HIV抗体检测方法培训课件.ppt

1、本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。规范性文件引用n艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-有效版本）n艾滋病病毒抗体快速检测技术手册（中国疾病预防控制中心，2011年版）本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体检测实验室要求n应符合国家对实验室生物安全的 有关要求n实验室的质量控制按本规范相关章节规定本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体检测的目的和要点nHIV抗体检测

2、的目的 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。nHIV抗体检测的要点 1.严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。2.结果判定以试剂盒说明书为标准。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体检测的目的和要点3.筛查试验有反应，须作补充试验。n补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请

3、勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体检测的目的和要点4.筛查试验无反应，不应做补充试验。5.对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。常规HIV抗体检测方法n试剂和样品试剂和样品 试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作

4、为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。筛查方法n酶联免疫吸附试验（ELISA）n化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果n快速检测（RT）及其它检测试验 (1)明胶颗粒凝集试验(PA)(2)免疫渗滤试验 (3)免疫层析试验本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。酶联免疫吸附试验（ELIS

5、A）nHIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗体nHIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体n用酶标仪测定结果n有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。ELISAELISA试验中可能出现的问题和原因分析试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）测定的重复性差1.加样本及试剂量不准2.加样过快，孔间发生污染3.加错样本4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区5.温育时间、洗板、显色时间不一致6.酶标仪滤光片问题本文

6、档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。ELISAELISA试验中可能出现的问题和原因分析试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）白板（阳性对照不显色）1.漏加酶结合物2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物3.漏加显色剂A或B4.终止液当显色剂使用全部板孔都有显色1.洗板不干净2.加底物的吸头被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于仪器或加样头造成的交叉污染本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。ELISA测定中的干扰因素n内源性干扰因素n外源性干扰因素本文档所提供的

7、信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。内源性干扰因素 n人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。外源性干扰因素n常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。酶联免疫吸附试验（ELISA）n优点：

8、准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存n用途：流行病学监测及临床大量标本的检测本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。化学发光或免疫荧光试验n采用发光或荧光底物n既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体n酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物n用发光仪或荧光仪测定结果本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如

9、有不当之处，请联系网站或本人删除。全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果快速检测（RT）及其它检测试验本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。病人条质控条本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。快速检测（RT）及其它检测试验优点:n快速 n单份标本检测 n不需额外试剂或设备 n操作简便缺点:n肉眼判断较主观n价格较贵n结果不易保存（建议拍照保存）本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。

10、HIV筛查试剂的选择n检测目的n实验设施条件n价格n其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体筛查结果的意义及处理n阴性：真阴性 未感染或暴露于HIV病毒 假阴性 注意窗口期n阳性：真阳性 感染或暴露于HIV病毒 假阳性 非特异性反应 操作失误n处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。本文档所提供的信息仅供参考之用

11、，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体确证试验确证试验的试剂：确证试验的试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。确证样品：确证样品：可采用血清、血浆、滤纸干血斑确证试验方法：确证试验方法：免疫印迹试验(WB)和条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。国内常用的确证试验方法是WB和RIBA。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIVHIV确证试剂产品确证试剂产品公司公司试剂试剂原理原理新加坡新加坡MPMP亚太私人医药有限公司亚太私人医药有限公司人类免疫缺陷病毒（人类免疫缺陷病

12、毒（HIV1+2HIV1+2型）抗体检测型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）试剂盒（免疫印迹法）WBWB杭州澳亚生物技术有限公司杭州澳亚生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒抗体确证试剂盒（免疫人类免疫缺陷病毒抗体确证试剂盒（免疫印迹法）印迹法）WBWB上海英旻泰生物技术有限公司上海英旻泰生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2(HIV 1+2型型)抗体检测抗体检测试剂盒试剂盒(免疫印迹法免疫印迹法)WBWB北京万泰生物药业股份有限公司北京万泰生物药业股份有限公司人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2(HIV 1+2型型)抗体检测抗体检测试剂盒试剂盒(重组免疫印迹法重组

13、免疫印迹法)RIBARIBAAbbottAbbottSlot immunoblot stripSlot immunoblot stripRIBARIBAInnogeneticsInnogeneticsINNO-LIA HIV I/II ScoreINNO-LIA HIV I/II ScoreRIBARIBA本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。a 强阳性对照（强阳性对照（HIV-1和和HIV-2）b弱阳性对照（弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照阴性对照d典型的典型的HIV-2血清阳性反应血清阳性反应本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作

14、为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。IMT本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。MP确证试剂盒判定标准：本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。n原因：HIV感染早期、HIV感染晚期、非特异性反应、污染n依据：流行病学资料；临床表现；WB条带等n处理：核酸检测、2-4周后随访、带型消失或无进展、出现新带型、重采血 本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV抗体n母亲 HIV 抗体经胎盘进入胎儿，出生时

15、新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染n出生时母亲的抗体，8090%在生后 912 个月消失，出生后 18 个月基本上全部消失n18 个月后儿童 HIV抗体仍然阳性，视为自身感染产生的抗体1818个月以下婴幼儿的个月以下婴幼儿的HIVHIV诊断诊断本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。婴幼儿HIV感染的抗体检测适用于：nHIV感染产妇所生婴幼儿；n母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。n婴儿12个月时进行HIV抗体检测 阴性排除感染，纳入正常儿童保健；阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗

16、体检测，结果阴性排除感染。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。结果报告n筛查报告筛查报告 HIV抗体筛查试验报告使用附表1（HIV抗体筛查检测报告）。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。结果报告n复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。nHIV抗体筛查报告需由一名检验人员和一名审核者签字。本文档所提供的信息仅

17、供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。结果报告n确证报告确证报告n符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。n符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。结果报告n符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测或2-4周后随访，尽早明确诊断。n符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定”，在备注中应

18、注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。nHIV抗体确证检测报告应在收到样品后的7个工作日内发出。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。质量控制n酶免或发光法抗体检测的室内质量控制 试剂盒内部对照 室内质控品 Levey-Jennings质控图 室内质控其他方式“即刻法”质控本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。质量控制n快速法抗体检测质控 试剂内对照 室内质控品对照 开展抗体相关检测的实验室须参加有资质机构组织的能力验证，或室间比对。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学

19、依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。艾滋病抗体快速检测质量控制艾滋病抗体快速检测质量控制n依据艾滋病病毒抗体快速检测技术手册 （2011年版）第8章本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。艾滋病抗体快速检测质量控制艾滋病抗体快速检测质量控制n检测前质控检测前质控：1.样品要求唯一编号，检测前应仔细核对。2.检测点的环境温湿度应符合检测试剂盒说明书的要求，并做好相关的记录。3.保证试剂在有效期内使用。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。艾滋病抗体快速检测质量控制艾滋

20、病抗体快速检测质量控制n检测过程质控检测过程质控：1.做好实验过程中相关信息的记录：样品、检测试剂、操作者等。2.保存在冰箱的试剂需在室温平衡后再使用；剩余的试剂条应立即封存冷藏；室温性下保存的试剂也应避免高温。3.按照试剂厂家提供的说明书严格操作。（时间）4.判定结果时，质控带必须出现，实验才能成立，否则需要重做并查找原因。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。艾滋病抗体快速检测质量控制艾滋病抗体快速检测质量控制n检测后质控检测后质控：1.判读结果时应保证光线充足。对难以判读的条带建议又两人判读。2.复核样品编号后填写实验结果。3.清

21、洁并处理实验废弃物。4.发放规范的检测报告，整理实验过程中的各项记录存档。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。试剂试剂-1有反应有反应 无反应无反应 试剂试剂1双份或双孔检测或两双份或双孔检测或两种试剂种试剂均有反应均有反应 一有反应一有反应,一无反应一无反应 均无反应均无反应补充实验补充实验报告报告HIV抗体阴性抗体阴性 图图2 2 使用抗体检测试剂的检测流程使用抗体检测试剂的检测流程本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。阳性阳性免疫印迹试验免疫印迹试验（WB/RIBA）阴性

22、阴性不确定不确定核酸试验核酸试验或或2-42-4周后周后随访随访出现出现HIV-2HIV-2指示带指示带根据情况根据情况进一步进一步检测检测HIV-2报告报告HIV-1抗体阴性抗体阴性报告报告HIV-1抗体阳性抗体阳性图图5 5 免疫印迹试剂（免疫印迹试剂（WB/RIBA）试验流程）试验流程本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。HIV1/2抗体或抗原抗体联合检测试验抗体或抗原抗体联合检测试验无反应无反应有反应有反应方案方案1相同样本相同试相同样本相同试验双孔复试验双孔复试方案方案2复试结果无复试结果无 反应反应 -,-复试结果有反复试结

23、果有反应应-,+；+,+阴性阴性报告血液检报告血液检测合格测合格反应性反应性 报告血报告血液检测不合格。液检测不合格。如需进一步检测，如需进一步检测，参照临床诊断检参照临床诊断检测策略测策略图图9 9血液抗原抗体筛查试验流程血液抗原抗体筛查试验流程本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。无反应不确定有反应无反应有反应有反应无反应有反应有反应无反应无反应艾滋病感染孕妇所生儿童12个月进行HIV抗体筛查试验用另一种筛查试剂再次检测18个月时再进行HIV抗体筛查试验试剂1双份或双孔检测，或原有试剂加另一种试剂抗体补充试验报告HIV抗体阴性报告HIV抗体阳性提供咨询，继续随访，进行核酸检测等补充试验图图12 12 艾滋病感染产妇所生儿童艾滋病感染产妇所生儿童HIVHIV抗体检测流程抗体检测流程本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。谢谢！谢谢！