抗癌药物敏感实验课件.ppt
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- 抗癌 药物 敏感 实验 课件
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1、抗癌药物敏感实验抗癌药物敏感实验一一.实验药物储备液的配制实验药物储备液的配制v一般按试验最高浓度的一般按试验最高浓度的100倍配制储备液。倍配制储备液。v体外药物敏感性试验所用药物浓度,一体外药物敏感性试验所用药物浓度,一般根据血浆高峰浓度的般根据血浆高峰浓度的0.10,1,10倍的剂倍的剂量进行。亦可参考以下公式:量进行。亦可参考以下公式:试验药物浓度(试验药物浓度(ug/ml)v试验时,一般试验时,一般3-5个对数级浓度个对数级浓度 平均体重平均体重 60 mg平均体表面积平均体表面积 100二二.受试细胞的准备受试细胞的准备 根据实验目的选用体外培养的肿瘤根据实验目的选用体外培养的肿瘤
2、细胞系如国际通用的细胞系如国际通用的HelaHela细胞系等,细胞系等,也可用肿瘤患者的新鲜手术标本制成也可用肿瘤患者的新鲜手术标本制成细胞悬液备用。细胞悬液备用。三三.药物疗效的评价药物疗效的评价1.1.体外抑瘤试验:体外抑瘤试验:合成化合物或植物合成化合物或植物提取物纯品的半数抑制浓度提取物纯品的半数抑制浓度ICIC505010ug/ml10ug/ml或植物粗提物的或植物粗提物的ICIC505020ug/ml20ug/ml,并且有细胞毒性的剂量依并且有细胞毒性的剂量依赖关系,其最高抑制效应达赖关系,其最高抑制效应达8080以上;以上;发酵液发酵液ICIC5050大于大于1 1:100100
3、,则判定样品,则判定样品在体外对细胞有杀伤作用。在体外对细胞有杀伤作用。2.2.体内抑瘤试验:体内抑瘤试验:v实体瘤实体瘤疗效以瘤重抑制百分率表示,即疗效以瘤重抑制百分率表示,即瘤重抑制率(瘤重抑制率(1-1-试验组瘤重试验组瘤重/对照组瘤重)对照组瘤重)100100 中草药抑制率中草药抑制率3030,合成药,合成药4040v腹水型肿瘤腹水型肿瘤疗效可以生命延长率表示,疗效可以生命延长率表示,即即生命延长率(试验组存活天数生命延长率(试验组存活天数/对照组存活天数对照组存活天数-1-1)100100非腹腔给药生命延长率非腹腔给药生命延长率5050,腹腔给药,腹腔给药生命延长率生命延长率7575
4、四四.药物敏感性实验药物敏感性实验1.1.体外药物敏感试验体外药物敏感试验 美蓝法:美蓝法:利用活细胞的脱氢酶利用活细胞的脱氢酶提供氢离子,是美蓝还原为甲烯白提供氢离子,是美蓝还原为甲烯白(无色)。细胞死亡后脱氢酶失活(无色)。细胞死亡后脱氢酶失活无法使美蓝还原,故染成蓝色。检无法使美蓝还原,故染成蓝色。检验用药后死细胞数反映药物抑瘤作验用药后死细胞数反映药物抑瘤作用。假阳性率较高。用。假阳性率较高。2.2.染料排斥实验法:染料排斥实验法:根据活细胞在低浓度染液不着根据活细胞在低浓度染液不着色特点,一般用色特点,一般用0.20.2台盼蓝或台盼蓝或0.10.1伊红试验。药物导致细胞死亡时,伊红试
5、验。药物导致细胞死亡时,细胞膜通透性增加,染料易透过细细胞膜通透性增加,染料易透过细胞膜。加药后计算阳性细胞数以示胞膜。加药后计算阳性细胞数以示药效。由于濒临死亡的细胞不易着药效。由于濒临死亡的细胞不易着色,故假阴性较高。色,故假阴性较高。3.3.生长曲线测定法生长曲线测定法1 1)药物对细胞的杀伤率药物对细胞的杀伤率 将对照组及加药组生长曲线的线性部将对照组及加药组生长曲线的线性部分延伸至分延伸至Y Y轴,可分别得到截距轴,可分别得到截距N NO O及及N NO O。代表接种后具有增殖力的细胞数。代表接种后具有增殖力的细胞数。药物对增殖细胞的杀伤率药物对增殖细胞的杀伤率 (N NO O N
6、NO O)/NO/NO1001002 2)药物对倍增时间()药物对倍增时间(T TD D)的影响的影响 T TD=D=t t 2 2 NtNt N N0 0 t t代表培养时间,代表培养时间,N N0 0 和和NtNt分别代分别代表接种后及培养表接种后及培养1 1小时后的细胞数。小时后的细胞数。如倍增时间延长则表明药物使细胞增如倍增时间延长则表明药物使细胞增殖能力减弱。殖能力减弱。3 3)药物对细胞生长饱和密度()药物对细胞生长饱和密度(NsNs)的影响的影响 取出在生长稳定期的培养细胞,计数单取出在生长稳定期的培养细胞,计数单位面积或体积的细胞均数,即细胞生长饱和位面积或体积的细胞均数,即细
7、胞生长饱和密度。该值减小也表示细胞增殖活性减弱。密度。该值减小也表示细胞增殖活性减弱。4 4)放射性同位素掺入核苷酸前体物试验法)放射性同位素掺入核苷酸前体物试验法 常用常用3 3H-TDRH-TDR或或3 3H-UDRH-UDR掺入掺入DNADNA或或RNARNA合成合成期的细胞,用液体闪烁计数仪测知标记的期的细胞,用液体闪烁计数仪测知标记的DNADNA或或RNARNA的含量,从而了解药物对肿瘤细胞的含量,从而了解药物对肿瘤细胞DNADNA或或RNARNA合成的抑制效应。合成的抑制效应。5 5)四唑盐()四唑盐(MTTMTT)比色法比色法 Mosmann Mosmann(19831983)首
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