G兼性厌氧杆菌培训课件.ppt
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- 兼性厌氧 杆菌 培训 课件
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1、GG兼性厌氧杆菌兼性厌氧杆菌第一节第一节 肠杆菌科(有肠杆菌科(有2828个属)个属)共同特征:共同特征:1 1G G中等大小杆菌,运动者周身鞭毛,无芽胞,中等大小杆菌,运动者周身鞭毛,无芽胞,无荚膜(个别有),非抗酸染色。无荚膜(个别有),非抗酸染色。2 2需氧兼性厌氧,普通培养基上生长好。需氧兼性厌氧,普通培养基上生长好。3 3糖发酵产酸(糖发酵产酸(+)或产酸产气。)或产酸产气。4 4接触酶阳性(志贺氏菌除外)。接触酶阳性(志贺氏菌除外)。5 5硝酸盐还原试验阳性(欧文氏菌除外)硝酸盐还原试验阳性(欧文氏菌除外)6 6在含在含0.5%0.5%胆盐的培养基上生长。胆盐的培养基上生长。G兼性
2、厌氧杆菌2G兼性厌氧杆菌3(二)培养特性(二)培养特性1 1普通培养基上:生长良好,普通培养基上:生长良好,37 2437 24h h 形成圆形,形成圆形,光滑,隆起,湿润,半透明灰白色菌落。光滑,隆起,湿润,半透明灰白色菌落。2 2普通肉汤:均匀浑浊,管底有粘性沉淀,管壁普通肉汤:均匀浑浊,管底有粘性沉淀,管壁有菌环。有菌环。3 3麦康凯琼脂:红色菌落(沙门氏菌无色)麦康凯琼脂:红色菌落(沙门氏菌无色)原理,麦康凯平板含有乳糖有胆盐,分解乳糖的细原理,麦康凯平板含有乳糖有胆盐,分解乳糖的细菌产酸使指示剂变红,胆盐有利于肠杆菌科细菌生菌产酸使指示剂变红,胆盐有利于肠杆菌科细菌生长,对其它菌有抑
3、制作用。长,对其它菌有抑制作用。G兼性厌氧杆菌4大肠杆菌微菌落照片大肠杆菌微菌落照片 G兼性厌氧杆菌5大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌平板菌落照片大肠杆菌平板菌落照片G兼性厌氧杆菌64 4伊红美蓝琼脂:黑色带金属闪光的菌落(沙门伊红美蓝琼脂:黑色带金属闪光的菌落(沙门氏菌无色)。氏菌无色)。原理:伊红,美兰均为指示剂,又能抑原理:伊红,美兰均为指示剂,又能抑G+G+生长,含生长,含有乳糖。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷,有乳糖。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷,染上红色,再与美兰结合形成紫黑色菌落,不分解染上红色,再与美兰结合形成紫黑色菌落,不分解乳糖不着色,伊红美蓝
4、不结合,故沙门氏菌无色。乳糖不着色,伊红美蓝不结合,故沙门氏菌无色。5 5远藤氏琼脂:带金属光泽的红色菌落。远藤氏琼脂:带金属光泽的红色菌落。G兼性厌氧杆菌7G兼性厌氧杆菌8(三)生化特征(三)生化特征G G 乳乳 麦麦 蔗蔗 靛基质实验:靛基质实验:+(I I);MR MR(甲基红试验)甲基红试验)+(M M)VPVP(乙酰甲基醇)(乙酰甲基醇)(ViVi););柠檬酸基利用试验(柠檬酸基利用试验(C C)I M Vi C +I M Vi C +硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验+、H H2 2S S、尿素分解尿素分解三糖铁:斜面黄色三糖铁:斜面黄色/底部黄色,不产生底部黄色,不产生H H2 2S
5、 S。G兼性厌氧杆菌9G兼性厌氧杆菌102 2K K抗原:位于菌体表面的荚膜或被膜中,在抗原:位于菌体表面的荚膜或被膜中,在8080种种K K抗原中,除抗原中,除K88K88,K99K99是两种蛋白质抗原外,其余是两种蛋白质抗原外,其余均为多糖。具有均为多糖。具有K K抗原的菌株不能被其相应的抗抗原的菌株不能被其相应的抗O O血血清所凝集叫清所凝集叫“O O不凝集性不凝集性”。因为。因为K K抗原可抑制活细抗原可抑制活细菌在相应抗菌在相应抗O O血清中的凝集反应,这样可作为判定血清中的凝集反应,这样可作为判定大肠杆菌是否具有大肠杆菌是否具有K K抗原的一个标准。抗原的一个标准。据耐热性不同,据
6、耐热性不同,K K抗原又分为:抗原又分为:L L、A A、B B 三型。三型。G兼性厌氧杆菌11L L型型K K抗原:对热敏感抗原:对热敏感100 1100 1h h破坏其抗原性,并失去破坏其抗原性,并失去与相应抗体的结合力和凝集性,位于被膜中,偶见于与相应抗体的结合力和凝集性,位于被膜中,偶见于荚膜中。荚膜中。A A型型K K抗原:耐抗原:耐100 1100 1h h,但但121 2.5121 2.5h h破坏其抗原破坏其抗原性和性和O O不凝集不凝集 性,但保留与相应抗体结合能力。位于性,但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中,抗荚膜中,抗A A血清可使具有相应血清可使具有相应A A抗原的菌
7、体出现荚膜抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。肿胀现象。B B型型K K抗原:抗原:100 1100 1h h 破坏其抗原性与相应抗体的凝破坏其抗原性与相应抗体的凝集性,但保留其与相应抗体结合力。集性,但保留其与相应抗体结合力。G兼性厌氧杆菌12G兼性厌氧杆菌13(五)致病性(五)致病性 大多数是在正常条件下不致病的共栖菌,但特大多数是在正常条件下不致病的共栖菌,但特定条件下,如移位侵入肠外组织或器官可致肠杆定条件下,如移位侵入肠外组织或器官可致肠杆菌病;但也有极少数是病原性大肠杆菌。菌病;但也有极少数是病原性大肠杆菌。G兼性厌氧杆菌14G兼性厌氧杆菌15(一)产肠毒素大肠杆菌:由粘附表性菌毛和肠毒素
8、两类毒力(一)产肠毒素大肠杆菌:由粘附表性菌毛和肠毒素两类毒力因子构成,具致病力与二者密切相关,缺一不可。因子构成,具致病力与二者密切相关,缺一不可。1 1粘附素性菌毛:又叫粘附素或定居因子,其对应的抗原叫粘附素性菌毛:又叫粘附素或定居因子,其对应的抗原叫粘附素抗原或定居因子抗原。已发现的粘附素有粘附素抗原或定居因子抗原。已发现的粘附素有F4F4(K K8888)、)、F F5 5(K K9999)、)、F6F6(987P987P),),F F4141,F F4242,F F1717。它不是导致宿主腹泻的它不是导致宿主腹泻的直接致病因子,但是构成直接致病因子,但是构成ETECETEC感染的重要
9、毒力因子。感染的重要毒力因子。ETECETEC必必须首先粘附于宿主的小肠上皮细胞,才能避免肠蠕动和肠液分须首先粘附于宿主的小肠上皮细胞,才能避免肠蠕动和肠液分泌的清除作用,并得以在肠内定居和繁殖,进而发挥致病作用。泌的清除作用,并得以在肠内定居和繁殖,进而发挥致病作用。2 2 在体内或体外生长时产生并分泌到细胞外的一种蛋白质毒在体内或体外生长时产生并分泌到细胞外的一种蛋白质毒素,根据对热的耐受性不同分为:素,根据对热的耐受性不同分为:G兼性厌氧杆菌16不耐热肠毒素(不耐热肠毒素(LTLT):):65 30min65 30min灭活,有抗原性。作用于小灭活,有抗原性。作用于小 肠和兔回肠引起肠液
10、积蓄,引起水样腹泻。肠和兔回肠引起肠液积蓄,引起水样腹泻。耐热肠毒素(耐热肠毒素(STST):):100 30min100 30min不灭活,无抗原性。又可分为:不灭活,无抗原性。又可分为:STaSTa:来源猪,牛来源猪,牛STST:对人和猪、牛、羊均有肠毒性。对人和猪、牛、羊均有肠毒性。ST bST b:来源于人来源于人STST:仅在猪源仅在猪源ETECETEC中产生。中产生。ETECETEC的致病机理:通过口腔进入宿主的小肠,以其菌毛粘附素黏的致病机理:通过口腔进入宿主的小肠,以其菌毛粘附素黏附于肠粘膜上,以抵御肠蠕动和流动肠液的冲刷作用,从而定居附于肠粘膜上,以抵御肠蠕动和流动肠液的冲刷
11、作用,从而定居于肠内,大量繁殖。此时大量产生并释放肠毒素,对其靶细胞产于肠内,大量繁殖。此时大量产生并释放肠毒素,对其靶细胞产生毒性作用。导致肠绒毛细胞吸收功能降低,造成在肠管内水和生毒性作用。导致肠绒毛细胞吸收功能降低,造成在肠管内水和电解质大量积蓄,引起水样腹泻和迅速脱水。电解质大量积蓄,引起水样腹泻和迅速脱水。G兼性厌氧杆菌17(二)产类志贺毒素大肠杆菌(二)产类志贺毒素大肠杆菌(SLTECSLTEC)又称产又称产VeroVero细胞毒素大肠杆菌,系一类在体内或体细胞毒素大肠杆菌,系一类在体内或体外生长可产生类志贺毒素的病原性大肠杆菌。可致外生长可产生类志贺毒素的病原性大肠杆菌。可致猪的
12、水肿,以头部,肠素膜和胃壁浆液性水肿为特猪的水肿,以头部,肠素膜和胃壁浆液性水肿为特征,常伴有共济失调,麻痹或惊厥等神经症状,发征,常伴有共济失调,麻痹或惊厥等神经症状,发病率低但致死率高,有两类毒力因子:病率低但致死率高,有两类毒力因子:1 1粘附性菌毛:粘附性菌毛:F18F18,它有助于细菌在猪肠粘膜上它有助于细菌在猪肠粘膜上皮细胞定居和繁殖。皮细胞定居和繁殖。G兼性厌氧杆菌18G兼性厌氧杆菌19(六)微生物诊断(六)微生物诊断1 1取材:肠系膜淋巴结,心,肝,脾,涂片染色镜检:取材:肠系膜淋巴结,心,肝,脾,涂片染色镜检:G G中等中等大小杆菌。大小杆菌。2 2分离培养:接种麦康凯平板和
13、血平板划线分离,挑取麦康凯分离培养:接种麦康凯平板和血平板划线分离,挑取麦康凯上的红色菌落或血平板上呈上的红色菌落或血平板上呈溶血的菌落(仔猪黄痢与水肿病菌溶血的菌落(仔猪黄痢与水肿病菌株)进行以下生化实验。株)进行以下生化实验。3 3三糖铁:斜面黄色三糖铁:斜面黄色/底部黄色,有气体产生。底部黄色,有气体产生。4 4接种普通肉汤:接种普通肉汤:24362436h h 均匀混浊,底部有粘稠沉淀,液面有均匀混浊,底部有粘稠沉淀,液面有菌环。菌环。5 5生化试验:生化试验:G G 蔗蔗 麦麦 乳乳 IMViCIMViC +-+-6 6动物致病性试验:动物致病性试验:2424h h 肉汤培养小白鼠腹
14、腔肉汤培养小白鼠腹腔0.2-0.40.2-0.4mlml,242448h48h小鼠死亡。小鼠死亡。G兼性厌氧杆菌207 7对对ETECETEC各种粘附性抗原鉴定:应先将待检菌在各种粘附性抗原鉴定:应先将待检菌在粘附素专用培养基上培养。培养物用已知的各种粘粘附素专用培养基上培养。培养物用已知的各种粘附素单因子血清或克隆抗体作玻板凝集,或用免疫附素单因子血清或克隆抗体作玻板凝集,或用免疫荧光,荧光,ELISAELISA等作其它血清学方法鉴定,也可用等作其它血清学方法鉴定,也可用MRHMRH及其抑制试验及其抑制试验MRHIMRHI以及体外肠上皮细胞吸附与吸附以及体外肠上皮细胞吸附与吸附抑制试验加以鉴
15、定。抑制试验加以鉴定。G兼性厌氧杆菌21G兼性厌氧杆菌22(七)防治(七)防治1 1以抗粘附毒素免疫为基础的含单价或多价菌毛以抗粘附毒素免疫为基础的含单价或多价菌毛抗原的灭活菌苗或亚单位苗。抗原的灭活菌苗或亚单位苗。2 2以抗肠毒素免疫为主的类毒素苗或以抗肠毒素免疫为主的类毒素苗或LI-BLI-B亚单位亚单位苗。苗。3 3表达一种或两种粘附素的基因工程苗表达一种或两种粘附素的基因工程苗 K K8888 K K9999双价基因工程苗。双价基因工程苗。G兼性厌氧杆菌23G兼性厌氧杆菌24(二)培养特性(二)培养特性麦康凯平板:无色菌落,麦康凯平板:无色菌落,伊红美蓝琼脂:无色(大肠杆菌黑色带金属光
16、泽)伊红美蓝琼脂:无色(大肠杆菌黑色带金属光泽)运腾氏:无色(大肠杆菌为红色带金属闪光菌落)。运腾氏:无色(大肠杆菌为红色带金属闪光菌落)。(三)生化特性:(三)生化特性:三糖铁斜面:斜面红色三糖铁斜面:斜面红色/底部黄色(若有底部黄色(若有H H2 2S S产生,底部为黑色)产生,底部为黑色)5 5生化试验:生化试验:G G 蔗蔗 麦麦 乳乳 IMViCIMViC -+-+-+-+G兼性厌氧杆菌25G兼性厌氧杆菌262 2H H抗原:蛋白质性质的鞭毛抗原,有抗原:蛋白质性质的鞭毛抗原,有6363种。种。H H抗抗原可分为第原可分为第1 1相和第相和第2 2相两种。第相两种。第1 1相相H H
17、抗原用小写英抗原用小写英文字母表示,特异性高故称特异相;第文字母表示,特异性高故称特异相;第2 2相抗原用相抗原用阿拉伯数字表示,为许多沙门氏菌所共有故称非特阿拉伯数字表示,为许多沙门氏菌所共有故称非特特异相。多数沙门氏菌有第特异相。多数沙门氏菌有第1 1和第和第2 2两相两相H H抗原称为抗原称为双相菌,常发生位相变异。双相菌,常发生位相变异。例如将一个双相菌在平板上划线在所得菌落中,有例如将一个双相菌在平板上划线在所得菌落中,有的有第的有第1 1相相H H抗原,有的有第抗原,有的有第2 2相相H H抗原。若任意挑取抗原。若任意挑取1 1个菌落,在培养基上多次传代,其后代又可出现个菌落,在培
18、养基上多次传代,其后代又可出现部分是第部分是第1 1相而另一部分是第相而另一部分是第2 2相的菌落,这种两个相的菌落,这种两个相的相的H H抗原可以交相产生的现象称为位相变异。在抗原可以交相产生的现象称为位相变异。在鉴别对只能检出鉴别对只能检出1 1个相,而测不出另一个相。个相,而测不出另一个相。G兼性厌氧杆菌273 3K K抗原:被膜抗原,与毒力有关,又称抗原:被膜抗原,与毒力有关,又称ViVi抗原,抗原,60 160 1h h破坏破坏其凝集性和免疫原性。有其凝集性和免疫原性。有K K抗原的菌株不能相应的抗抗原的菌株不能相应的抗O O血清凝集血清凝集。在多次传代后。在多次传代后K K抗原会丢
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