胶体金免疫层析技术实验培训课件.ppt

1、实验目的实验目的u掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方法及结果的判定法及结果的判定2胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验简简 介介 胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是层析技术研制而成，该技术是90年代初在年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（毒表面抗原（HBsAg）等检测。等检测。3胶体金免疫层析技术

2、实验胶体金免疫层析技术实验胶体金（胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，利用的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠）在还原剂（柠檬酸钠）的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。定的胶体状态，故称胶体金。简简 介介4胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。粒为球形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶

3、液呈紫色，大小不一，质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。形状各异。胶体金的质量判定标准胶体金的质量判定标准简简 介介5胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金标记的原理：胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合。吸引而形成牢固结合。胶体金标记技术（胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。简简 介介

4、6胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金试纸条诊断技术的原理胶体金试纸条诊断技术的原理 以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向的毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。抗体。最常用的是双抗夹心法检测抗原最常用的是双抗夹心法检测抗原7胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金试纸条示意图胶体金试纸条示意图检测线检测线质检线质检线吸收垫吸收垫样品垫样品垫硝酸纤维素膜

5、硝酸纤维素膜连接垫连接垫（胶体金垫）（胶体金垫）背衬背衬（底板）（底板）8胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验测定时将试纸条下端浸入液体标测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经向上端移动，流经C处时使干片处时使干片上的上的免疫金复合物免疫金复合物复溶，并带动复溶，并带动其向膜条渗移。其向膜条渗移。测测 定定9胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验若标本中有待测特异抗原，即可若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，与免疫金复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗

6、体捕获，在膜上显出被固相抗体捕获，在膜上显出红红色反应线条（色反应线条（T）。）。测测 定定10胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验过剩的免疫金复合物继续前行，过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠至参照区与固相抗小鼠IgG结合结合（免疫金复合物中的单克隆抗体（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠为小鼠IgG），），而显出而显出红色质控红色质控线条（线条（R）。测测 定定11胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。测测 定定12胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验胶体金快速诊断技术的特点胶体

7、金快速诊断技术的特点 u简捷快速简捷快速：操作简单，一般只要：操作简单，一般只要5-10min 就就会出结果，而其它方法如会出结果，而其它方法如ELISA需要需要1-2h，PCR 需要时间更长。需要时间更长。u结果易于判定结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。很容易判断。u特异性好特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。记，这决定了它具有很好的特异性。13胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验u病毒性疾病病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等

8、。新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。u寄生虫疾病寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。病、恙虫病。u细菌性疾病细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。：霍乱弧菌、类鼻疽。胶体金快速诊断技术的应用胶体金快速诊断技术的应用14胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验H5亚型亚型AIV尿尿囊液阳性结果囊液阳性结果阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照H5IV细胞细胞毒阳性结果毒阳性结果15胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验1.1.瘦肉精试纸条检测的原理？瘦肉精试纸条检测的原理？2.2.早早孕试纸条检测的原理？孕试纸条检测的原理？课课 后后 思思 考考16胶体金免疫层析技术实验胶体金免疫层析技术实验