对虾白斑综合症和肝胰腺坏死症生态防控技术课件.pptx

1、对虾白斑综合症和肝胰腺坏死症生态防控技术l对虾是全球性水产养殖种类，也是全球交易量最大的对虾是全球性水产养殖种类，也是全球交易量最大的水产品（水产品（20212021年，年，180180万吨）万吨）其他对虾养殖国家中国l 我国是全球对虾养殖产量第一大国，我国是全球对虾养殖产量第一大国，20212021年产量为年产量为165165万吨，占全球养殖产量的万吨，占全球养殖产量的40%40%Two diseases,WSS and HPNS,have caused huge economic loss in the global culturing shrimp 自自19881988年年WSSWSS爆

2、发以来，困扰全球对虾养殖产业爆发以来，困扰全球对虾养殖产业对虾白斑综合症（对虾白斑综合症（WSSWSS）和肝胰腺坏死症）和肝胰腺坏死症(HPNS)(HPNS)是制约全球对虾是制约全球对虾养殖产业发展的最主要障碍养殖产业发展的最主要障碍（年）（吨）1993-19981993-1998年，我国池塘养殖对虾年，我国池塘养殖对虾发病率发病率90%90%，发病池塘对虾，发病池塘对虾死亡率接死亡率接 近近100%100%，年直接经济损失，年直接经济损失3030多亿。多亿。我国对虾养殖产业陷入了严重的困我国对虾养殖产业陷入了严重的困 境，境，产量由世界第产量由世界第1 1跌至第跌至第6 6 2021 202

3、1年，农业部新修订的一、二、三类动物疫病病种名录将白斑年，农业部新修订的一、二、三类动物疫病病种名录将白斑 综合症列为一类动物疫病综合症列为一类动物疫病 因病导致的对虾原初产品质量安全问题突出，如氯霉素事件因病导致的对虾原初产品质量安全问题突出，如氯霉素事件 国际上称为早期死亡综合症（国际上称为早期死亡综合症（EMS）/急性肝胰腺坏死症（急性肝胰腺坏死症（AHPNS），），我国对虾养殖者称为我国对虾养殖者称为“偷死病偷死病”，我们称为肝胰腺坏死症（，我们称为肝胰腺坏死症（HPNS）。）。2021年全球养殖对虾减产年全球养殖对虾减产23%，泰国减产，泰国减产54%，我国减产，我国减产17%，广东

4、减产，广东减产30%。养殖时间超过养殖时间超过80天池塘的对虾天池塘的对虾HPNS发生率超过了发生率超过了80%，前中期发生，前中期发生HPNS单造单造 养殖产量只有养殖产量只有300斤斤/亩。亩。年直接经济损失超过年直接经济损失超过50亿元。亿元。肝胰腺坏死症（肝胰腺坏死症（hepatopancreas necrosis syndrome,HPNS）一一、WSS生态防控技术生态防控技术（Ecological techniques for controlling WSS）（一）（一）WSS环境调控防控技术环境调控防控技术（Environmtental factors regulating te

5、chniques for controlling WSS）1、理化胁迫的影响、理化胁迫的影响2、对虾先天性免疫对、对虾先天性免疫对WSS发生的影响发生的影响 3、环境调控防控技术、环境调控防控技术（二）（二）WSS生物防控技术生物防控技术(Biological control techniques for WSS)病毒潜伏感病毒潜伏感染对虾个体染对虾个体个体发生阶段：个体发生阶段：环境环境胁迫诱发潜伏感染转胁迫诱发潜伏感染转为急性感染为急性感染群体爆发流行阶段：群体爆发流行阶段：摄食死虾导致疾病传摄食死虾导致疾病传播与爆发播与爆发关键控制点关键控制点1 1：调控环境阻止病毒调控环境阻止病毒潜伏

6、感染转为急性感染潜伏感染转为急性感染关键控制点关键控制点2 2：消除健康对虾摄食消除健康对虾摄食死亡对虾的生态位，切断疾病的传死亡对虾的生态位，切断疾病的传播途径播途径不携带不携带WSSVWSSV对虾个体对虾个体WSSVWSSV致死对致死对虾个体虾个体对虾种对虾种群崩溃群崩溃 一、一、WSSWSS流行病学及防控的二个关键点流行病学及防控的二个关键点WSS epidemiology conclude that WSSV latent infection turn to acute infection by environmental stress in shrimp individual and

7、 transmit in shrimp population by healthy shrimp eat dead shrimp with WSSV WSS导致养殖对虾种群崩溃的主要原因：导致养殖对虾种群崩溃的主要原因：The root reasons of WSS outbreak in shrimp population 养殖生态系统种群单一，缺乏与健康对虾摄食死虾养殖生态系统种群单一，缺乏与健康对虾摄食死虾 的优势竞争者；的优势竞争者；(only shrimp population,without competitor with healthy shrimp)诱发诱发WSSV潜伏感染转为

8、急性感染的环境因子。潜伏感染转为急性感染的环境因子。(We need to understanding environmental factors that induce WSSV latent Infection turning to acute infection in individual shrimp )（一）（一）WSS在养殖对虾个体中发生的环境基础与防控技术在养殖对虾个体中发生的环境基础与防控技术1、理化胁迫的影响、理化胁迫的影响 2、对虾先天性免疫对、对虾先天性免疫对WSS发生的影响发生的影响 3、环境调控防控技术、环境调控防控技术 Y=421.894-28.448X1-1.08

9、6X 2-1.44 10-3X 3-1.965X 4式中式中Y为凡纳滨对虾的平均存活时间（为凡纳滨对虾的平均存活时间（h），），X1为为pH，X2为为NO2-N的浓度的浓度（mgL-1），），X3为为WSSV的量（的量（copies），），X4为为NH4+-N的浓度（的浓度（mgL-1）。）。多种水体理化因子对感染多种水体理化因子对感染WSSV凡纳滨对虾影响凡纳滨对虾影响斑节对虾杆状病毒斑节对虾杆状病毒(MBV)数量与主要水体理化因子的关系数量与主要水体理化因子的关系Y=-12.089X1+1.216X2+2.734X3+0.258X4式中式中Y=MBV在斑节对虾体内的相对数量在斑节对虾体内的

10、相对数量;X1=抵抗力抵抗力;X2=对虾养殖水体的盐度对虾养殖水体的盐度(0/00);X3=对虾养殖水体氨态氮浓度对虾养殖水体氨态氮浓度(ug/L);X4=对虾养殖水体亚硝酸氮浓度对虾养殖水体亚硝酸氮浓度(ug/L)养殖水体理化因子与病毒数量和对虾存活时间的关系养殖水体理化因子与病毒数量和对虾存活时间的关系 对虾对虾TOLL和和IMD途径调控白斑综合症病毒（途径调控白斑综合症病毒（WSSV）复制）复制 LvDorsal and LvLvRelish regulate WSSV replication 内质网胁迫的非折叠蛋白反应途径与白斑综合症复制的关系内质网胁迫的非折叠蛋白反应途径与白斑综合症

11、复制的关系 Unfolded protein response(UPR)regulate WSSV replication 对虾抗对虾抗WSSV途径途径 L.vannamei anti-WSSV pathway（1 1）对虾）对虾 TLRTLR和和IMDIMD途径调控途径调控AMPAMP表达表达LvTLR1-3LvSPZ1-3InfectionMyD88TubeLvPelleLvTRAF6降解LvDorsalCactusAMPs PGRP-LCLvIMDFADDLvIKKsAMPs 降解LvRelish鉴定了对虾定了对虾TLR和和IMD信号转导通路的关键基因；信号转导通路的关键基因；阐明了阐明

12、了TLR和和IMD途径调控抗菌肽表达。途径调控抗菌肽表达。1、在对虾先天性免疫途径调控、在对虾先天性免疫途径调控WSSV复制复制 WSSV 利用利用 TLR途径促进病毒基因表达途径促进病毒基因表达 WSSV utilizing NF-B activation to favor its replications WSSV InfectionMyD88TubeLvPelleLvTRAF6LvDorsalWSSV449:Tube like proteinViral gene including WSSV069 WSSV303 and WSSV371发现对虾发现对虾TLRTLR信号转导途径可以促进病毒

13、基因表达信号转导途径可以促进病毒基因表达 Wang PH，etc.Dev Comp Immunol.2021 Jan;35(1):105-14.Huang XD,etc.Dev Comp Immunol.2021 Feb;34(2):107-13.Huang XD,etc.Fish Shellfish Immunol.2021 Aug;27(2):230-8.Wang PH,etc.Mol Immunol.2021 May;46(8-9):1897-904Yang LS,etc.Mol Immunol.2007 Mar;44(8):1999-2021.WSSV抑制了抑制了cactus-dors

14、al负调控途径负调控途径WSSV的复制依赖对虾的复制依赖对虾NF-kB活性活性Litopenaeus vannamei NF-B is required for WSSV replicationRandal J.et al.20022、UPR pathways regulated WSSV replicationFig.1 凡纳滨凡纳滨XBP1 mRNA特征分析特征分析。(A)XBP1 mRNA的二级结构的二级结构.(B)DTT刺激和热激引起刺激和热激引起XBP1 mRNA的切割的切割.(C)XBP1 mRNA切割位点分析切割位点分析.方框之内的序列为预测切割位点，方框之内的序列为预测切割位点

15、，AS1和和AS2为两种实际切割位为两种实际切割位点点.(D)切割之后切割之后XBP1（XBP1s）的编码区的变化）的编码区的变化。（1）UPR XBP1途径及其对途径及其对WSSV基因表达的调控基因表达的调控Fig.3 LvXBP1s对非折叠蛋白反应效应基因对非折叠蛋白反应效应基因Bip的激活作用。（的激活作用。（A）报告基因结构示意图。（）报告基因结构示意图。（B）LvXBP1上调上调LvBip的表达。的表达。Fig.2 环境胁迫对环境胁迫对IRE1-XBP1 通路的通路的影响。（影响。（A）热激引起的）热激引起的LvXBP1 mRNA切割。（切割。（B）WSSV感染引起的感染引起的LvX

16、BP1 mRNA切割。切割。Yi-Hong Chen，2021，Developmental and Comparative ImmunologyLvXBP1sLvXBP1s以以UPREUPRE序列依赖的序列依赖的方式激活方式激活wsv083wsv083（1）UPR XBP1途径及其对途径及其对WSSV基因表达的调控基因表达的调控LvATF4以以ATF/CRE序列依赖的方式激活序列依赖的方式激活wsv023 （2）UPR ATF4途径及其调控途径及其调控WSSV基因表达基因表达通过通过RNAi 分别敲低分别敲低LvATF4和和LvXBP1后进行后进行WSSV攻毒实验。与对照组相攻毒实验。与对照组

17、相比，比，dsLvATF4或是或是dsLvXBP1干扰组死亡率明显降低。干扰组死亡率明显降低。DsLvATF4 treatmentedDsLvXBP1 treatmentedWSSV与宿主相互作用与宿主相互作用UPR BRLZ转录因子参与转录因子参与WSSV基因转录调控基因转录调控Yi-Hong Chen，Developmental and Comparative Immunology.2021中国对虾养殖产量（1991-2021）3、对虾抗WSSV途径每交换1池塘水，养殖凡纳滨对虾会增加约300斤/亩。鉴定有副溶血弧菌的对虾51尾，占鉴定对虾总数的52.相同密度，养殖至中、后期（40-50天

18、）营养盐的投入量生长快种苗池塘约是生长慢种苗池塘的2倍，中期生态系统会过早的进入晚期生态系统。多种水体理化因子对感染WSSV凡纳滨对虾影响3、对虾抗WSSV途径 1993-1998年，我国池塘养殖对虾发病率90%，发病池塘对虾死亡率接总体来说，粤西和珠江三角州地区对虾主要养殖时间阴雨天超过15天，在此条件下，需要精细的池塘调控技术。1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系3、对养殖池塘条件致病菌、有毒藻类和有害理化因子检测结果分析，发现对2、中期生态系统（约养殖20天至70天）单位时间内养殖量超过了环境容纳量，有毒理化因子GFPPBSATF424h48h72h（A）wsv023 48小时干扰效果

19、（B）wsv023 RNAi 攻毒死亡率统计（1）宿主）宿主-病毒病毒 LvCTL1(lectin)-WSSV Far-WesternLvCTL1NC 点杂交点杂交Pull-Dwon经鉴定的囊经鉴定的囊膜蛋白膜蛋白Fig 9.WSSV感染试验中，重组感染试验中，重组LvCTL1对对L.vannamei具有保护作用具有保护作用Fig 8.鉴定若干与鉴定若干与LvCTL1与相互作用的与相互作用的WSSV囊膜蛋白囊膜蛋白Zhi-Ying Zhao,Fish and Shellfish Immunology.2007Zhi-Ying Zhao,Journal of Virology.20213、对虾抗

20、、对虾抗WSSV途径途径2 2、免疫信号通路、免疫信号通路-RNAi-RNAiFig 6.L.vannamei 体内的体内的RNAi有效且具有特异性有效且具有特异性Fig7.WSSV攻毒实验中，针对病毒的基因的攻毒实验中，针对病毒的基因的siRNA对对凡纳滨凡纳滨虾具有保护作用虾具有保护作用Yue Wu，Aquaculture.2007LvPashaLvSVCs启动子启动子LvArs2LvTRBP1LvAgo2LvDicer2miRNAsiRNAsiRISC/siRLCLvArs2与与LvPasha、LvDicer2相互作用相互作用 L。vannamei siRISC复合物亚基间相互作用复合物

21、亚基间相互作用Yi-Hong Chen，2021，Developmental and Comparative ImmunologyYi-Hong Chen，2021，Fish and Shellfish ImmunityLvDicer2上调上调LvSVCs的表达的表达 3 3、对虾核酸诱导抗病毒免疫、对虾核酸诱导抗病毒免疫 对虾可能具有类似脊椎动物对虾可能具有类似脊椎动物的干扰素诱导抗病毒途径的干扰素诱导抗病毒途径测定指标正常范围必须采取措施的阈值测定周期pH8.2-8.88 或9或日波动0.52次/天DO3-632次/天NH4+-N0-0.10.151次/天NO2-N0-0.10.21次/天

22、H2S0-0.010.0151次/天余氯00.11次/5天盐度按虾种和季节定1次/5天透明度30-5060或201次/3天总碱度80-160601次/7天总硬度80-120601次/7天弧菌0-500 3000个/ml1次/5天总菌0-100010000个/ml1次/5天总氮1次/5天总磷100-300ppm300或501次/5天可溶性钙20-50100或101次/5天白班病毒0100个/mg组织1次/10天 4、理化因子调控防控对虾病毒病个体发生、理化因子调控防控对虾病毒病个体发生建立了测水调水理化因子指标体系建立了测水调水理化因子指标体系 1）高位池对虾养殖模式中的应用）高位池对虾养殖模式

23、中的应用凡纳滨对虾每造平均单产达凡纳滨对虾每造平均单产达9吨吨/公顷，最高达公顷，最高达75吨吨/公顷；公顷；斑节对虾每造平均单产达斑节对虾每造平均单产达6吨吨/公顷，最高达公顷，最高达10.7吨吨/公顷。公顷。高位虾池高位虾池病害控制技术病害控制技术水质调控技术水质调控技术高效环保饲料高效环保饲料高位高位池对池对虾养虾养殖模殖模式式集成集成 传统虾池改造传统虾池改造管理方便管理方便2）地膜对虾养殖模式）地膜对虾养殖模式凡纳滨对虾每造平均单产达凡纳滨对虾每造平均单产达8吨吨/公顷，最高达公顷，最高达30吨吨/公顷；公顷；斑节对虾每造平均单产达斑节对虾每造平均单产达6吨吨/公顷，最高达公顷，最高

24、达10吨吨/公顷。公顷。地膜虾池地膜虾池病害控制技术病害控制技术水质调控技术水质调控技术高效环保饲料高效环保饲料地膜地膜池对池对虾养虾养殖模殖模式式集成集成 利用了对虾广盐性利用了对虾广盐性 切断切断WSSV部分的水平传播途径部分的水平传播途径 减少了病毒病暴发的风险减少了病毒病暴发的风险 3）低盐度对虾养殖模式）低盐度对虾养殖模式低盐度虾池低盐度虾池病害控制技术病害控制技术水质调控技术水质调控技术高效环保饲料高效环保饲料低盐低盐度对度对虾养虾养殖模殖模式式集成集成 （二）对虾WSS生物防控基础与技术（1 1）健康对虾摄食死亡对虾健康对虾摄食死亡对虾是是WSSWSS传播的传播的主要途径主要途径

25、 1、对虾WSS生物防控基础（2 2）在对虾养殖生态系统中，引入）在对虾养殖生态系统中，引入鱼类鱼类作作为摄食死亡对虾为摄食死亡对虾优势竞争者优势竞争者，阻断健康，阻断健康对虾摄食死亡对虾，对虾摄食死亡对虾，切断切断WSSWSS的传播途径的传播途径（3 3）根据摄食能力、摄食方式、活动能力）根据摄食能力、摄食方式、活动能力和生态适应性，筛选出和生态适应性，筛选出1818种鱼类，种鱼类，开展开展鱼类对健康对虾、患病对虾和死亡对虾鱼类对健康对虾、患病对虾和死亡对虾摄食能力、摄食选择性等生物防控关键摄食能力、摄食选择性等生物防控关键参数的研究参数的研究（4 4）揭示了凡纳滨对虾规格与感染）揭示了凡纳

26、滨对虾规格与感染WSSVWSSV死亡的时间关系死亡的时间关系（5 5）揭示了）揭示了WSSWSS在养殖凡纳滨对虾种群中的传播速度在养殖凡纳滨对虾种群中的传播速度（6 6）建立了对虾）建立了对虾WSSWSS生物防控数学模型生物防控数学模型确定了用于生物防控的鱼类及规格、数量等技术参数确定了用于生物防控的鱼类及规格、数量等技术参数 Mathematical models for WSS transmission and the biocontrol of WSS in a shrimp population in a pond2 2、建立了、建立了7 7套适合不同盐度和地区的生物防控技术套适合不同

27、盐度和地区的生物防控技术（1 1）对虾）对虾WSSWSS草鱼生物防控技术草鱼生物防控技术(盐度盐度8 8以下以下)Biological control of WSS by grass carp（2 2）对虾）对虾WSSWSS革胡子鲶生物防控技术革胡子鲶生物防控技术(盐度盐度6 6以下以下)Biocontrol of WSS by claris catfish（3 3）对虾）对虾WSSWSS草鱼和革胡子鲶联合生物防控技术草鱼和革胡子鲶联合生物防控技术(盐度盐度6 6以下以下)Combined biological treatment of WSS by grass carp and claris

28、 catfish（4 4）对虾）对虾WSSWSS美国红鱼生物防控技术美国红鱼生物防控技术(所有盐度所有盐度)Biocontrol of WSS by red drum（5 5）对虾）对虾WSSWSS军曹鱼生物防控技术军曹鱼生物防控技术(盐度盐度1515以上以上)Biocontrol of WSSV by cobia（6 6）日本囊对虾）日本囊对虾WSSWSS石斑鱼防控技术石斑鱼防控技术(盐度盐度1313以上以上)Biocontrol of by groupers（7 7）对虾）对虾WSSWSS罗非鱼生物防控技术罗非鱼生物防控技术(盐度盐度2020以下以下)Biocontrol of WSSV

29、by tilapia传统养殖模式生态防控模式举例：举例：对虾对虾WSSWSS革胡子鲶生物革胡子鲶生物防控技术，防控技术，在一个有在一个有110110口池口池塘的养殖场应用，养殖成功率塘的养殖场应用，养殖成功率100%100%，产量提高，产量提高2-52-5倍倍 对虾病毒病草鱼生物防控技术对虾病毒病草鱼生物防控技术 适合盐度适合盐度6 6以下养殖区；以下养殖区；适合对虾苗种密度低于适合对虾苗种密度低于1010万尾万尾/亩；亩；对虾苗种养殖对虾苗种养殖20203030天，每亩投放天，每亩投放30306060尾，每尾尾，每尾1kg1kg左右的草鱼。左右的草鱼。比照对虾养殖的正常管理方法，培好水后，投

30、放比照对虾养殖的正常管理方法，培好水后，投放1.0cm左右的虾苗，每亩左右的虾苗，每亩10万尾以下。由于草鱼在盐度大于万尾以下。由于草鱼在盐度大于6的水体中摄食能力较弱，所以选用草鱼的水体中摄食能力较弱，所以选用草鱼的养殖水体的盐度在的养殖水体的盐度在6以下范围内。如果养殖水体的盐度大于以下范围内。如果养殖水体的盐度大于7.5，可用添加，可用添加淡水的方法降低盐度，将盐度控制在上述范围内。适时投放草鱼。对虾养殖淡水的方法降低盐度，将盐度控制在上述范围内。适时投放草鱼。对虾养殖到到2030日左右，对虾病害暴发前投放草鱼。投放的草鱼数量不能少于日左右，对虾病害暴发前投放草鱼。投放的草鱼数量不能少于

31、30尾尾/亩，每尾亩，每尾1kg以上，并可根据放养虾苗的密度适当增加，但不能超过以上，并可根据放养虾苗的密度适当增加，但不能超过60尾尾/亩。亩。1c2cTo determine the capacity of fish in controlling WSS,we performed the experiments in four sizes of shrimps(1.3 g,2.5 g,5.0 g,7.8 g).We released one 1-kg grass carp with 750 healthy shrimps in 10 m2 tank.In this setting,we r

32、eleased different number of infected shrimps(see Exp.Table 4).Stars(*)represent the number of infected shrimps successfully controlled by one 1-kg grass carp while clear circles(o)represent the number of infected shrimps that failed to be controlled by one 1-kg grass carp.Based on the model 3,we sim

33、ulated to determine the threshold(red line)of the number of infected shrimps controlled by one 1-kg grass carp.The red line is simulated highest value of one 1-kg fish that can control the number of infected shrimps with different weights of shrimps.爆发流行期爆发流行期 环境调控防控技术应用期环境调控防控技术应用期 环境调控防控与生物防控环境调控防

34、控与生物防控集成技术应用期集成技术应用期白斑综合症在我国养殖对虾发病率由白斑综合症在我国养殖对虾发病率由90%90%下降到下降到5%5%以下，以下，基本消除了对虾白斑综合症对我国对虾养殖业的威胁。基本消除了对虾白斑综合症对我国对虾养殖业的威胁。中国对虾养殖产量（中国对虾养殖产量（1991-20211991-2021）（一）肝胰腺坏死症病因（一）肝胰腺坏死症病因（二）肝胰腺坏死症生态防控技术（二）肝胰腺坏死症生态防控技术（三）对虾养殖容纳量探讨（三）对虾养殖容纳量探讨二、肝胰腺坏死症病因分析与生态防控技术二、肝胰腺坏死症病因分析与生态防控技术Ecological control techniqu

35、es for hepatopancreas necrosis sydrome 正常肝胰腺正常肝胰腺肝胰腺坏死症肝胰腺坏死症（1）对虾肝胰腺坏死症组织病理分析对虾肝胰腺坏死症组织病理分析（2 2）对虾样品采集和细菌分离）对虾样品采集和细菌分离 分别在分别在中国广东省番禺、珠海、中山、江门、阳江、茂名、湛江、惠中国广东省番禺、珠海、中山、江门、阳江、茂名、湛江、惠州、汕尾、河北省唐山、广西省、海南省等地州、汕尾、河北省唐山、广西省、海南省等地采样，取采样，取“空肠空胃空肠空胃”等症等症状的状的 172尾尾病虾病虾的的肝胰腺、肠道、血淋巴和患病仔虾进行细菌分离，分别肝胰腺、肠道、血淋巴和患病仔虾进行

36、细菌分离，分别涂布涂布LB、TCBS、BHI等培养基并进行纯化，等培养基并进行纯化，共收集共收集1435株细菌株细菌。采用传统微生物学鉴定方法、采用传统微生物学鉴定方法、16S rDNA基因扩增、基因扩增、BIOLOG Gen/Gen Microstation自动微生物鉴定系统等方法，自动微生物鉴定系统等方法，鉴定细菌鉴定细菌941株，分别属于株，分别属于10个属，个属，73种细菌。种细菌。人工感染人工感染 用副溶血弧菌用副溶血弧菌V1、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌Z7、V1+Z7混合菌分别注混合菌分别注射感染对虾，在感染后射感染对虾，在感染后6天全部死亡，死亡率天全部死亡，死亡率100%，

37、表现典型肝，表现典型肝胰腺坏死症状。对照组死亡率为胰腺坏死症状。对照组死亡率为12%，没有肝胰腺坏死症状。，没有肝胰腺坏死症状。其中：其中：鉴定有副溶血弧菌的对虾鉴定有副溶血弧菌的对虾51尾，占鉴定对虾总数的尾，占鉴定对虾总数的52.6%；鉴定有蜡样芽胞杆菌的对虾鉴定有蜡样芽胞杆菌的对虾27尾，占鉴定对虾总数的尾，占鉴定对虾总数的27.8%；鉴定有霍乱弧菌的对虾鉴定有霍乱弧菌的对虾23尾，占鉴定对虾总数的尾，占鉴定对虾总数的23.7%；鉴定有嗜水气单胞菌的对虾鉴定有嗜水气单胞菌的对虾19尾，占鉴定对虾总数的尾，占鉴定对虾总数的19.6%；鉴定有苏云金芽胞杆菌的对虾鉴定有苏云金芽胞杆菌的对虾17

38、尾，占鉴定对虾总数的尾，占鉴定对虾总数的17.5%；鉴定有金橙黄微小杆菌的对虾鉴定有金橙黄微小杆菌的对虾14尾，占鉴定对虾总数的尾，占鉴定对虾总数的14.4%；其他细菌也分别在不同尾虾中检出。其他细菌也分别在不同尾虾中检出。HPNS不是有单一某种细菌所导致不是有单一某种细菌所导致 抗性基因检测结果抗性基因检测结果抗性基因抗性基因strAfloRSul1Sul2gyrA第一批第一批4525594080第二批第二批10613918第三批第三批258233586合计合计80399584184百分比百分比22.99%11.21%27.29%24.14%52.87%（3）病毒性病因分析）病毒性病因分析

39、对虾对虾WSSV、IHHNV、MBV、BP、TSV、YHV、IMNV等等11中病毒检测和人工感染，证明中病毒检测和人工感染，证明HPNS不是由病毒所致。不是由病毒所致。亚硝酸氮亚硝酸氮 N均值均值（SD)均值的均值的 95%置信区间置信区间显著性显著性下限下限上限上限发病前发病前4天到天到发病当发病当天浓度最大值天浓度最大值20497.160（509.205）258.845735.475P=0.022没发病塘浓度最大值没发病塘浓度最大值775.000（95.1898）-13.036163.036发病前发病前4天到天到发病当发病当天浓度天浓度平均平均值值20429.915（414.543）235

40、.903623.927P=0.025没发病塘浓度平均值没发病塘浓度平均值718.486（18.3561）1.50935.462 分别比较发病塘与没发病塘亚硝酸氮浓度最大值和平均值，通过单因素方差分析，P0.05,差异显著。结果表明，亚硝酸氮与发病具有密切关系。根据结果分析得亚硝酸氮对发病的阈值为：163ug/L259ug/L。达到或者超过阈值，认为很可能诱发对虾发病。亚硝酸氮和氨氮对发病的影响亚硝酸氮和氨氮对发病的影响（4）环境因素分析）环境因素分析（5）饲料投喂量与对虾发病的关系）饲料投喂量与对虾发病的关系在第40天，第50天，第70天的养殖时间点上，茂名示范点生病塘的当天平均投喂量都极显著

41、（P0.01)的高于塘沽示范点各正常养殖塘。正常塘平均亩产557.36斤，发病塘平均亩产479.2斤。时间示范点样本量平均值（斤/万尾亩）平均值（斤/亩）标准差显著性检验第40天投料量茂名（生病）172.6816.89 0.50816P=0.000塘沽（正常）160.412.11 0.17549第50天投料量茂名（生病）173.3820.92 0.81227P=0.000塘沽（正常）160.884.07 0.47407第70天投料量茂名（生病）73.8723.01 1.26945P=0.001塘沽（正常）161.798.15 1.12595 小结：通过发病时减料前后水质浓度对比可知，饲料投喂量

42、是影响水质因子的重要因素。（5）停止投料对水体理化因子的影响）停止投料对水体理化因子的影响（6）放苗密度与对虾发病的关系）放苗密度与对虾发病的关系样本量平均值(万尾/亩)标准差显著性检验正常143.8791.3180P=0.002生病36.8000.3464单因素方差分析显示：在温州示范点，发病的养殖塘的平均放苗密度极显著的大于没发病的塘（P=0.0020.01）。（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系、肝胰腺坏死症发生

43、与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题1.00E+052.10E+064.10E+066.10E+068.10E+061.01E+071.21E+07123456789各塘水体总菌发病前后对比发病前发病后1.00E+043.00E+045.00E+047.00E+049.00E+041.10E+051.30E+051.50E+051.70E+05123456789各塘水体弧菌发病前后对比发病前发病后珠海：发病前后水体细菌弧菌数量珠海：发病前后水体细菌弧菌数量（1）1-6号塘发病后水体总菌弧菌数量下降，7-9号塘发病后水体总菌弧菌数量上升。（2）1-6号塘发病后采取换水、停料的措

44、施，使得水体细菌弧菌数量下降。7-9号塘在台风雨天过后发病，结合藻类分析推测，由于阴雨天气导致藻类死亡，营养物质不能转化使得细菌弧菌数量上升，导致发病。珠海：发病前后虾体细菌弧菌数量珠海：发病前后虾体细菌弧菌数量1.00E+063.00E+065.00E+067.00E+069.00E+061.10E+071.30E+071.50E+07123456789各塘发病前后虾体总菌对比发病前发病后1.00E+056.00E+051.10E+061.60E+062.10E+062.60E+063.10E+063.60E+064.10E+06123456789各塘发病前后虾体弧菌对比发病前发病后 各塘发

45、病后虾体总菌数量相比发病前有明显下降。说明发病前虾体细菌数量已经达到对虾不能承受的程度，而发病后，经过停料换水等处理，对虾体内的细菌数量有所下降。结合藻类分析的数据，发现藻类数量低于正常养殖水体中藻类数量，珠海基地池塘生态系统并不完整，从而导致致病性细菌的大量繁生，最终导致对虾发病。海南：发病前后水体细菌弧菌数量海南：发病前后水体细菌弧菌数量0.00E+005.00E+041.00E+051.50E+052.00E+052.50E+055月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日水体总菌变化图水体总菌变化图102103104105202203102、202塘，27号发病105塘，

46、31号发病103塘，6月2号发病104、203塘，6月7号发病0.00E+002.00E+034.00E+036.00E+038.00E+031.00E+041.20E+041.40E+041.60E+041.80E+045月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日水体弧菌变化图水体弧菌变化图102103104105202203102、202塘，27号发病105塘，31号发病103塘，6月2号发病104、203塘，6月7号发病海南：发病前后虾体细菌弧菌数量海南：发病前后虾体细菌弧菌数量0.00E+005.00E+041.00E+051.50E+052.00E+052.50E+05

47、3.00E+055月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日虾样总菌虾样总菌变化图变化图102103104105202203102、202塘，27103塘，6月2号0.00E+005.00E+021.00E+031.50E+032.00E+032.50E+033.00E+033.50E+035月18日5月23日5月27日5月31日6月5日6月10日虾样弧菌虾样弧菌变化图变化图102103104105202203102、202塘，27号发病105塘，31号发病103塘，6月2号发病104、203塘，6月7号发病104、203塘，6月7号发病105塘，31号发病 海南养殖对虾虾体总菌

48、弧菌数量较低，与珠海相比低2个数量级，结合理化因子分析，推测在藻类和益生菌的调控作用发挥到最大之后，氨氮等理化因子上升，池塘生态环境主要受到理化因子的胁迫。虾发病后水体总菌升高的有4口塘，下降的有11口塘；水体弧菌升高的有8口塘，下降的有7口塘。结合气候和藻类检测情况，导致细菌升高的原因与降雨倒藻有关，停料等因素导致细菌数的下降。电白：电白：虾发病后虾体总菌升高有6口塘，下降的有9口塘；虾体弧菌升高有7口塘，下降有8口塘。结合气候和藻类检测情况，导致细菌升高的原因与降雨倒藻有关，停料等因素导致细菌数的下降。电白电白（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症

49、发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题发病前后，水体优势藻为微囊藻的占总发病池塘的57.1%，以颤藻为优势藻的池塘占了35.7%，以绿藻为优势藻的池塘占了21.4%，以卵囊藻、伪鱼腥藻和色球藻为优势藻的池塘各占了14.3%。以微囊藻、颤藻等有毒藻类为优势藻的池塘占总发病池塘的92.8%。（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析（一）肝胰腺坏死症病因研究与分析1、肝胰腺坏死症发生与条件致病菌的关系2、肝胰腺坏死症发生与有毒藻类的关系3、肝胰腺坏死症发生与有害理化影子的关系、肝胰

50、腺坏死症发生与有害理化影子的关系4、肝胰腺坏死症发生的生态系统问题海南六口塘均在不同时候有不同程度的发病，其中102,104,202,203发病后几天内有所缓解，发病程度较轻，103,105发病几天后情况有所加重。对比发病前后各理化因子变化，得出，氨氮与发病情况相关性较大。00.10.20.30.40.50.60.70.80.9102103104105202203mg/L发病前后氨氮变化发病前后氨氮变化发病前2天发病前1天发病发病后1天发病后2天00.511.52102103104105202203mg/L发病前后无机氮变化发病前后无机氮变化发病前2天发病前1天发病发病后1天发病后2天00.2