免疫标记技术培训课件.ppt
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1、免疫标记技术免疫标记技术简 介(immunolabeling technique)是指用荧光素、酶、放射性同位是指用荧光素、酶、放射性同位素等对抗体或抗原进行标记,然后再通过素等对抗体或抗原进行标记,然后再通过检测标记物来观察抗原抗体反应的实验技检测标记物来观察抗原抗体反应的实验技术。术。优点优点:特异、敏度和快速;:特异、敏度和快速;可定性、定量和定位可定性、定量和定位2免疫标记技术免疫标记技术分 类免疫标记技术免疫标记技术 放射免疫技术放射免疫技术 免疫酶技术免疫酶技术 免疫荧光技术免疫荧光技术 免疫金标记技术免疫金标记技术 3免疫标记技术免疫标记技术放射免疫技术 为一种将放射性同位素测量
2、的高度为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性和抗原抗体反应的高度特异性相结合,在灵敏性和抗原抗体反应的高度特异性相结合,在体外测定超微量物质的一项技术体外测定超微量物质的一项技术 常用的放射性同位素有:常用的放射性同位素有:125I、3H、14C、35S、32P 三种方法:三种方法:基于竞争性结合反应的放射免疫分析基于竞争性结合反应的放射免疫分析(RIA)(RIA)非竞争性结合的免疫放射分析非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)(IRMA)放射受体分析技术(放射受体分析技术(RRARRA)4免疫标记技术免疫标记技术放射免疫技术 放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、放射免疫技术具有灵敏度高、特异性
3、强、精密度好的优点,常用于各种激素、微量精密度好的优点,常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定,但具有放射污染的缺点。测定,但具有放射污染的缺点。5免疫标记技术免疫标记技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。效催化作用有机结合的一种方法。辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP)(HRP)碱性磷酸酶碱性磷酸酶(AP)(AP)-灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定和简灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定和简易安全等优点。易安全等优点。6免疫标记技术免疫标记技术免疫酶技术免
4、疫酶技术 酶联免疫酶联免疫吸附技术吸附技术 酶免疫组化技术酶免疫组化技术 双抗体夹心法双抗体夹心法 双抗原夹心法双抗原夹心法 间接法间接法 双位点一步法双位点一步法 分类竞争法竞争法 7免疫标记技术免疫标记技术免疫荧光技术 免疫荧光技术是用荧光标记的抗体或抗原与样品免疫荧光技术是用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等细胞、组织或分离的物质等)中相应的抗原或抗中相应的抗原或抗体结合,以适当检测荧光的技术对其进行分析的体结合,以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法方法 常用于标记的荧光素有:异硫氰酸(常用于标记的荧光素有:异硫氰酸(FITCFITC)、罗)、罗丹明(丹明(RB200
5、RB200)常用的方法有直接法和间接法两种常用的方法有直接法和间接法两种8免疫标记技术免疫标记技术 直接荧光法:把荧光素标记的抗体与待检标本(细直接荧光法:把荧光素标记的抗体与待检标本(细胞悬液、细胞涂片或组织切片)相互作用,洗去未胞悬液、细胞涂片或组织切片)相互作用,洗去未结合荧光标记抗体,在荧光显微镜下观察,有荧光结合荧光标记抗体,在荧光显微镜下观察,有荧光的部分为阳性的部分为阳性。免疫荧光技术9免疫标记技术免疫标记技术 间接荧光法:将特间接荧光法:将特异性抗体(一抗)异性抗体(一抗)和待检标本(细胞和待检标本(细胞悬液、细胞涂片或悬液、细胞涂片或组织切片)相互作组织切片)相互作用后加入荧
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