MRSA耐药机制及检测方法教案课件.pptx

1、1会计学MRSA耐药机制及检测方法耐药机制及检测方法之间，具有位置特异性之间，具有位置特异性1femA和和femB为两个相为两个相连的开放阅读框，对细连的开放阅读框，对细菌细胞壁的五甘氨酸侧菌细胞壁的五甘氨酸侧链以及肽间桥的生物合链以及肽间桥的生物合成是必需的。当其失活成是必需的。当其失活时，时，MRSA对对-内酰内酰胺酶类抗生素以及多种胺酶类抗生素以及多种其它类抗生素的耐药性其它类抗生素的耐药性降低降低2femC的作用引起谷氨的作用引起谷氨酰胺合成酶基因酰胺合成酶基因glnA转录和活化及异谷氨酰转录和活化及异谷氨酰胺的酰胺化，其失活时胺的酰胺化，其失活时，糖肽的交叉连接降低，糖肽的交叉连接降

2、低，MRSA对对-内酰胺酶内酰胺酶类抗生素耐药性降低类抗生素耐药性降低 2femF基因的编码产物基因的编码产物涉及涉及L-赖氨酸与胞壁酰赖氨酸与胞壁酰二肽链的连接，其突变二肽链的连接，其突变失活时引起的耐药性的失活时引起的耐药性的改变得具体机制还有待改变得具体机制还有待研究。研究。femD和和femE对细菌的对细菌的确切作用还未阐明确切作用还未阐明 药物敏感试验方法药物敏感试验方法 NCCLS推荐使用药推荐使用药敏纸片法、苯唑西林敏纸片法、苯唑西林(oxacillin)盐琼脂筛盐琼脂筛查法、查法、-内酰胺酶检内酰胺酶检测、测、E-test 试验和试试验和试管双倍稀释法等管双倍稀释法等 缺点缺点

3、：易受培养基成：易受培养基成分影响，较耗时，且分影响，较耗时，且错误应用抗生素会引错误应用抗生素会引起更为严重耐药的耐起更为严重耐药的耐药菌株的出现药菌株的出现 快速乳胶快速乳胶(Latex)凝集凝集法法PBP2a 单克隆抗体单克隆抗体致敏的乳胶颗粒与致敏的乳胶颗粒与MRSA 的膜蛋白提取的膜蛋白提取物作用物作用,产生肉眼可见产生肉眼可见的凝集颗粒的凝集颗粒,证实有证实有PBP2a 的存在的存在,以此以此判断该菌为判断该菌为MRSA 此法简便、快速、准此法简便、快速、准确确,检测检测1 份标本只需份标本只需15 min，和，和PCR法一法一样有极高的灵敏度和样有极高的灵敏度和特异性，有较好的应

4、特异性，有较好的应用前景用前景 免疫学方法免疫学方法基质辅助激光解吸电基质辅助激光解吸电离离-飞行时间质谱飞行时间质谱 可可简易分析低纯度的固简易分析低纯度的固体混合物样品体混合物样品,检测检测范围可到范围可到350 KD。根据细菌的全细胞图根据细菌的全细胞图谱差异，鉴定未知细谱差异，鉴定未知细菌。耗时少，重复性菌。耗时少，重复性高高 缺点：要求特殊仪器缺点：要求特殊仪器，结果处理方法复杂，结果处理方法复杂，不适于普遍开展，不适于普遍开展 分型方法分型方法传统方法是噬菌体分型技术传统方法是噬菌体分型技术,根据分离根据分离菌株对各噬菌体的敏感性和噬菌体裂菌株对各噬菌体的敏感性和噬菌体裂解情况进行

5、分型。目前采用的一些分解情况进行分型。目前采用的一些分子生物学进行基因分型的方法有：脉子生物学进行基因分型的方法有：脉冲场凝胶电泳冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)、逆向凝胶、逆向凝胶电泳电泳(field inversion gelelectrophoresis,FIGE)、随机扩、随机扩增多态性增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）、）、多位多位点序列分型（点序列分型（multilocus sequencing typing，MLST）等）等 mecA 基因高度保守基因高度保守,根据

6、其核根据其核苷酸序列设计不同的引物苷酸序列设计不同的引物,用用PCR对菌株中对菌株中PBP2a 靶靶DNA 特定片段特定片段mecA 进行扩增进行扩增,以以mecA 基因存在与否判定是否基因存在与否判定是否为为MRSA 菌株，不受药敏实验菌株，不受药敏实验条件的影响条件的影响,因而特异性高因而特异性高,被被公认为是其诊断的公认为是其诊断的金标准。金标准。mecA和和femB 基因表达均为阳基因表达均为阳性性,方能确诊为方能确诊为MRSA 目前临床滥用抗目前临床滥用抗生素的现象，对生素的现象，对MRSA的流行起的流行起了一定的扩散作了一定的扩散作用用，第三代头孢，第三代头孢菌素的长期使用菌素的长

7、期使用与与MRSA的出现的出现率呈平行关系率呈平行关系 医护人员检查病医护人员检查病人前后要严格洗人前后要严格洗手消毒，有条件手消毒，有条件应用一次性口罩应用一次性口罩、帽子、手套，、帽子、手套，医疗用品要固定医疗用品要固定，以防院内交叉，以防院内交叉感染感染 合理使用抗生素合理使用抗生素 早期检出带菌者早期检出带菌者 加强消毒制度加强消毒制度 医院应加强对新入医院应加强对新入院及院及MRSA易感者易感者的检查，尤其是烧的检查，尤其是烧伤病区、伤病区、ICU、呼吸、呼吸病房、血液科和小病房、血液科和小儿科等。同时细菌儿科等。同时细菌室应选用准确的检室应选用准确的检测手段，发现测手段，发现MRSA，及时向临，及时向临床报告，以便控制床报告，以便控制感染和隔离治疗感染和隔离治疗 2008年年10月月