酶免疫测试EIA技术培训课件.ppt

1、酶免疫测试EIA技术 酶免疫分析技术（enzyme immunoassay,EIA）是继荧光免疫技术和放射免疫技术之后建立的一种非放射性免疫技术，是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合，发展建立的一种非放射性标记的免疫性标记分析方法。酶免疫分析系统则属于开放式的，符合标准的各种品牌的ELISA试剂盒均可应用，且有灵敏度高、特异性强、酶免疫试剂的性质比较稳定、操作方法简便、快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点。酶免疫测试EIA技术2酶免疫测试EIA技术41）将链霉亲合素包被的聚苯乙烯塑料试管安置固定。2）将生物素标记的特异性抗体和待测抗原加入链霉亲合素包被小管内，经温育，生物

2、素和亲和素发生连接，待测抗原和特异性抗体发生结合，形成固相包被亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原复合物，然后进行洗涤，除去未结合的抗原和生物素标记抗体。3）加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性抗体(酶标抗体)，经温育形成固相包被链酶亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原-酶标抗体复合物，再次进行洗涤，除去多余的酶标抗体。4）加入底物ABTS和H2O2，经温育，ABTS在辣根过氧化物酶的作用下显色，然后经波长450nm的光度计测定获得A值，从标准曲线上计算出待测抗原的含量。酶免疫测试EIA技术5 光源 光路 微孔板触摸屏电源 单 A/D转换 程控放大器 多路开关 光电检测显示器 片打印机 步

3、进电机驱动 步进电机 送样机构电源 机 图2 工作原理方框图电源酶免疫测试EIA技术6（1）试剂的准备（2）加样（3）保温 使用恒温水箱 使用保温箱（4）洗涤（5）比色酶免疫测试EIA技术7（1）可作标本广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可。（2）标本采集时应尽量避免溶血，否则造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。（3）抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。（4）标本保存：血清置4冰箱5天内完成测试；一周以上则要-20冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀。（5）ELISA的灵敏度1ng/ml水平

4、上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本，最起码应先做免疫后做生化。酶免疫测试EIA技术8（1）移液器：ELISA加样量小（5-100l），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查，一般应在10%以内；（2）水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有1的误差；（3）洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；（4）酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。酶免疫测试EIA技术9（1）加样（2）温育（3）洗涤（4）显色（5）酶标仪判读结果

5、 酶免疫测试EIA技术10（1）测试之前，冰箱内试剂一定要复温（至室温），并检查是否已经变质，同时用双蒸水稀释浓缩的洗涤液和稀释液，若用不合格的蒸馏水则可使空白值增高。（2）微量加液器应注意保养并定期校正，否则结果误差较大，同时加样时不可出现气泡，以免反应物间不能充分混匀反应。（3）温育时要力求受热均匀，同时避免液体蒸发。（4）洗涤时力求次数足够，且避免形成气泡，否则洗涤不完全。（5）比色时反应管内不能留有气泡，管底不能存有水滴，否则出现较大误差。酶免疫测试EIA技术111.选择试剂 2.加样 3.孵育 4.洗板 5.显色 6.终止 7.读板 酶免疫测试EIA技术121、RT-2100C可广泛

6、应用于传染病、肿瘤标志物、血液病、艾滋病、内分泌障碍测定等临床论断领域。2、大屏幕汉化界面，利用触摸屏和笔作为输入方式，极大地方便了用户的操作输入。3、100个可编程的检验项目。4、多种定量、定性计算方法5、96孔可视化布板，空白位、对照位、样本位、标准品位任意设置，同一板上可同时进行最多12个项目的测试。6、8通道检测迅速准确(5秒/板)，测试前的震动混匀功能。酶免疫测试EIA技术137、大容量历史数据保存，最多可保存500个项目，1000个病人，10000条样本记录。8、形式多样的综合中文报告输出，支持多种品牌系列的外置打印机。9、强大的网络功能：可与医院内部计算机网络、质量监测中心及雷杜用户服务中心联网，为工作带来极大的便捷。10、配合使用雷杜酶标实验室管理系统，可以在联网计算机上进行数据管理和分析。11、辅助管理功能：内置科室数据库、医生数据库和系统日志数据库。酶免疫测试EIA技术14酶免疫测试EIA技术15（1）开机，待机器自行检测稳定（2）项目设置：RT-2100C所有项目均由用户自行定义，最多允许设置100个项目。用户已经设置的项目均在窗口中列表显示，关机时自动保存。（3）样品测试（4）综合报告酶免疫测试EIA技术16实验操作项目：血清睾酮的定量测定酶免疫测试EIA技术17