临床微生物学肺炎链球菌检验课件.ppt

1、致病性球菌w 葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌w 表皮葡萄球菌w 链球菌属 链球菌w 肺炎链球菌w 奈瑟菌属 脑膜炎奈瑟菌w 淋病奈瑟菌1 肺炎链球菌(S.pneumoniae)属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。2l1形态结构l2培养特性l3生化反应 l4抗原结构l5抵抗力特点 l6.变异性31.形态结构w G+，呈矛尖状，成双排列，标本或液体培养中成链状。w 有荚膜，无鞭毛，不形成芽胞。452.培养特性w 营养要求较高，含血液或血清的培养基中生长。w 兼性厌氧，C02 5-10%生长最好。w 溶血性菌落周围有草绿色溶血环。w 液体培养基中培养24h，呈均匀

2、混浊，后期因产生自溶而变得澄清 63生化反应 w 可分解多种糖类，产酸不产气。w 胆汁溶解试验阳性：加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37.，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。78w Optochin敏感试验阳性：单个菌落涂于血平板上，用optochin纸片贴于接种区中央，35需氧培养过夜，抑菌圈 18mm。9104抗原结构w 荚膜多糖抗原：多糖抗原，型特异性，共85型，型引起大叶性肺炎。w 菌体种属特异性抗原：多糖抗原，存在于细胞壁，称C多糖。在钙离子存在时,C多糖可与正常人血清中称为C-反应蛋白(C reactive protein,CRP)的球蛋白结合，发生沉淀。115抵抗力特点

3、 较弱，加热56，20min即死亡。对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。126.变异性 w 荚膜变异：有荚的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。13w 20、把小鼠随机分成两组，进行肺炎球菌荚膜形成试验，分别将两株细菌接种于不同组动物腹腔（每组接种一株细菌）。12小时后杀死小鼠解剖，取腹腔作荚膜染色试验。结果有一组只有少量细菌，且未见荚膜主要原因是什么？w A、动物对细菌不敏感 B、染色试剂不合标准 C、细菌毒力发生了变异w D、采标本时间过早14二、致病性1致病物质2所致疾病151.致病物质w 荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。w 溶血毒素“O”：自溶后

4、释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。162.所致疾病 w 存在于正常人上呼吸道。w 仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。如大叶性肺炎，支气管炎等。17三、微生物学检验(一)标本采集 痰、脓液、血液等。18(二)检验方法及鉴定 1.直接涂片 革兰氏色染色，荚膜染色192.分离培养。胆汁溶菌试验。菊糖发酵。Optochin试验。与草绿色链球菌鉴别203.小鼠毒力试验 有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。21第四节 奈瑟菌属（neisseria）22w 为一群G-双球菌，严格寄生菌，人是自然宿主w 主 要 致 病 菌 是 脑 膜 炎 球 菌(merningococcus)和淋

5、病球菌(gonorrhoeae)23一、脑膜炎球菌即脑膜炎奈瑟菌，是流行性脑脊髓膜炎的病原体 24（一）、生物学性状w 1形态结构w 2培养特性w 3生化反应w 4.抗原结构w 5.抵抗力特点251形态结构w G-，肾形成双排列w 在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内w 无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。262培养特性w 营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。w 血平板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。w 易自溶。27w 巧克力平板，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。w 卵黄双抗（EPV）平板：为无色，光滑湿润的菌落。w 血清肉汤：呈微混浊。283.生化反应w

6、分解葡萄糖、麦芽糖w 硝酸盐还原反应阴性，不分解尿素w 氧化酶试验阳性294.抗原结构w 可分9个血清群，对人致病的主要试A群305抵抗力特点w 对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h，60 5min死亡。w 采集标本：注意保温迅速送检。w 对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。31w 12、对脑膜炎奈瑟氏菌的标本采送，哪一种是错误的？w A、低温 B、保温w C、防干燥 D、快速32（二）、致病性与免疫性w1致病物质w2所致疾病w3.免疫性331.致病物质：内毒素、荚膜，菌毛2.所致疾病：寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约2%-3%的人表现为流脑症状34w

7、3.免疫性：病原可产生群特异性抗体，但不持久。35(三)微生物学检验 1标本采集 w 菌血症期病人采集血液w 有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液w 有脑膜刺激症状，抽取脑脊液 362检验方法直接涂片检查 脑脊液或瘀斑渗出液，干燥固定后革兰染色，若发现G-双球菌，呈肾形成对，可初报37分离培养鉴定w 过氧化酶试验：阳性w 触酶试验：阴性w 血清凝集试验：阳性38二、淋球菌 即淋病奈瑟菌，为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源39（一）、生物学性状w1形态结构w2培养特性w3.生化反应w4抵抗力特点401形态结构wG-，球形或肾形，成对排列w有荚膜，无芽胞和鞭毛 412培养特性w 营养要求高，30

8、-37 生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培养基w 初次分离，须5-10%CO2才能生长发育w 菌落：凸起，光滑、圆形，灰白色，半透明 423.生化反应w 氧化酶试验：阳性w 触酶：阳性w 只分解葡萄糖，不分解麦芽糖w 易自溶434抵抗力特点抵抗力弱，在干燥环境中仅能存活1-2h，湿热55 5min,100 立即死亡。室温下存活1-2d。对消毒剂极敏感44（二）、致病性与免疫性1致病物质2所致疾病3.免疫性451致病物质w菌毛，外膜蛋白等 462所致疾病w侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病(首位性病)473.免疫性 病后可产生相应的细胞和体液免疫，但免疫力弱，不足以保护再感染

9、。48(三)微生物学检验491标本采集 泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液 立即送检502直接涂片镜检w 急性淋病：嗜中性粒细胞内大量G-，肾形双球菌具有诊断意义w 慢性淋病：镜检较困难 513.分离培养鉴定 即采集即培养，常用含有两种以上抗生素（万古霉素、粘菌素、磺胺类等）的营养培养基上培养。52氧化酶试验：阳性触酶：阳性（多数奈瑟菌为阴性）发酵葡萄糖，不分解麦芽糖 PCR：灵敏，特异，标本不变限制(不需活菌)53微生物和微生物学检验 郭刚 临床微生物及免疫学教研室54 绪论 55一、微生物（microorganisms）：w 概念：一群肉眼看不见的微小生物，包括：细菌、螺旋体、立克次体、衣原体

10、、支原体、放线菌（原核）、病毒（非细胞）、真菌（真核）。w 原核与真核细胞的区别：细胞核的区别56w 最新生物进化分类法：古细菌古细菌：(Archaeobacteria)嵌合进化或共生进化 真细菌：真核生物：57微生物与人类的关系：w（1）大多数不致病，甚至是对人、动、植物有益和必需的，如：固氮菌；酿酒、制醋、抗生素、肠道正常菌群。w（2）病原微生物:pathogenic microorganisms58二、微生物学(microbiology)：w 微生物的进化分类、生命活动规律及与动植物、人类、自然相互关系。w 按研究对象分：细菌、病毒、真菌学w 按应用领域分：工业、农业、医学、兽医w 按研

11、究方向分：基础微生物、分子微生物学、微生态学 等 59w 医学微生物学(medical microbiology)：与医学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免疫性及有关技术和理论的应用。w 临床微生物学(clinical microbiology)：测重研究感染性疾病诊断方法，提供诊断依据和指导用药。60三、医学微生物学发展简史61w 2实验微生物学时期（17世纪始）：显微镜培养基n（）微生物的发现：列文虎克、巴斯德（发现微生物的作用，创立巴氏消毒法）、李斯特、郭霍氏（固体培养、染色技术）郭霍氏法则：、。逐渐被淘汰。新的病原确定方法：核酸确定法核酸确定法 n（）免疫学的兴起、分离：l牛痘、巴

12、斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动物血清治愈白喉。n（）抗生素的发现：l目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高 62w 3 现代微生物学时期：近二、三十年n（1）新病原微生物的发现la传统病原卷土重来；lb新型病原。n（2）致病机理的深入研究la采用新技术；lb.各种致病因素的分子机理及调控。63n（3）诊断技术的发展：l三大标记技术l各种分子生物学技术：核酸杂交，PCR，微量化，自动化。n（4）各种新型疫苗的研制l传统疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗、DNA疫苗。n（5）免疫学独立l远远超越感染免疫的范畴。64w 思考：思考：（）预测微生物学发展下一阶段；（）目前科学界研究热点？65w 4

13、基因组微生物学n（）微生物在基因组前时代在生物学研究中的地位；n（）结构简单，可做为模型，模式生物模式生物；n（）在基因组时代，作为急先锋；n（）微生物基因组的研究成功，必然极大地改变微生物学科现状。w 因此，微生物学研究正面临前所未有地机遇和挑战。w 从上看出，医学微生物学的发展，也是各种技术方法的发展，也是临床微生物学的发展历史。66四、临床微生物学的任务w 研究感染性疾病的病原体特征：传统的病原微生物 条件致病菌w 提供快速、准确的病原学诊断；w 指导合理使用抗生素；目前检验科的主要任务。w 对医院感染进行监控。67五、临微学习方法：重要性：与毕业后工作紧密相关。w（）平时注意预习、复习

14、；w（）对内容上，紧紧围绕诊断，诊断又是由各种典型特性建立的方法来进行的 抓特性、去共性抓特性、去共性w（）注意新动向。68第一篇微生物学 细菌学总论69一、细菌(bacterium)的形态与结构w（一）形态：个体微小、形态各异n球菌（coccus）n杆菌 (Bacillus)n弧菌与弯曲菌n螺旋菌及螺旋体n不规则形。70w（二）结构：71基本结构：包括胞壁、胞膜、胞浆及核质l细胞壁细胞壁：主要成分肽聚糖肽聚糖。72 乙酰胞壁酸 聚糖骨架 .4糖苷键 乙酰葡糖胺 四肽侧链 五肽桥（苷氨酸）菌肽聚糖厚、层数多、立体状坚固。73图 金黄色葡萄球糖细胞细胞壁的肽聚糖结构图 大肠杆菌细胞壁的肽聚糖结构

15、74 膜磷壁酸菌细胞壁 壁磷壁酸 特殊结构 表面蛋白：SPA、M蛋白菌细胞壁 磷脂特殊结构 脂蛋白 类脂：毒性部分(外膜)脂多糖（LPS，内毒素）：核心多糖：属和组特异 特异多糖：种和型特异75和菌细胞壁差异：特特 征征革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌 强度较坚韧较疏松 厚度厚，2080nm薄，510nm 肽聚糖层数多，可达50层少，13层 肽聚糖含量多，可占胞壁干重5080%少，占胞壁干重1020%磷壁酸 +-外膜 -+结构三维空间（立体结构）二维空间（平面结构）76w 型细菌：细胞壁缺陷型细菌。高渗培养基中：油煎蛋样菌落。在临床上注意型带来的漏诊。77w 2.特殊结构n荚

16、膜(capsule)：（）保护作用；（）致病作用：侵袭力；（）免疫原性；（）鉴别与分型。78n鞭毛(flagellum)：运动器官，抗原。79n菌毛(Pilus)：（）普通菌毛：粘附素；（）性菌毛：根，长而粗，菌转移质粒，耐药及毒力质粒。80n芽胞(Spore)：不利环境中的一种抵抗形式，是休眠体而非繁殖体。81二、细菌的繁殖与新陈代谢：w 掌握几个概念：n自养菌、异养菌；n需氧菌、专性厌氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌。82专性厌氧菌有氧不生长，原因有二：厌氧菌缺乏细胞色素与细胞色素氧化酶，因此不能氧化那些氧化还原电势较高的氧化型物质。厌氧菌缺乏过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶,不能清除有氧

17、环境下所产生的超氧离子（O2-）和过氧化氢（H2O2），因而难以存活。83n 群体细菌的生长繁殖曲线：l迟缓期、对数期、稳定期、衰退期84四、消毒与灭菌w 掌握几个概念：消毒（Disinfection）：杀灭病原微生物的方法。灭菌（Sterilization）：杀灭物体上所有的微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的方法。无菌（Asepsis）：物体上或容器内无活菌存在的意思。防腐（Antisepsis）：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。85 五、微生物的遗传变异w（一）遗传变异的物质基础n 染色体n 质粒质粒（plasmid）：细菌存在于染色体外的少部分（约12%）DNA，可决定细菌的

18、一些生物学特性。n 转位因子：插入顺序、转座子、转座噬菌体 86 质粒的生物学性质：1质粒并非细菌生存所必不可少的遗传物质。2质粒的传递（转移）是细菌遗传物质转移的一个重要方式。3质粒可自行失去或经人工处理而消失。4质粒可以独立复制。5可有几种质粒同时共存在于一个细菌内。87w（二）细菌的变异现象n 形态与结构变异n 培养特性变异n 毒力变异n 耐药性变异88w（三）细菌变异的机制n 突 变n 基因的转移和重组l转化转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体菌的部分遗传特性。l转导转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供

19、细菌的基因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。l接合接合(conjugation)是两个通过直接接触，在暂时的沟通中进行基因转移的过程。8990w(四)遗传变异研究的实际意义n在细菌分类上的应用n在诊断中的应用n在预防中的应用n在治疗中的应用n检查致癌物质的作用n在遗传工程方面的应用91六、微生物的致病性与感染w（一）微生物与宿主的关系 常居菌 正常菌群正常菌群 过路菌 （）抵抗力下降；（）长期化疗、放 疗、条件致病菌条件致病菌：免疫抑制剂患者；（）外伤；（）菌群失调菌群失调：菌群失调症。92w 正常菌群的生理意义：n（）生物拮抗；n（）促进机体免疫；n（）与衰老有关：双歧杆菌；n（）合成

20、维生素和细菌素。93w（二）细菌的致病物质及作用：n细菌的表面成分：参与粘附、定植和侵入；n毒素及毒性蛋白和酶：l外毒素：l内毒素：94 细菌外毒素举例 细菌种类细菌种类 革兰氏染色革兰氏染色 引起疾病引起疾病 毒素名称毒素名称 毒素作用方式毒素作用方式 白喉杆菌 +白喉 白喉毒素坏死性 霍乱弧菌 -霍乱 肠毒素引起小肠过度分泌液体 鼠疫杆菌 -鼠疫 鼠疫毒素可能坏死性 破伤风杆菌 +破伤风破伤风溶血毒素 溶血性心脏毒素 破伤风痉挛毒素引起骨骼肌痉挛 产生荚膜杆菌 +气性坏疽 -毒素溶血性卵磷脂酶，坏死性 -毒素溶血性心脏毒素 -毒素溶蛋白性95 外毒素与内毒素的主要区别外毒素与内毒素的主要区

21、别区别要点区别要点 外毒素外毒素 内毒素内毒素存在部位 由活的细菌释放至细菌体外为细菌细胞壁结构成份，菌体崩解后释出细菌种类 以革兰氏阳性菌多见革兰氏阴性菌多见化学组成 蛋白质（分子量27，000900，000）磷脂一多糖一蛋白质复合物（毒性主要为类脂A）稳定性不稳定，60以上能迅速破坏耐热，60耐受数小时毒性作用 强，微量对实验动物有致死作用（以ug计量）。各种外毒素有选择作用，引起特殊病变，不引起宿主发热反应。抑制蛋白质合成，有细胞毒性、神经毒性、紊乱水盐代谢等稍弱，对实验动物致死作用的量比外毒素为大。各种细菌内素的毒性作用大致相同。引起发热、弥漫性血管内凝血、粒细胞减少血症、施瓦兹曼现象等抗原性强，可刺激机体产生高效价的抗毒素。经甲醛处理，可脱毒成为类毒霉，仍有较强的抗原性，可用于人工自动免疫刺激机体对多糖成份产生抗体，不形成抗毒素，不能经甲醛处理成为类毒素96w医院感染医院感染：医院中发生的一切感染。包 括在医院中活动的所有人群。外源性感染 内源性感染 97