尿路恶性肿瘤尿液中的标记物培训课件.ppt

1、尿路恶性肿瘤尿液中尿路恶性肿瘤尿液中的标记物的标记物 FDP：膀胱癌细胞产生血管内皮生长因子，增加外周血管的通透性，外渗的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，在纤维蛋白酶作用下分解为FDP（纤维蛋白降解产物）。敏感性和特异性分别为68%、78%。端粒酶端粒酶：在生殖细胞和肿瘤细胞中出现，体细胞中不表达，敏感性和特异性分别为74%、79%。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物2 透明质酸和透明质酸酶透明质酸和透明质酸酶：二者合用敏感性、特异性达92%、85%。FCM：敏感性、特异性分别为58%、83%（非整倍体细胞）。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物3 BLCA-4：为核基蛋白的一种，对膀胱癌诊断的敏感性、特异性达96%

2、、100%。其它标记物其它标记物：细胞角蛋白、Lewis X抗原、微卫星及表面分子，如M344抗原、19A211、DD23、CD44等。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物4膀胱癌新的肿瘤标记物膀胱癌新的肿瘤标记物-NMP22 膀胱镜检膀胱镜检+组织活检组织活检：膀胱癌诊断的金标准 缺点：侵入性，不适合大量人口普查，主观影响因素大。尿细胞学检查尿细胞学检查：诊断膀胱癌及术后监测复发常用非侵入性检查。缺点：假阴性高、敏感性差。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物5 目前，迫切需要侵入性小，更敏感、更客观的诊断技术。NMPs(nuclear matrix protein,核基蛋白）是细胞核的动态骨架，决定细胞核的形态

3、，维持DNA的三维结构，是细胞核的结构单位。NMP22（NMPs的一种）是尿路上皮特异性肿瘤相关标记物。在BTCC中NMP22因肿瘤细胞凋亡由细胞核释放进入尿中。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物6NMPs的生物学特性的生物学特性 1974年Berezney和Caffy首次提出NMPs的概念。研究证明：NMPs主要由核纤层蛋白、核孔复合体、核糖蛋白网架结构构成，是细胞核内部框架结构的关键部分。决定胞核的形态，调控有丝分裂过程。在DNA复制，RNA合成，激素的连接，基因表达的调控中起重要作用。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物7NMPs与肿瘤的关系与肿瘤的关系 NMPs在许多重要的生理活动中起关键作用，许多细胞

4、癌变都伴随着NMP的改变。许多肿瘤特异性NMPs被发现：Robert(1996)对癌变和正常膀胱组织进行比较后发现了6种存在于癌变组织中的蛋白，而正常组织中无表达，它们是NMPs,BLCA-1 BLCA6。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物8 Mark(1996）对膀胱癌病人的尿液进行检测后发现一种核基质蛋白NMP22的含量特别高，用NMP22值预测膀胱癌病人术后复发的危险性，有较高的敏感性和特异性。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物9NMP22的检测的检测 单抗的制备单抗的制备：膀胱癌细胞核-提纯NMP22-免疫小鼠-获取单抗（mAB302-22,Mab302-18)-制备酶联免疫反应试剂盒（ELLIS）。

5、尿路恶性肿瘤尿液中的标记物10 检测检测：试剂盒（标准品、参照品、检验样品）-与NMP22结合-洗涤后与标有地高辛的单抗反应-与抗地高辛酶联抗体反应-邻苯二胺显色-与标准品吸收光度曲线比较。（抗原在尿液中的浓度直接反映于呈色强度）尿路恶性肿瘤尿液中的标记物11临界值临界值的确定 David等用尿NMP22值诊断膀胱癌的研究中用6.4u/ml和10.0u/ml作临界值，结果与膀胱镜检和活检对比：敏感性 特异性 6.4u/ml 68.2%79.8%10.0u/ml 48.5%91.8%尿路恶性肿瘤尿液中的标记物12NMP22与其它方法的比较与其它方法的比较 Craig 对330名可疑病人进行尿NM

6、P22测定、尿脱落细胞检查与组织活检对比：敏感性 特异性 P值 NMP22 100%85%（临界值10u/ml)0.001 尿脱落细胞 33%100%尿路恶性肿瘤尿液中的标记物14 Albert 按分期分级进行了比较：敏感性（%)NMP22测定 尿脱落细胞检查Ta 83.3 20.0T1 97.7 64.4G1 86.2 37.9G2 97.2 44.4G3 90.0 80.0 尿路恶性肿瘤尿液中的标记物15 Landman 等对47例证实为膀胱癌的病人，分别用NMP22、端粒酶、BTA、尿细胞学检查进行比较（敏感性%）。NMP22和端粒酶比BTA、尿细胞学检查具有更高的灵敏度。尿路恶性肿瘤尿

7、液中的标记物16 分期 分级 Ta T1或更高 Cis G1 G2 G3NMP22 81 82 67 69 86 93端粒酶 80 91 100 65 72 93BTA 40 64 33 13 36 79尿细胞学 40 26 67 6 63 79 尿路恶性肿瘤尿液中的标记物17NMP22与膀胱癌分期分级的关系 David 等对临床分期不同病人的尿NMP22值比较：例数 平均值u/ml 中位数u/ml P值Ta 44 31.1 8.42T1 61 69.3 59.3 0.02尿路恶性肿瘤尿液中的标记物18 Miyanga 等将病人分为表浅组（Tis,Ta,T1),浸润组（T2、T3、T4）进行比

8、较，阳性率前者为70%，后者为100%，两组差异有统计学意义（P0.05)。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物19NMP22与膀胱癌分级的关系 David 等对分级不同病人的尿NMP22进行比较:例数 平均值u/ml 中位数u/ml P值G1 13 12.4 3.02 0.001 (G1 vs G2)G2 27 24.2 9.14 无显著差异G3 26 34.5 39.5 0.001 (G1 vs G3)尿路恶性肿瘤尿液中的标记物20影响影响NMP22的因素的因素 年龄、性别、种族、吸烟等年龄、性别、种族、吸烟等 Gennaro 等报道：健康组样本中50岁比50岁值要低，女性高于男性。与种族、吸烟无明

9、显相关性。不受非泌尿系良性疾病的影响不受非泌尿系良性疾病的影响：如糖尿病、心脏病、自身免疫病等。尿路恶性肿瘤尿液中的标记物21 泌尿系疾病对泌尿系疾病对NMP22的影响的影响：Miyanaga 等对面280位住院和门诊病人、20位健康者进行比较：尿路恶性肿瘤尿液中的标记物22 NMP22 u/ml 阳性比 阳性率 中位数 范围TCC 38/47 80.9%40.1 0.0-6731.3有TCC史 11/32 34.4%6.1 0.5-555.7其它尿路癌 11/26 42.3%6.0 0.0-544.9尿结石 13/26 50.0%11.1 1.4-3207.7尿路感染 19/19 100%1

10、50.6 27.2-58228.4BPH 5/32 15.6%4.2 0.0-258.9其它疾病 15/43 34.9%5.0 0.0-206.6肾脏疾病 11/43 25.6%5.9 0.3-197.1健康者 0/20 0.0%1.8 0.2-6.8尿路恶性肿瘤尿液中的标记物23 不同时段的尿液影响不同时段的尿液影响:Miyanaga 等分别取6,12,18时,三个不同时段的尿液标本检测,结果显示不同时段的尿液标本值,无统计学差异.血尿的影响血尿的影响:Schacfer研究报道,尿标本中含有3.0X106/ml 红细胞时,相当于10个/HP,NMP22值很少超过10u/ml.尿路恶性肿瘤尿液

11、中的标记物24 血清血清NMP22与尿与尿NMP22的关系的关系:Miyanaga,Akaza等对血清,尿NMP22分别测定,结果两者之间无显著差异.尿路恶性肿瘤尿液中的标记物25尿尿NMP22检测的优点检测的优点1.敏感性强:比脱细胞检查更敏感,尤其在 Ta期和高分化肿瘤时,准确性强.2.不受血尿影响:BTA等方法因含有血样造成检查结果有误3.无痛苦，无创伤的检测4.方法简单，快速，费用相对低，结果受主观影响小 尿路恶性肿瘤尿液中的标记物26尿尿NMP22检查适应范围检查适应范围1.临床血尿病人的初期筛查2.膀胱癌病人的临床诊断3.膀胱癌病人的术后定期复查4.膀胱癌术后转移，复发的判断5.高危人群中膀胱癌的普查尿路恶性肿瘤尿液中的标记物27