中成药常规检查课件.ppt

1、中成药常规检查及中成药常规检查及中蒙药薄层色谱鉴别中蒙药薄层色谱鉴别内蒙古药品检验所内蒙古药品检验所 郝美玲郝美玲1前言前言中成药常规检查中成药常规检查中蒙药薄层色谱鉴别中蒙药薄层色谱鉴别2前前 言言中成药检验主要包括：性状、鉴中成药检验主要包括：性状、鉴别、检查、含量测定等。性状从别、检查、含量测定等。性状从某种程度来讲也是检查的一个部某种程度来讲也是检查的一个部分，可以作为直观检查。分，可以作为直观检查。3 一一.中成药常规检查中成药常规检查中国药典中国药典2000年版一部附录年版一部附录“制剂通则制剂通则”项下共介绍了项下共介绍了28个个剂型，剂型，2005年版一部附录年版一部附录“制剂

2、制剂通则通则”项下共介绍了项下共介绍了30个剂型，个剂型，新增了新增了凝胶剂和涂膜剂凝胶剂和涂膜剂。这里主。这里主要讲几个常见剂型的检查项目及要讲几个常见剂型的检查项目及判定标准。有：丸剂、片剂、胶判定标准。有：丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂。囊剂、颗粒剂、滴丸剂。4 （一）丸剂的检查（一）丸剂的检查 中国药典中国药典2005年版一部附录年版一部附录5页页 丸剂包括：蜜丸、水丸、水蜜丸、丸剂包括：蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、浓缩丸、蜡丸。糊丸、浓缩丸、蜡丸。外观应圆整、均匀、色泽一致，外观应圆整、均匀、色泽一致，蜜丸应细腻滋润、软硬适中。蜜丸应细腻滋润、软硬适中。51.水水 分分（1）不含或

3、少含挥发性成分的药品采用第）不含或少含挥发性成分的药品采用第一法，也叫烘干法。一法，也叫烘干法。具体操作：取供试品（具体操作：取供试品（3mm颗粒或碎片）颗粒或碎片）25g，平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，厚度不超过厚度不超过5mm，疏松供试品不超过，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在精密称定，打开瓶盖在100105干燥干燥5小小时时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分分钟钟，精密称定重量，再在上述温度干燥，精密称定重量，再在上述温度干燥1小小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过

4、不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量试品中含水量（%）6（2）含挥发性成分的药品采用第二法，也叫甲苯法。）含挥发性成分的药品采用第二法，也叫甲苯法。具体操作：取供试品适量（约相当于含水量具体操作：取供试品适量（约相当于含水量14ml），精密称定，置），精密称定，置A瓶中，加甲苯约瓶中，加甲苯约200ml，必要，必要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭管的狭细部分。将细部分。将A瓶置电热套中，待甲苯开始沸腾时，调瓶置电

5、热套中，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出节温度，使每秒钟馏出2滴滴。待水分完全馏出，即测。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，继续蒸馏定管刻度部分的水量不再增加时，继续蒸馏5分钟分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算供试品中的含水量分离观察）。检读水量，并计算供试品中的含水量（%）。7甲苯法仪器装置甲苯法仪器装

6、置A为为500ml的短颈圆底烧瓶。的短颈圆底烧瓶。B为水分测定管。为水分测定管。C为直形冷凝管。为直形冷凝管。8（3）含有挥发性成分的贵重药）含有挥发性成分的贵重药品（麝香）采用第三法品（麝香）采用第三法,也叫减也叫减压干燥法。压干燥法。（4）第四法）第四法,也叫气相色谱法。也叫气相色谱法。9判判 定定 标标 准准 大小蜜丸、浓缩蜜丸水分不得过大小蜜丸、浓缩蜜丸水分不得过15.0%。水蜜丸、浓缩水蜜丸水分不得过水蜜丸、浓缩水蜜丸水分不得过12.0%。水丸、糊丸、浓缩丸水分不得过水丸、糊丸、浓缩丸水分不得过9.0%。蜡丸不检查水分。蜡丸不检查水分。102.重重 量量 差差 异异 按丸服用的丸剂照

7、第一法检查按丸服用的丸剂照第一法检查 取供试品取供试品10份份，分别称定重量，再，分别称定重量，再与标示总量（每丸标示重量与标示总量（每丸标示重量称取称取丸数）或标示重量相比较（无标示丸数）或标示重量相比较（无标示重量的丸剂，与平均重量比较）。重量的丸剂，与平均重量比较）。11判判 定定 标标 准准 9g6%（丸重范围（丸重范围 9.548.46）6g7%（丸重范围（丸重范围 6.425.58）3g8%（丸重范围（丸重范围 3.242.76）超出重量差异限度的不得多于超出重量差异限度的不得多于2份份，并不得有并不得有1份份超出限度一倍。超出限度一倍。12按重量服用的丸剂照第二法检查。按重量服用

8、的丸剂照第二法检查。10丸为丸为1份，共取份，共取10份份，分别称定，分别称定重量，再与每份标示重量相比较重量，再与每份标示重量相比较（无标示重量的丸剂，与平均重无标示重量的丸剂，与平均重量比较）。量比较）。2g7%（重量范围（重量范围 2.141.86）1g8%（重量范围（重量范围 1.080.92）13判判 定定 标标 准准 超出重量差异限度的不得多于超出重量差异限度的不得多于2份份，并不，并不得有得有1份份超出限度一倍。超出限度一倍。包糖衣的丸剂应检查丸芯的重量差异并符包糖衣的丸剂应检查丸芯的重量差异并符合规定，包糖衣后不再检查重量差异。其合规定，包糖衣后不再检查重量差异。其他包衣丸剂应

9、在包衣后检查重量差异并符他包衣丸剂应在包衣后检查重量差异并符合规定；凡进行装量差异检查的单剂量包合规定；凡进行装量差异检查的单剂量包装丸剂，不再进行重量差异检查。装丸剂，不再进行重量差异检查。14 3.装装 量量 差差 异异 单剂量分装的丸剂单剂量分装的丸剂（袋或瓶）（袋或瓶）取取10袋（瓶），分别称定每袋（瓶）袋（瓶），分别称定每袋（瓶）内容物的重量，每袋（瓶）装量与标内容物的重量，每袋（瓶）装量与标示装量相比较。示装量相比较。9g5%（丸重范围（丸重范围 9.458.55）6g6%（丸重范围（丸重范围 6.365.64）3g8%（丸重范围（丸重范围 3.242.76）15 判判 定定 标标

10、 准准 超出重量差异限度的不得多超出重量差异限度的不得多于于2袋（瓶）袋（瓶），并不得有，并不得有1袋袋（瓶）（瓶）超出限度一倍。超出限度一倍。164.装装 量量装量以重量标示的多剂量包装的装量以重量标示的多剂量包装的丸剂，照最低装量检查法（丸剂，照最低装量检查法（2005年版一部附录年版一部附录64页），目前多剂页），目前多剂量包装的中成药不多见，蒙成药量包装的中成药不多见，蒙成药大多是多剂量包装。大多是多剂量包装。17具体操作：取供试品具体操作：取供试品5个（个（50g以以上者上者3个）个），采用减重法分别求，采用减重法分别求出每个内容物的装量与平均装出每个内容物的装量与平均装量，应符合下

11、列规定。如有量，应符合下列规定。如有1个个内容物不符合规定，则另取内容物不符合规定，则另取5个个同法进行复验。同法进行复验。18判判 定定 标标 准准标示装量标示装量20g以下以下规定：平均装量不少规定：平均装量不少于标示装量，每个内容物装量不少于于标示装量，每个内容物装量不少于标示装量的标示装量的93%标示装量标示装量20g至至50g规定：平均装量不少规定：平均装量不少于标示装量，每个内容物装量不少于于标示装量，每个内容物装量不少于标示装量的标示装量的95%标示装量标示装量50g至至500g规定：平均装量不规定：平均装量不少于标示装量，每个内容物装量不少少于标示装量，每个内容物装量不少于标示

12、装量的于标示装量的97%19 4.溶溶 散散 时时 限限 根据丸剂直径选择不同孔径的筛网（丸根据丸剂直径选择不同孔径的筛网（丸剂剂直径在直径在2.5mm以下以下的用孔径约的用孔径约0.42mm的筛网，的筛网，在在2.53.5mm之间的用孔径之间的用孔径1.0mm的筛网，的筛网，在在3.5mm以上以上的用孔径约的用孔径约2.0mm的筛网）的筛网）供试品黏附挡板妨碍检查，去掉挡板再供试品黏附挡板妨碍检查，去掉挡板再进行检查。进行检查。20 判判 定定 标标 准准 小蜜丸、水蜜丸和水丸应在小蜜丸、水蜜丸和水丸应在1小时内小时内全部溶散。全部溶散。浓缩丸和糊丸应在浓缩丸和糊丸应在2小时内小时内全部溶散

13、。全部溶散。蜡丸照蜡丸照肠溶衣片肠溶衣片崩解时限检查法检崩解时限检查法检查。查。大蜜丸不检查溶散时限。大蜜丸不检查溶散时限。21 （二）（二）片剂的检查片剂的检查 中国药典中国药典2005年版一部附录年版一部附录7页页 片剂包括：浸膏片、半浸膏片和原粉片片剂包括：浸膏片、半浸膏片和原粉片片剂以口服普通片为主，另有含片、咀嚼片剂以口服普通片为主，另有含片、咀嚼片、泡腾片、阴道片、阴道泡腾片和肠溶片、泡腾片、阴道片、阴道泡腾片和肠溶片等。片等。外观应完整光洁，色泽均匀，应有适宜的外观应完整光洁，色泽均匀，应有适宜的硬度。硬度。22 1.重重 量量 差差 异异 取取20片片，精密称定总重量，求得平均

14、片重，精密称定总重量，求得平均片重，再分别精密称定每片的重量，每片重量与再分别精密称定每片的重量，每片重量与标示片重相比较（无标示片重的片剂，与标示片重相比较（无标示片重的片剂，与平均片重比较）平均片重比较）0.3g5%（0.3150.285）0.3g以下以下7.5%糖衣片不检查重量差异糖衣片不检查重量差异23判判 定定 标标 准准 超出限度的不得多于超出限度的不得多于2片片，并不得，并不得有有1片片超出限度超出限度一倍一倍。242.崩崩 解解 时时 限限 做此项检查（附录做此项检查（附录6262页）时应注意：页）时应注意：（1）1000ml的烧杯的烧杯 （2）T=371 （3）挡板以）挡板以

15、“V”字形放置字形放置（4）升降的金属支架上下移动距离为）升降的金属支架上下移动距离为55mm 2mm，往返频率为每分钟，往返频率为每分钟3035次。次。（5）调节吊蓝位置使其下降时筛网）调节吊蓝位置使其下降时筛网距烧杯距烧杯底部底部25mm，上升时筛网，上升时筛网在水面下在水面下15mm处。处。25判判 定定 标标 准准 药材原粉片（未经提取、浓缩等一系列工药材原粉片（未经提取、浓缩等一系列工艺制备）艺制备）30分钟分钟糖衣片、薄膜衣片（可在糖衣片、薄膜衣片（可在9盐酸溶液盐酸溶液中中检查）、浸膏片检查）、浸膏片(半浸膏片半浸膏片)60分钟分钟 肠溶衣片肠溶衣片 9盐酸溶液中检查盐酸溶液中检

16、查2小时小时（不（不加挡板），不得有裂隙、崩解或软化现象；加挡板），不得有裂隙、崩解或软化现象；提出，用少量水洗涤后，再在磷酸盐缓冲提出，用少量水洗涤后，再在磷酸盐缓冲溶液溶液（PH6.8）中进行检查（加挡板），中进行检查（加挡板），1小时全部崩解并通过筛网。小时全部崩解并通过筛网。26 判判 定定 标标 准准泡腾片泡腾片（含（含NaHCO3和有机酸）和有机酸）250ml烧杯（烧杯（200ml1525的水）的水）当气体停止逸出时，片剂应溶解或分当气体停止逸出时，片剂应溶解或分散在水中，无凝聚的颗粒剩留。散在水中，无凝聚的颗粒剩留。5分钟分钟内崩解内崩解含有药材浸膏、树脂、油脂或大量糊含有药材浸

17、膏、树脂、油脂或大量糊化淀粉的片剂，如有小部分颗粒状物化淀粉的片剂，如有小部分颗粒状物未通过筛网，已软化无硬芯，按符合未通过筛网，已软化无硬芯，按符合论。论。27判判 定定 标标 准准阴道片阴道片 照融变时限检查法（附录照融变时限检查法（附录63页）检查页）检查供试品供试品3片片应在应在30分钟分钟内全部溶化或崩解溶散并内全部溶化或崩解溶散并通过开孔金属圆盘，或仅残留少量无通过开孔金属圆盘，或仅残留少量无硬芯的软性团块。硬芯的软性团块。含片、咀嚼片不检查崩解时限含片、咀嚼片不检查崩解时限28 3.发发 泡泡 量量阴道泡腾片阴道泡腾片25ml具塞刻度试管（内径具塞刻度试管（内径1.5cm）10支

18、，各精密加水支，各精密加水2ml，置，置371 水水浴中浴中5分钟，各管中投入供试品分钟，各管中投入供试品1片，片，密塞，密塞，20分钟内观察最大发泡量的分钟内观察最大发泡量的体积。体积。29 判判 定定 标标 准准平均发泡体积应不少于平均发泡体积应不少于6ml少于少于4ml的不得超过的不得超过2片片30 （三）胶囊剂的检查（三）胶囊剂的检查 中国药典中国药典2005年版一部附录年版一部附录10页页胶囊剂包括：硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊剂包括：硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊。胶囊。外观应整洁、不得有粘结、变形、渗外观应整洁、不得有粘结、变形、渗漏或囊壳破裂现象，并应无异臭。漏或囊壳破裂现象，并应无异臭

19、。311.水水 分分 硬胶囊硬胶囊 将内容物倒出来，按照水分将内容物倒出来，按照水分测定法进行测定。测定法进行测定。常用方法为烘干法和甲苯法。常用方法为烘干法和甲苯法。判定标准：水分不得过判定标准：水分不得过9.0%。硬胶囊内容物为液体或半固体者不检硬胶囊内容物为液体或半固体者不检查水分。查水分。32 2.装装 量量 差差 异异 取取10粒粒，分别精密称定重量，倾出内，分别精密称定重量，倾出内容物，再精容物，再精密称定囊壳重量，采用减密称定囊壳重量，采用减重法，求出每粒内容物的量，每粒装重法，求出每粒内容物的量，每粒装量与标示装量相比较（无标示装量的量与标示装量相比较（无标示装量的胶囊剂，与平

20、均装量比较）。胶囊剂，与平均装量比较）。限度为：限度为：10%0.5g/粒（粒（0.550g0.450g）33 判判 定定 标标 准准 超出限度的不得多于超出限度的不得多于2粒粒，并，并不得有不得有1粒超出限度一倍粒超出限度一倍。343.崩崩 解解 时时 限限 操作同片剂操作同片剂必须加挡板必须加挡板35 判判 定定 标标 准准 硬胶囊硬胶囊30分钟分钟 软胶囊软胶囊60分钟分钟（可在人工胃液（可在人工胃液中进行）中进行）肠溶胶囊肠溶胶囊同肠溶衣片同肠溶衣片部分颗粒状物不能通过筛网，已软部分颗粒状物不能通过筛网，已软化无硬芯可作符合论化无硬芯可作符合论36（四）颗粒剂的检查（四）颗粒剂的检查

21、中国药典中国药典2005年版一部附录年版一部附录6页页颗粒剂包括：可溶性颗粒剂、混悬性颗粒剂包括：可溶性颗粒剂、混悬性颗粒剂和泡腾性颗粒剂。颗粒剂和泡腾性颗粒剂。颗粒剂应干燥、颗粒均匀、色泽一致，颗粒剂应干燥、颗粒均匀、色泽一致，无吸潮、结块、潮解等现象。无吸潮、结块、潮解等现象。371.粒粒 度度 取颗粒剂取颗粒剂30g，称定重量，采用双筛分，称定重量，采用双筛分法，置药筛内过筛，将药筛保持水平状法，置药筛内过筛，将药筛保持水平状态，左右往返轻轻筛动态，左右往返轻轻筛动3分钟分钟。判定标准判定标准 不能通过一号筛和能通过四不能通过一号筛和能通过四号筛的颗粒和粉末总和不得过号筛的颗粒和粉末总和

22、不得过15%。382.水水 分分 按照水分测定法进行测定。按照水分测定法进行测定。常用方法为烘干法和甲苯法。常用方法为烘干法和甲苯法。判定标准：不得过判定标准：不得过6.0%。393.溶溶 化化 性性 1袋袋或或10g（多剂量包装）（多剂量包装）+200ml0ml热水热水（7080），搅拌，搅拌5分钟分钟，立即观察。，立即观察。判定标准：可溶性颗粒剂应全部溶化，允许判定标准：可溶性颗粒剂应全部溶化，允许有轻微浑浊；混悬性颗粒剂应能混悬均匀。有轻微浑浊；混悬性颗粒剂应能混悬均匀。泡腾性颗粒剂泡腾性颗粒剂 1袋袋+200ml0ml水水（15152525），应能迅速产生气体而呈泡腾状，应能迅速产生气

23、体而呈泡腾状，5 5分钟内颗分钟内颗粒应完全分散或溶解在水中。粒应完全分散或溶解在水中。均不得有焦屑等异物。均不得有焦屑等异物。40 4.装装 量量 差差 异异 单剂量分装的颗粒剂，取单剂量分装的颗粒剂，取10袋袋(瓶瓶)，分别称定分别称定每袋每袋(瓶瓶)内容物的重量，内容物的重量，每每袋袋(瓶瓶)的重量与标示装量相比较的重量与标示装量相比较 限度为：限度为：5%10g/袋袋(10.50g9.50g)41判判 定定 标标 准准 超 出 限 度 的 不 得 多 于超 出 限 度 的 不 得 多 于 2 袋袋（瓶）（瓶），并不得有，并不得有1袋（瓶）袋（瓶）超出限度一倍。超出限度一倍。多剂量分装的

24、颗粒剂照最低装多剂量分装的颗粒剂照最低装量检查法量检查法。42（五）滴丸剂的检查（五）滴丸剂的检查 中国药典中国药典2005年版一部附年版一部附录录10页。页。外观应圆整均匀，色泽一致，外观应圆整均匀，色泽一致，无沾连现象，表面无冷凝液无沾连现象，表面无冷凝液黏附。黏附。431.重重 量量 差差 异异取取20丸丸，精密称定总重量，求得平均丸，精密称定总重量，求得平均丸重后，再分别精密称定每丸的重量，每重后，再分别精密称定每丸的重量，每丸重量与平均丸重相比较。丸重量与平均丸重相比较。判定标准：判定标准：超出限度的不得多于超出限度的不得多于2丸丸，并不得有并不得有1丸超出限度一倍丸超出限度一倍。包

25、糖衣的滴丸不检查重量差异，包薄膜包糖衣的滴丸不检查重量差异，包薄膜衣的滴丸检查重量差异。衣的滴丸检查重量差异。442.溶溶 散散 时时 限限 操作同片剂操作同片剂滴丸很小，筛网孔径应为滴丸很小，筛网孔径应为0.42mm。判定标准：判定标准：不包衣的滴丸应在不包衣的滴丸应在30分钟分钟内全部溶散，包衣的滴丸应在内全部溶散，包衣的滴丸应在60分钟分钟内全部溶散。内全部溶散。以明胶为基质的滴丸，可在人工胃液以明胶为基质的滴丸，可在人工胃液中进行检查。中进行检查。45二二中蒙药薄层色谱鉴别中蒙药薄层色谱鉴别（TLC鉴别）鉴别）薄层色谱法薄层色谱法(Thin Layer Chromatography，T

26、LC)系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝质基片上，成一均匀薄层。待点样、展铝质基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药物的鉴别、杂质检图作对比，用以进行药物的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。查或含量测定的方法。优点：具有简便、快速、分离效率高、专优点：具有简便、快速、分离效率高、专属性强及灵敏度高等特点。属性强及灵敏度高等特点。46中国药典中国药典2005年版一部共收载年版一部共收载1146个个品种品种（包括：中、蒙、藏药材及成药），采（包括：中、蒙、藏药材及成药），采用

27、用TLC法用于法用于鉴别鉴别的已达的已达1523项，增加项，增加TLC鉴别并不是赶时髦，而是由于鉴别并不是赶时髦，而是由于TLC鉴鉴别的专属性强。可是，这并不表明显微别的专属性强。可是，这并不表明显微鉴别、理化鉴别就没用了、不重要了鉴别、理化鉴别就没用了、不重要了,例例如：含麝香的中蒙药，显微鉴别起着很如：含麝香的中蒙药，显微鉴别起着很重要的作用。重要的作用。47 薄层色谱鉴别操作全过程示意如下薄层色谱鉴别操作全过程示意如下 供试液的制备供试液的制备 展开剂配制展开剂配制 紫外光灯、显色剂紫外光灯、显色剂 薄层板制备薄层板制备 检视检视 展开展开 点样点样 定性结果定性结果48中蒙成药中蒙成药

28、TLC鉴别的目的是鉴别而不是分鉴别的目的是鉴别而不是分离提取，因而在条件考察时，对吸附剂、离提取，因而在条件考察时，对吸附剂、展开剂的选择，不是如何将检品分离成展开剂的选择，不是如何将检品分离成单一组分，而是如何在某一规定的条件单一组分，而是如何在某一规定的条件（如：硅胶如：硅胶G板、板、GF254板、板、H板等板等），将），将检品制成清晰、圆整、比移值稳定的层检品制成清晰、圆整、比移值稳定的层析图谱，以便与对照品（或对照药材）析图谱，以便与对照品（或对照药材）进行对照比较。进行对照比较。49（一）供试液的制备（一）供试液的制备一个理想的一个理想的TLC鉴别，关键是所制备的供试液是鉴别，关键是

29、所制备的供试液是否理想。供试液的制备离不开提取分离否理想。供试液的制备离不开提取分离(前处理前处理)的选择，并不是所有的成分用甲醇、乙醇都可以的选择，并不是所有的成分用甲醇、乙醇都可以提出，在薄层板上点样、展开、显色、检视。例提出，在薄层板上点样、展开、显色、检视。例如：检中药或中成药中的苷类成分如：检中药或中成药中的苷类成分(含人参、三七、含人参、三七、黄芪、黄芩等药材的中蒙成药黄芪、黄芩等药材的中蒙成药)，需要较为复杂的，需要较为复杂的前处理。前处理。另外点样液不能太浓，否则点样后易造成严重拖另外点样液不能太浓，否则点样后易造成严重拖尾。尾。50前前 处处 理理 整个前处理包括：提取、萃取

30、、柱层析整个前处理包括：提取、萃取、柱层析等等一系列的处理过程，在这儿主要讲等等一系列的处理过程，在这儿主要讲一下萃取和柱层析时应注意的几个方面。一下萃取和柱层析时应注意的几个方面。萃取：萃取：主要注意乳化现象主要注意乳化现象 柱层析柱层析：层析柱层析柱下端用脱脂棉或玻璃纤端用脱脂棉或玻璃纤维塞住，吸附剂均匀地、一次性加入，维塞住，吸附剂均匀地、一次性加入，操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。吸附层的上面。511.1.萃萃 取取 主要注意乳化现象主要注意乳化现象苷类成分用水饱和的正丁醇萃取及有机苷类成分用水饱和的正丁醇萃取及有机生物碱类成分用乙醚或

31、氯仿萃取时，往生物碱类成分用乙醚或氯仿萃取时，往往易产生乳化现象。往易产生乳化现象。振摇时注意避免强力振摇。振摇时注意避免强力振摇。用乙醚或正己烷等萃取脂溶性有机酸或用乙醚或正己烷等萃取脂溶性有机酸或用醋酸乙酯萃取黄酮类成分时，一般不用醋酸乙酯萃取黄酮类成分时，一般不易产生乳化现象，可以强力振摇。易产生乳化现象，可以强力振摇。522.2.柱柱 层层 析析 色谱柱下端用脱脂棉或玻璃纤维色谱柱下端用脱脂棉或玻璃纤维塞住。塞住。吸附剂应均匀地、一次性加入色吸附剂应均匀地、一次性加入色谱柱，振动管壁使其均匀下沉。谱柱，振动管壁使其均匀下沉。洗脱过程中应保持有充分的洗脱洗脱过程中应保持有充分的洗脱剂留在

32、吸附层的上面剂留在吸附层的上面53（二）（二）薄层板的制备薄层板的制备将固定相和水将固定相和水(或一或一定浓度的定浓度的CMC-NaCMC-Na溶溶液或其他水溶液液或其他水溶液)按按1313的比例混匀研的比例混匀研磨磨,涂布成均匀的、涂布成均匀的、规定厚度的薄层，规定厚度的薄层，自 然 晾 干 后，在自 然 晾 干 后，在110110烘烤烘烤3030分钟活分钟活化化，放在有干燥剂，放在有干燥剂的储板箱中备用。的储板箱中备用。54（三）（三）点点 样样点样的质量对分离效果影响很大。点样的质量对分离效果影响很大。点样时最好在空气湿度比较低的地方，点样时最好在空气湿度比较低的地方，因为吸附剂在空气中

33、易吸收湿气而降低因为吸附剂在空气中易吸收湿气而降低其活性。其活性。整个点样过程最好控制在整个点样过程最好控制在10分钟分钟左右。左右。55点样基线距底边点样基线距底边1.01.01.51.5cmcm，点样直径一般点样直径一般为为2 24 4mmmm，各原点必须在各原点必须在同一水平线上，同一水平线上，点间距点间距约为约为1.51.52.0cm2.0cm。点样点样时勿损伤薄层表面时勿损伤薄层表面。点样量大时，要分次点点样量大时，要分次点加，加，使原点集中，使原点集中，为保为保证样品不扩散，可借助证样品不扩散，可借助吹冷、热风或加热方式吹冷、热风或加热方式进行点样。进行点样。56（四）（四）展开剂

34、和展开剂和展开展开展开剂的选择主要展开剂的选择主要是是根据吸附剂、分离物质的性根据吸附剂、分离物质的性质以及展开剂极性三者之间的关系来考虑。质以及展开剂极性三者之间的关系来考虑。展开方式很多，有上行、下行、双向、多次展开展开方式很多，有上行、下行、双向、多次展开等。最常用的是上行展开法，所用展开缸的底部等。最常用的是上行展开法，所用展开缸的底部必须平整，将薄层板放入后能呈水平，磨口盖要必须平整，将薄层板放入后能呈水平，磨口盖要严密，必要时可涂少量凡士林密封，但须严防污严密，必要时可涂少量凡士林密封，但须严防污染薄层板及展开剂。在展开缸中，薄层板对溶剂染薄层板及展开剂。在展开缸中，薄层板对溶剂蒸

35、气的吸附对薄层分离的影响很大。由于对饱和蒸气的吸附对薄层分离的影响很大。由于对饱和度的要求不同，如有的需要用展开剂先将展开缸度的要求不同，如有的需要用展开剂先将展开缸饱和，有的需将薄层板在展开缸中用展开剂饱和，饱和，有的需将薄层板在展开缸中用展开剂饱和，有的则不需要饱和，故需按不同要求进行操作。有的则不需要饱和，故需按不同要求进行操作。57薄层板浸入展开剂的薄层板浸入展开剂的深度一般为深度一般为0.50.5cmcm(上上行展开行展开)或或0.30.3cmcm(斜斜上行展开上行展开)，展开距，展开距离一般为离一般为8 81515cmcm,高高效薄层板展距效薄层板展距5 58cm8cm。展开剂宜临

36、用新配，展开剂宜临用新配，不宜反复使用。不宜反复使用。58（五）（五）显显 色色物理方法有荧光法、荧物理方法有荧光法、荧光熄灭法等，化学方法光熄灭法等，化学方法一般是用化学试剂显色一般是用化学试剂显色的方法。的方法。显色剂有通用显色剂显色剂有通用显色剂(如硫酸乙醇溶液、如硫酸乙醇溶液、磷磷钼酸乙醇溶液、钼酸乙醇溶液、碘蒸气碘蒸气等等)和专属显色剂和专属显色剂(如生如生物碱用稀碘化铋钾、氨物碱用稀碘化铋钾、氨基酸用茚三酮试液等基酸用茚三酮试液等)。59（六）检（六）检 视视日光下目测检视：斑点本身有颜日光下目测检视：斑点本身有颜色、显色剂显色后斑点呈色。色、显色剂显色后斑点呈色。紫外光灯下检视：

37、紫外光灯下检视：365nm、254nm60 六味地黄丸中六味地黄丸中熊果酸的熊果酸的薄层色谱结果薄层色谱结果61Documentation with digital camera62 Visual inspection of Astragalus and HedysarumTrack 1,2,3=Astragalus 2,5,10 L Track 4,5,6=Hedysarum 10,5,2 TrTrack 1,2,3=Astragalus 2,5,10 L Track 4,5,6=Hedysarum 10,5,2 L、25,2 L2,3=Astragalus 2,5,10 L Track 4

38、,5,6=Hedysarum 10,5,2 LL 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 UV 254 1 2 3 4 5 6 Visual light Fluorescence Fluorescence quenching63Image capturingValerian(缬草)white light64Image capturing Valerian(缬草)UV-254nm65Image capturingValerian(缬草)UV 366 400 nm Weak fluorescent zones:use Long Time Integration66（七）检出物的定性（七）检

39、出物的定性薄层分离的斑点检出后需要定性，薄层分离的斑点检出后需要定性，鉴别直接在薄层上进行。在薄层鉴别直接在薄层上进行。在薄层上进行定性鉴别，由于影响薄层上进行定性鉴别，由于影响薄层分离的因素很多，仅仅靠测量分离的因素很多，仅仅靠测量Rf值的方法是不可靠的。一般采用值的方法是不可靠的。一般采用对照品或对照药材在同一条件下对照品或对照药材在同一条件下展开后进行对比的方法（也叫随展开后进行对比的方法（也叫随行对照法）。行对照法）。67采用对照品作对照时，要求供试品采用对照品作对照时，要求供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑置上，显相同颜色

40、的斑点或荧光斑点。采用对照药材作对照时，一般点。采用对照药材作对照时，一般要求供试品色谱中，在与对照药材要求供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点至少斑点或荧光斑点至少23个个。68 从原点到斑点中心的距离从原点到斑点中心的距离Rf值值=从原点到溶剂前沿的距离从原点到溶剂前沿的距离Rf值：值：0.20.869（八）薄层层析中遇到的异常现象（八）薄层层析中遇到的异常现象及解决办法及解决办法在薄层层析分析中，我们希望获在薄层层析分析中，我们希望获得清晰、圆整、得清晰、圆整、Rf值（比移值）值（比移值）稳定且适中稳定且适中（0.20.8）

41、的斑点。的斑点。但是在实际检验工作中，往往遇但是在实际检验工作中，往往遇到异常现象，会妨碍和干扰薄层到异常现象，会妨碍和干扰薄层层析结果。因此，需要探讨其产层析结果。因此，需要探讨其产生的原因与克服的办法。生的原因与克服的办法。701.边边 缘缘 效效 应应 图谱情况：图谱情况：在同一块薄层板上，在同一块薄层板上，用同一种展开剂，在同一展开槽用同一种展开剂，在同一展开槽内展开，薄层板中部的斑点较两内展开，薄层板中部的斑点较两侧斑点的侧斑点的Rf值小（尤其是夏天）值小（尤其是夏天）。71Rg1 ReRb17273产生的原因：产生的原因：因为当展开剂在薄层板因为当展开剂在薄层板上运行时，极性较弱的

42、展开剂和挥发上运行时，极性较弱的展开剂和挥发性较强的展开剂在薄层两边较易挥发。性较强的展开剂在薄层两边较易挥发。因此，它们在薄层两边的浓度比在中因此，它们在薄层两边的浓度比在中间的浓度小间的浓度小，对于同一组分来说，两对于同一组分来说，两侧的侧的Rf值大于中间的，因此就产生了值大于中间的，因此就产生了如图所示的边缘效应。如图所示的边缘效应。74克服的办法：克服的办法：（1）使展开剂充分）使展开剂充分饱和，时间一般在饱和，时间一般在15分钟以上分钟以上，有，有的展开剂需要饱和的展开剂需要饱和30分钟分钟。将预先点好样的薄层板放入展开缸将预先点好样的薄层板放入展开缸中，但不浸入展开剂中，让薄层板中

43、，但不浸入展开剂中，让薄层板及原点上的样品成分充分饱和及原点上的样品成分充分饱和。75（2）在展开缸内壁上贴以浸湿了）在展开缸内壁上贴以浸湿了展开剂的滤纸条。展开剂的滤纸条。（3）用内容较小且封闭严密的展）用内容较小且封闭严密的展开缸。开缸。（4）用窄的薄层板或将薄层板下）用窄的薄层板或将薄层板下角斜切成角斜切成“V”字形。字形。762.拖拖 尾尾 现现 象象 图谱情况：图谱情况：在圆或椭圆形斑点的后在圆或椭圆形斑点的后方呈现拖尾，严重者呈倒火焰状。方呈现拖尾，严重者呈倒火焰状。产生的原因产生的原因:（1）点样量太多点样量太多 展开剂不能全部负载，结果展开剂不能全部负载，结果Rf值下值下降，斑

44、点拖尾。降，斑点拖尾。克服的办法：克服的办法：寻出合适的点样量后，寻出合适的点样量后，再进行层析。再进行层析。7778（2）展开剂展开剂PH值偏高值偏高如果以中性展开剂展开酸性物质时如果以中性展开剂展开酸性物质时(如如有机酸有机酸)，常形成斑点拖尾。因为这些，常形成斑点拖尾。因为这些酸性成分解离成一个或多个电离形式酸性成分解离成一个或多个电离形式而造成的。因为每一个电离形式具有而造成的。因为每一个电离形式具有各自的各自的Rf值，因而在薄层板上移动的值，因而在薄层板上移动的斑点发生连续的物质沉积，而形成拖斑点发生连续的物质沉积，而形成拖尾。尾。克服的办法：克服的办法：在展开剂中加入适量的在展开剂

45、中加入适量的酸酸79（3）展开剂）展开剂PH值偏低值偏低如果以中性展开剂展开碱性物质如果以中性展开剂展开碱性物质（生物碱）和其他弱碱时，常观察（生物碱）和其他弱碱时，常观察到斑点拖尾。到斑点拖尾。克服的办法：克服的办法：将展开剂调至碱性将展开剂调至碱性（加入吡啶、二乙胺、浓氨水）（加入吡啶、二乙胺、浓氨水）803.斑点形成念珠状斑点形成念珠状图谱情况：图谱情况：这是拖尾现象的又一情况，这是拖尾现象的又一情况，即斑点相互重叠，状如念珠。即斑点相互重叠，状如念珠。产生的原因：产生的原因：（1）被层析的被层析的 样品中组分样品中组分太多，以致在一定长度的薄层上排布不太多，以致在一定长度的薄层上排布不

46、开，彼此重叠，形成念珠状。开，彼此重叠，形成念珠状。克服的办法：克服的办法：将样品用不同极性的溶剂将样品用不同极性的溶剂分段萃取，使成为二个或数个被检样品；分段萃取，使成为二个或数个被检样品；或延长层析距离。或延长层析距离。8182（2）点样在原点处形成复斑。有时由于）点样在原点处形成复斑。有时由于样品浓度太稀，常进行多次点样，易造样品浓度太稀，常进行多次点样，易造成每次点样中心不重合，形成具有复斑成每次点样中心不重合，形成具有复斑的原点（念珠状的雏形），展开后往往的原点（念珠状的雏形），展开后往往形成念珠状。形成念珠状。克服的办法：克服的办法：将样品制成适宜的浓度，将样品制成适宜的浓度，尽量一次点样。尽量一次点样。8384放映放映结束！结束！无悔无愧于昨天，丰硕殷实无悔无愧于昨天，丰硕殷实的今天，充满希望的明天。的今天，充满希望的明天。85