[高等教育]动物细胞培养和核移植技术讲课课件.ppt
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- 关 键 词:
- 高等教育 动物 细胞培养 移植 技术 讲课 课件
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1、动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体制备单克隆抗体制备动物细胞动物细胞核移植核移植(基础)(基础)一、动物细胞培养一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织,将它分散成单取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。基中,让这些细胞生长和增殖。1 1、概念:、概念:原理:原理:细胞增殖细胞增殖动物胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物的组织、器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加加培养液培养液
2、原代培养原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎剪碎动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质有一定量蛋白质2 2、过程、过程动动物细胞培养适物细胞培养适宜的宜的PH为为7.27.4,此环境下,此环境下胃蛋白酶(胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰没有活性,而胰蛋白酶蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么?、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么?1、动物细胞培养取材时,一般是取、动物细胞培养取材时,一般是取胚胎组织或幼龄动胚胎组织或幼龄动物的组织或器官物的组织或器官,请解释原因?,请解释原因?不能不能,因为动物细胞培养适宜的
3、,因为动物细胞培养适宜的PHPH为为7.27.47.27.4,此环境,此环境下胃蛋白酶没有活性。下胃蛋白酶没有活性。胚胎组织或幼龄动物的组织或器官胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛,生命力旺盛,分裂能力强分裂能力强探究探究2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢?、如何将动物组织分散成单个的细胞呢?先用剪刀先用剪刀剪碎剪碎,后用后用胰蛋白酶胰蛋白酶处理处理4.什么叫什么叫细胞贴壁细胞贴壁?5.什么叫什么叫接触抑制接触抑制?悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就当贴壁细胞分裂生长到表面相互接
4、触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。探究探究6 6、如何理解原代培养和传代培养?、如何理解原代培养和传代培养?8 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗?、传代培养的细胞都能一直传代下去吗?9 9、有些为何能一直传下去?、有些为何能一直传下去?上述过程中,在第一培养瓶中培养就是上述过程中,在第一培养瓶中培养就是原代培养原代培养,之后转移到其它培养瓶中培养就是之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养传代培养不都能不都能悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到
5、表面相互接触时,就会停当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,就会停止分裂增殖,称为接触抑制。止分裂增殖,称为接触抑制。原代培养:原代培养:细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定原代培养和传代培养;细如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系?胞株和细胞系?动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞无限传代无限传代原代培养原代培养传代培养传代培养剪碎剪碎胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理胰蛋白酶除了可胰蛋白酶除了可消化细胞间的蛋消化细胞间的蛋
6、白质外,白质外,长时间长时间作用也会消化细作用也会消化细胞膜蛋白胞膜蛋白,对细,对细胞有损伤作用,胞有损伤作用,因此必须控制好因此必须控制好胰蛋白酶的消化胰蛋白酶的消化时间。时间。细胞贴壁、接触抑制细胞贴壁、接触抑制培养液培养培养液培养一般而言,一般而言,10代以内能保持代以内能保持正常二倍体的正常二倍体的核型核型增殖会逐渐缓慢,增殖会逐渐缓慢,以至于完全停止,以至于完全停止,这时部分细胞的这时部分细胞的细胞核可能会发细胞核可能会发生变化,生变化,2 2、过程、过程1 1、无菌、无毒、无菌、无毒 2 2、营养(培养基成分)、营养(培养基成分)3 3、适宜的温度和、适宜的温度和PHPH值值 4
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