来水冲洗去垢剂洗涤或浸泡于0.5%去垢剂水溶液中将器皿
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