应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法培训课件.ppt
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1、应用鼠疫菌全基因组应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机芯片研究黄连抑菌机制的方法制的方法李书宝.中国鼠疫监测现状及疫情态势分析俞东征.我国鼠疫形势与鼠疫控制策略 沈尔礼,张苇,高崇华,等.关于美国、秘鲁鼠疫防治工作的考察报告J.HoltRD,DobsonAP,BegonM,etal.Parasiteestablishmentinhost communitiesJ.EcologyLetters,2003,6(9):8372842.PowerAG,MitchellCE.PathogenspilloverindiseaseepidemicsJ.AmericanNaturalist,2004,164S
2、uppl:S79288.应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法2目的:建立一种应用鼠疫耶尔森菌全基因组芯片研 究黄连对鼠疫耶尔森菌抑制作用分子机制的方法。方法:应用液体稀释法测定黄连对鼠疫耶尔森菌的最小抑菌浓度(MI C);鼠疫耶尔森菌全基因组芯片包含 4005条鼠疫耶尔森菌基因。基因芯片表达谱实验中黄连作用鼠疫耶尔森菌的浓度为10MI C,作用时间为30min;提取并 纯化鼠疫耶尔森菌总RNA;逆转录合成 cDNA;Cy3、Cy5染料标记后,与鼠疫耶尔森菌全基因组芯片杂交;通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果。应用 S AM软件处理结果,应用SAM软件处理结果。应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄
3、连抑菌机制的方法3结论:应用鼠疫耶尔森菌全基因组 DNA芯片可以进行黄连抑制鼠疫耶尔森菌的分子作用机制研究 应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法4 立项依据:鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)可以引起烈性传染病一鼠疫鼠疫,菌对常规的抗生素敏感,链霉素、氯霉素及四环素是鼠疫菌治疗的首选药物。抗生素的有效使用很好地控制了鼠疫的发生、流行以及蔓延。链霉素耐药株的出现使得鼠疫菌治疗药物研究变得尤为迫切。不断探索新的治疗药物是摆在每一位鼠疫防治工作者面前的光荣使命。前期的研究结果表明,在传统中药中黄连对鼠疫菌有较强的抑菌作用。为了继续深入探讨黄连抑制鼠疫菌的作用机制,探索黄连应用于鼠疫预防与治疗的可
4、能性,通过应用鼠疫菌全基因组芯片建立研究黄连抑制鼠疫菌分子机制的方法。应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法5应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法61、材料与方法 1、1 实验材料鼠疫菌201菌株为布氏田鼠疫源地菌株,该菌株对人体无感染性,对小鼠具有高度毒力;分离自锡林郭勒高原布氏田鼠鼠疫疫源地(军事医学科学院微生物流行病研究所提供)。鼠疫菌全基因组基因芯片;由军事医学科学院微生物流行病研究所提供;扫描仪;为Scan Array 4100(Axon Instruments,Inc)处理软件;为GenePix Pro41(Axon Instruments,Inc。)黄连提取物:购自
5、西安中鑫生物技术有限公司。应用鼠疫菌全基因组芯片研究黄连抑菌机制的方法81 2 黄连作用鼠疫菌最小抑菌浓度(MIC)的测定黄连作用于鼠疫菌 的 MI C测定采用液体稀释法进行。准备系列含有1ml TMH液体培养基的试管,将黄连配制成相应浓度后加入含有培养基的试管中,以2倍比稀释法逐管稀释黄连,最终各管黄连的浓度分别为 01、0 05、0025、00125、000625gml,在每个试管中加入15X108CFUml的细菌10ul,试验设空白及重复对照,28培养 24h后,分别转种普通琼脂平板培养基,观察细菌在平板培养基的生长现象,无细菌生长的试管浓度为黄连作用鼠疫菌的 MIC。应用鼠疫菌全基因组
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