革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌培训课件.ppt
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- 阳性 兼性厌氧 杆菌 培训 课件
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1、革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌本章内容本章内容 革兰阳性无芽胞杆菌革兰阳性无芽胞杆菌 白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌 产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌 红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌 革兰阳性需氧芽胞杆菌属革兰阳性需氧芽胞杆菌属 炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌 蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌2教学要求教学要求 掌握掌握白喉棒状杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽孢杆菌生物学性状与炭疽芽孢杆菌生物学性状与微生物学检验。微生物学检验。熟悉产单核细胞李斯特菌的生物学性状与微生物熟悉产单核细胞李斯特菌的生物学性状与微生物学检查法。学检查法。了解红斑丹毒丝菌、蜡样芽胞杆菌的生物学性状了解红斑丹毒丝菌、蜡样芽胞杆
2、菌的生物学性状与微生物学检查与微生物学检查革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌3第一节第一节 革兰阳性无芽胞杆菌革兰阳性无芽胞杆菌(一(一)生物学特性)生物学特性1.形态结构形态结构:革兰氏染色阳性,菌体细长弯曲,:革兰氏染色阳性,菌体细长弯曲,一端或两端一端或两端膨大呈棒状膨大呈棒状,常排列呈,常排列呈V、L等文字等文字形。无鞭毛、无荚膜、无芽胞。用亚甲蓝或奈形。无鞭毛、无荚膜、无芽胞。用亚甲蓝或奈瑟染色,菌体一端、两端或中央可见明显的浓瑟染色,菌体一端、两端或中央可见明显的浓染颗粒,称为染颗粒,称为异染颗粒异染颗粒,主要成分是核糖核酸,主要成分是核糖核酸和多磷酸盐。和多磷酸盐。一、白喉棒状杆菌一、白
3、喉棒状杆菌革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌4电镜下的白喉杆菌电镜下的白喉杆菌革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌5形态与染色形态与染色革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌6革兰染色白喉棒状杆菌革兰染色白喉棒状杆菌革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌72.培养特性:培养特性:本菌为需氧或兼性厌氧菌。对营养要求较严格,本菌为需氧或兼性厌氧菌。对营养要求较严格,在一般培养基上不生长。在一般培养基上不生长。在在吕氏血清斜面吕氏血清斜面上生长快,菌落为细小有光泽、上生长快,菌落为细小有光泽、圆形、灰白色、凸起、光滑的菌落;涂片染色菌体圆形、灰白色、凸起、光滑的菌落;涂片染色菌体形态典型、异染颗粒明显形态典型、异染颗粒明显。在亚碲酸钾血平板
4、上,可形成黑色或灰黑色菌在亚碲酸钾血平板上,可形成黑色或灰黑色菌落。此培养基可作为选择和鉴定之用。落。此培养基可作为选择和鉴定之用。在麦康凯平板上不生长。在麦康凯平板上不生长。革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌8亚碲酸钾血平板菌落:亚碲酸钾血平板菌落:革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌93.3.生化反应生化反应发酵葡萄糖、麦芽糖,产酸不产气。发酵葡萄糖、麦芽糖,产酸不产气。触酶和硝酸盐还原试验阳性,氧化酶阴性。触酶和硝酸盐还原试验阳性,氧化酶阴性。不分解尿素,不产生吲哚。不分解尿素,不产生吲哚。4.4.抵抗力抵抗力 对热抵抗力不强,煮沸对热抵抗力不强,煮沸1 1分钟死亡。分钟死亡。对干燥、对干燥、寒冷和日光的
5、抵抗力较其他无芽胞细菌强,对寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞细菌强,对一般消毒剂敏感。一般消毒剂敏感。革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌10(二)微生物学检验(二)微生物学检验 标本的采集标本的采集 鉴定鉴定 直接涂片直接涂片 分离培养分离培养 毒力试验毒力试验革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌11用无菌长棉拭子从疑为假膜的边缘采取分用无菌长棉拭子从疑为假膜的边缘采取分泌物,也可采取鼻咽部或扁桃腺分泌物。作泌物,也可采取鼻咽部或扁桃腺分泌物。作培养时应在抗生素前采取,如不能立即送检,培养时应在抗生素前采取,如不能立即送检,应将标本浸于无菌生理盐水或应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油中,标甘油中,标本应取双份。
6、本应取双份。1.标本的采集标本的采集革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌122.2.鉴定鉴定 直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检革兰染色革兰染色:观察形态、染色:观察形态、染色异染颗粒染色异染颗粒染色:观察异染颗粒:观察异染颗粒初步报告初步报告:检出具有异染颗粒的革兰阳性杆菌:检出具有异染颗粒的革兰阳性杆菌 分离培养:分离培养:同时接种血平板及吕氏斜面或亚碲酸同时接种血平板及吕氏斜面或亚碲酸钾血平板钾血平板吕氏斜面吕氏斜面:生长迅速,涂片镜检异染颗粒明显:生长迅速,涂片镜检异染颗粒明显亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血平板:黑色菌落:黑色菌落革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌13鉴定要点鉴定要点 革兰阳性,着色不均匀,菌体
7、细长弯曲,排列不革兰阳性,着色不均匀,菌体细长弯曲,排列不规则,有规则,有X X、V V形态,具有异染颗粒形态,具有异染颗粒 触酶阳性,无动力,无芽胞触酶阳性,无动力,无芽胞 吕氏血清斜面的菌落:灰白色、隆起、湿润吕氏血清斜面的菌落:灰白色、隆起、湿润 亚碲酸钾血平板的菌落:黑色或灰黑色亚碲酸钾血平板的菌落:黑色或灰黑色革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌14毒力试验毒力试验 人类临床标本中检出白喉棒状杆菌,并非人类临床标本中检出白喉棒状杆菌,并非都能产生毒素,产生外毒素的菌株是由于都能产生毒素,产生外毒素的菌株是由于携带携带-棒状杆菌噬菌体棒状杆菌噬菌体。可用。可用 Elek Elek 琼脂琼脂扩散法
8、体外试验或用动物体内毒力测定。扩散法体外试验或用动物体内毒力测定。革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌15(1)(1)琼脂平板毒力试验:琼脂平板毒力试验:将含有将含有2020牛血清肉汤琼脂注于平皿牛血清肉汤琼脂注于平皿中,将浸有中,将浸有lOOulOOumlml抗毒素血清的滤纸条抗毒素血清的滤纸条沉于琼脂内,在与滤纸条垂直方向将待检沉于琼脂内,在与滤纸条垂直方向将待检菌划线接种,同时接种标准产毒株作为阳菌划线接种,同时接种标准产毒株作为阳性对照。性对照。3737培养培养 2448h 2448h,若菌苔两侧,若菌苔两侧出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线,并与出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线,并与其邻近的标准产毒
9、株的沉淀线相吻合,则其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合,则为产毒株。为产毒株。革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌16ElekElek平板试验结果平板试验结果沉淀线沉淀线(阳性阳性)含白喉抗毒素滤纸片含白喉抗毒素滤纸片白喉杆菌菌苔白喉杆菌菌苔革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌17(2)(2)动物试验动物试验 采用家兔皮内试验法。取待检菌的采用家兔皮内试验法。取待检菌的48h48h肉汤肉汤培养液培养液O O2ml2ml,注射在去毛的一侧体壁皮内,注射在去毛的一侧体壁皮内,5h5h后注射后注射500U500U白喉抗毒素血清,白喉抗毒素血清,30min30min后再次注后再次注射同样的培养液于动物去毛的另一侧体壁皮内射
10、同样的培养液于动物去毛的另一侧体壁皮内作为对照。经作为对照。经2472h2472h后,若注射抗毒素前接种后,若注射抗毒素前接种培养液的部位发生红肿与坏死,而对照部位不培养液的部位发生红肿与坏死,而对照部位不发生任何变化,则说明待检菌株具有毒力。发生任何变化,则说明待检菌株具有毒力。革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌18(三)临床意义(三)临床意义 传染源:患者或带菌者传染源:患者或带菌者 致病物质:白喉外毒素(由携带致病物质:白喉外毒素(由携带-棒状杆菌噬菌棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生)体的白喉杆菌产生)经呼吸道飞沫感染,引起白喉。经呼吸道飞沫感染,引起白喉。假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因
11、假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因 中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因 抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌19二、产单核细胞李斯特菌二、产单核细胞李斯特菌(一)生物学特性(一)生物学特性(二)微生物检验(二)微生物检验(三)临床意义(三)临床意义革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌20(一)微生物特性(一)微生物特性 形态与染色:形态与染色:G G+短小杆菌或球杆菌,常成双排列,短小杆菌或球杆菌,常成双排列,无芽胞无芽胞 培养特性:培养特性:最适最适30303737,4 4能生长,在血琼能生
12、长,在血琼脂平板上,形成较小、圆形、光滑而有狭窄脂平板上,形成较小、圆形、光滑而有狭窄-溶溶血环的菌落,耐血环的菌落,耐8.5%NaCl8.5%NaCl,半固体培养中动力阳,半固体培养中动力阳性(性(倒伞形,倒伞形,是本菌特征之一)是本菌特征之一)。生化反应:生化反应:触酶(触酶(+),甲基红(),甲基红(+),),VPVP(+),),CAMPCAMP(+),发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖等,产酸),发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖等,产酸不产气不产气 革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌21(二)微生物学检验(二)微生物学检验 标本采集:标本采集:血液、脑脊液、分泌物及病变组织等血液、脑脊液、分泌物及病变组织等 鉴
13、定:鉴定:直接涂片:直接涂片:脑脊液离心后取沉淀涂片,其它直接涂片脑脊液离心后取沉淀涂片,其它直接涂片分离培养:分离培养:脑脊液:血琼脂平板脑脊液:血琼脂平板 血标本:增菌后,再接种血琼脂平板血标本:增菌后,再接种血琼脂平板 咽拭子、组织和粪便等:接种于肉汤培养基中,置于咽拭子、组织和粪便等:接种于肉汤培养基中,置于4 4冰箱中冷增菌,然后转种于血琼脂平板冰箱中冷增菌,然后转种于血琼脂平板革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌22(二)微生物学检验(二)微生物学检验鉴定特点:鉴定特点:G+G+杆菌,细菌在湿片中呈翻筋斗运杆菌,细菌在湿片中呈翻筋斗运动动倒伞形生长,在血平板上形成狭窄倒伞形生长,在血平板上形
14、成狭窄-溶血环溶血环CAMPCAMP阳性,与金葡协同溶血阳性,木糖、甘露阳性,与金葡协同溶血阳性,木糖、甘露醇、醇、H2SH2S(-)革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌23(三)临床意义(三)临床意义 李斯特菌属有李斯特菌属有7 7个种,只有该菌对人和动物致病个种,只有该菌对人和动物致病 分布广泛,土壤、水、植物、人和动物粪便中均分布广泛,土壤、水、植物、人和动物粪便中均存在,亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出存在,亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出 能引起多种野生动物和家畜感染(羊、马、狗、能引起多种野生动物和家畜感染(羊、马、狗、猫、鸟、鱼等)猫、鸟、鱼等)正常人粪便带菌率达正常人粪便带菌率达10%10%
15、左右,左右,70%70%的人可短期带的人可短期带菌。新生儿、免疫功能降低者,易受该菌感染菌。新生儿、免疫功能降低者,易受该菌感染革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌24 健康带菌者是主要的传染源健康带菌者是主要的传染源 污染食物,粪污染食物,粪-口途径传播,通过肠道扩散全身口途径传播,通过肠道扩散全身 胎盘和产道胎盘和产道感染新生儿(脑炎、脑膜炎、败血症)感染新生儿(脑炎、脑膜炎、败血症)接触病畜及产品接触病畜及产品眼和皮肤的局部感染、脓肿、尿道炎眼和皮肤的局部感染、脓肿、尿道炎 氨基糖苷类抗生素可增强青霉素的抗菌活性,但头孢类不氨基糖苷类抗生素可增强青霉素的抗菌活性,但头孢类不能用于此菌的临床治疗能用
16、于此菌的临床治疗(三)临床意义(三)临床意义 革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌25三、红斑丹毒丝菌 生物学性状 微生物学检查 临床意义革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌26(一)生物学性状 形态与染色:G+短小杆菌 培养特性:需氧或兼性厌氧,最适温度30 35,pH 7.27.4,耐8.5%NaCl,35培养24h形成S和R两种菌落,S型细菌呈杆状或球杆装,R型细菌呈长丝状,明胶穿刺呈“试管刷”样生长。生化反应:触酶、氧化酶(-),乳糖、甲基红、V-P、靛基质、尿酶(-),三糖铁产H2S。革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌27(二)微生物学检查 标本:血液、分泌物、渗出液 鉴定:(1)直接涂片镜检:G+短小杆菌(2
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