《发光免疫分析技术》课件.ppt
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1、 化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术发光免疫分析技术 化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术 慨慨 述述 -化学发光 -化学发光效率 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术 -化学发光剂 -发光剂的标记技术 化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析的类型 -直接化学发光免疫分析 -化学发光酶免疫分析 -电化学发光免疫分析发光免疫分析技术什么是发光免疫分析?什么是发光免疫分析?是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。技术。发光免疫分析技术放射免疫技术酶免疫
2、技术发光免疫技术 三大经典标记技术发光免疫分析技术发光免疫分析技术 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后,由基态 (较低能级)跃迁到激发态(较高能级),然后再 返回到基态,并释放光子的过程。根据形成激发态分子的能量来源不同可分为:光照发光、生物发光、化学发光等。发光的基础知识发光免疫分析技术 光照发光(photoluminescence)指发光剂(荧光素)经短波长的入射光照射后,电子吸收能量跃迁到激发 态,其回至基态时,发射出较长波长的光。生物发光(bioluminescence)是指发生在生物体内的 发光现象,如萤火虫的发光,反应底物为萤火虫荧光 素,在荧光素酶的催化下,利用ATP能,生成激
3、发态氧 化型荧光素,它在回复基态时多余的能量以光子的形 式释放出来。化学发光 发光的基本类型发光的基本类型发光免疫分析技术化学发光(chemiluminescence)是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂)在化学反应时,吸收了反应过程中所产生的化学能,使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态,当电子从激发态回复到基态时,以发射光子的形式释放出能量,这一现象称为化学发光。化学发光又分为:直接化学发光间接化学发光 什么是化学发光什么是化学发光发光免疫分析技术一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态,若被激发的是一个反应产物分子,则这
4、种反应过程叫直接化学发光。反应过程简单地描述如下:A十B C*C*C h为光子,C*表示C处于激发态 直接化学发光直接化学发光发光免疫分析技术若激发能传递到另一个未参加化学反应的分子D上,使D分子激发到电子激发态,D分子从激发态回到基态时发光,这种过程叫间接化学发光。反应过程表示如下:A十B C*C*十D C十D*D*D十h 间接化学发光间接化学发光发光免疫分析技术 化学发光剂和标记技术发光免疫分析技术在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,称为化学发光剂或发光底物。释放能量的化合物,称为化学发光剂或发光底物。一、化
5、学发光剂一、化学发光剂发光免疫分析技术 发光的量子产率高;它的物理-化学特性要与被标记或测定的 物质相匹配;能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物;其化学发光常是氧化反应的结果;在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性 化学发光剂的基本条件化学发光剂的基本条件发光免疫分析技术直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用,直接参与发光反应,它们在化学结构上有产生作用,直接参与发光反应,它们在化学结构上有产生发光的特有基团,可直接标记抗原或抗体。发光的特有基团,可直接标记抗原或抗体。(一)直接化学发光剂(一)直接化学发光剂发光免疫分析技术一一.代表物质:
6、吖啶酯,在碱性条件下被代表物质:吖啶酯,在碱性条件下被H H2 2O O2 2氧化时氧化时,发出发出波长波长470nm470nm的光,具有很高的发光效率,其激发态产物的光,具有很高的发光效率,其激发态产物N-N-甲甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。发光免疫分析技术发光免疫分析技术二二.另一类代表物质:另一类代表物质:三联吡啶钌,三联吡啶钌,RU(bpy)3RU(bpy)32+2+是电化学发光剂,是电化学发光剂,它和电子供体三丙胺(它和电子供体三丙胺(TPATPA)在阳电极表面可同时失去)在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。一个电子而发生氧化反应。三
7、联吡啶钌三联吡啶钌发光免疫分析技术电化学发光剂反应原理电化学发光剂反应原理 发光免疫分析技术利用标记酶的催化作用,使发光剂利用标记酶的催化作用,使发光剂(底物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂。(底物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂。代表物质:代表物质:鲁米诺及其衍生物,鲁米诺及其衍生物,AMPPDAMPPD (二)酶促化学发光剂(二)酶促化学发光剂发光免疫分析技术 鲁米诺增强发光反应原理鲁米诺增强发光反应原理 发光免疫分析技术 AMPPD3-(2-螺旋金刚烷螺旋金刚烷)-4-甲氧基甲氧基-4-(3“-磷酰氧基磷酰氧基)苯苯-1,2-二氧杂环丁烷二氧杂环丁烷发光免疫分析技术发光免疫分析技
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