教学培训-试验十一抗心肌缺血药物作用研究课件.ppt

1、试验十一、抗心肌缺血药物作用研究试验十一、抗心肌缺血药物作用研究 一、目的一、目的 了解抗心肌缺血新药的评价原则。学习心肌缺血动物模型建立方法及评价指标。观察受试化合物对心肌缺血大鼠的影响，判断其是否具有抗大鼠心肌失常的作用。二、与试验相关的理论知识要点二、与试验相关的理论知识要点 心肌缺血观察指标与方法心肌缺血观察指标与方法 心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。（1 1）心电图指标观察：）心电图指标观察：皮下放置心电图肢体导联电极，测标准导心电图观察药物对S-T段、T波幅度的影响。（2 2）形态学观察：）形态学观察：1

2、.摘取心脏，用生理盐水冲洗，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，称全心湿重。2.沿冠状沟切除右心房和右心室，留下室间隔和左心室，称重。顺房室沟从心尖到心基部平行将狗心室切成1cm厚的心肌片，用生理盐水冲洗干净。3.将心肌片放在1%的氯化三苯基四氮唑（TTC,用的配制）溶液中，在37温孵7min染色,染色过程中不时搅拌染色液使之与心肌有充分接触。4.染色后立即用生理盐水冲洗多余的染料。梗死区不着色，非梗死区被TTC染为红色。5.剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以左心室重即得梗死范围占左心室重的%。（3 3）酶学测定：）酶学测定：测定血液、心肌组织中的

3、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）等指标反应心肌缺血情况。（4 4）心脏功能及血流动力学试验）心脏功能及血流动力学试验 观测指标应包括冠脉流量，心输出量、左室作功左室内压、左室舒张末期压、左室内压最大变化速率、动脉血压、外周阻力等，进行连续动态观测。（5）心肌耗氧量试验）心肌耗氧量试验 心肌代谢、特别是氧的供需矛盾，是冠心病的重要病理生理变化，而多数中药常通过降低心肌耗氧量、改善心肌代谢而达到治疗目的。因此，新药对心肌耗氧量的影响，应列为必做项目。可供选择的试验方法如下 1.直接测定：心肌耗氧量测定，心肌组织氧分压 测定（可多部位、

4、多层次测定），离体心脏、心肌片或心肌细胞耗氧量测定。2.间接测定：张力时间指数，心肌耗氧指数，正性肌力作用。3.耐缺氧试验：离体心脏或心肺灌流耐缺氧试验，心肌细胞培养耐缺氧试验及其他。三、教学试验安排及内容三、教学试验安排及内容（一）教学分组（一）教学分组 在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为8组，每组25人，并分成上下两班，4组/班。（二）试验方案（二）试验方案 全班均采用异丙肾上腺素造模；上半班采用A受试物，建议受试物为丹参酮A磺酸钠；下半班采用B受试物，建议受试物为丹参注射液。四、试验方法及步骤四、试验方法及步骤（一）试验材料一）试验材料试验药品：试验药品：乌拉坦（Urethane

5、），生理盐水配制成20%溶液；0.5%异丙肾上腺素（Isoprenaline）；生理盐水，5%葡萄糖注射液。阳性药：0.2%维拉帕米。受试物：丹参酮A磺酸钠，配制成1%、0.2%溶液；丹参注射液，50%葡萄糖配制成含生药 、0.3g%溶液。试验仪器：试验仪器：生物机能试验系统、紫外、动物秤、大鼠手术台、眼科镊、1ml、5ml注射器、4#、6#针头。（二）试验方法（二）试验方法 取大鼠，称体重；腹腔注射乌拉坦12g/kg（20%乌拉坦，56ml/kg）麻醉；仰卧位固定于手术台上,针型电极插入大鼠皮下，打开生物机能试验系统，待心电图稳定后开始试验，先记录一段正常的大鼠心电图；分组及给药方案如下：上

6、、下半班：上、下半班：第第1 1组、第组、第5 5组：组：静脉注射生理盐水1ml/kg；第第2 2组、第组、第6 6组：组：静脉注射0.2%维拉帕米1ml/kg；第第3 3组：组：静脉注射0.2%丹参酮A磺酸钠；第第7 7组：组：静脉注射丹参注射液1ml/kg，第第4 4组：组：静脉注射1%丹参酮A磺酸钠；第第8 8组：组：静脉注射丹参注射液1ml/kg，5min后，静脉快速注射0.5%异丙肾上腺素溶液1ml/kg，记录大鼠心电图。注射异丙肾上腺素后，以心电图出现S-T段改变或T波变化为缺血标志。每次给完一种药后，观察并记录正常、给Iso前和给Iso后1min、3min、5min、10min、

7、15min、20min、30min和60min的T波和S-T段偏移。将试验结果记录与表格中。（三）试验结果的原始记录（三）试验结果的原始记录 表表1 受试化合物对大鼠受试化合物对大鼠T波幅度的影响波幅度的影响表表2 受试化合物对大鼠受试化合物对大鼠S-T波幅度的影响波幅度的影响表表3 受试化合物对大鼠心率的影响受试化合物对大鼠心率的影响（四）结果分析与讨论（四）结果分析与讨论 综合8个组的试验结果，判断受试物是否具有抗心肌缺血的作用；分析中药单体与复方中药在抗心肌缺血中的特点。（五）试验报告内容及格式要求（五）试验报告内容及格式要求 试验报告内容及格式同前，试验题目由学生自定。注意事项注意事项

8、 动物个体较小，固定大鼠时尤其两前肢不宜过紧，以免影响呼吸；心电图机的针型电极应向心插入皮下，不可插入肌肉内，以免肌电干扰，另外动物周围不要放置金属制品，以免干扰。附：大鼠急性心肌缺血模型（1）将动物注射20%乌拉坦（）麻醉后 固定在手术台上（2）用笔型静脉置留针进行气管插管(或切开气管插管)，连接动物呼吸机，参数为：呼吸频率85；呼吸比1：1；潮气量为18ml。剪开气管插管 笔型静脉置留针气管插管（3）在胸部左侧3-4肋间剪开皮肤 （4）分离肌肉露出肋骨（5）在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开，然后左手用止血钳挑住肋骨，右手持剪刀剪开第三根肋骨（6）用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开，放入开睑器，

9、用止血钳剥离心包膜（7）在左心耳与肺动脉圆锥间穿6-0号线，拉紧丝线，形成心肌缺血，观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌发白。（8）结扎术后取下心脏进行TTC染色 神经系统神经系统X X线诊断线诊断一、脑血管疾病一、脑血管疾病的脑血管造影表现的脑血管造影表现 脑血管疾病包括脑血管瘤、脑血管畸脑血管疾病包括脑血管瘤、脑血管畸形、脑血管狭窄及闭塞和脑血管意外等。形、脑血管狭窄及闭塞和脑血管意外等。其中脑血管意外包括脑出血，蛛网膜其中脑血管意外包括脑出血，蛛网膜下腔出血。而脑血管意外目前主要采用下腔出血。而脑血管意外目前主要采用CTCT、MRI MRI 诊断。诊断。脑血管造影是介入治疗的基础。脑

10、血管造影是介入治疗的基础。脑动脉瘤脑动脉瘤 颅内动脉瘤分为先天性和动脉硬颅内动脉瘤分为先天性和动脉硬化性两类，以先天性多见，但在青化性两类，以先天性多见，但在青少年期前很少见，是蛛网膜下腔出少年期前很少见，是蛛网膜下腔出血原因之一。血原因之一。多发于颅底基底动脉多发于颅底基底动脉环的血管分支处。环的血管分支处。病理：病理：动脉瘤多呈囊状，瘤体可发展增动脉瘤多呈囊状，瘤体可发展增大、破裂、出血、形成血肿、偶尔大、破裂、出血、形成血肿、偶尔钙化，血栓形成。钙化，血栓形成。临床：临床：无症状。无症状。破裂出血时出现脑膜刺激破裂出血时出现脑膜刺激症状，颅内高压，癫痫和颅症状，颅内高压，癫痫和颅神经障碍

11、等症状。神经障碍等症状。造影表现：造影表现：可显示动脉瘤本身及其位置，可显示动脉瘤本身及其位置，大小，形状与脑血管的联系和是否大小，形状与脑血管的联系和是否为多发性。为多发性。了解脑血循环情况。了解脑血循环情况。还可用以判断手术效果和随诊还可用以判断手术效果和随诊现象。现象。瘤体表现：瘤体表现：动脉瘤表现为基底动脉瘤表现为基底动脉环分支处囊状造动脉环分支处囊状造影剂充填影。影剂充填影。较小、直径多在较小、直径多在cmcm以内，有蒂与动以内，有蒂与动脉相连，轮廓光滑，脉相连，轮廓光滑，密度均匀。密度均匀。出血征象：出血征象：直接征象：直接征象：表现是造影剂外溢，但不多见。表现是造影剂外溢，但不多

12、见。间接征象：间接征象：动脉瘤轮廓动脉瘤轮廓毛糙不平，瘤毛糙不平，瘤体不规则，有体不规则，有刺状突起。刺状突起。脑血管狭窄和闭塞 病因：主要为血栓形成：动脉硬化；引流静脉静脉窦 动静脉同时出现 一般无占位改变。剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以左心室重即得梗死范围占左心室重的%。病变多起自大脑的皮质血管，特别是大脑前动脉大脑中动脉供血区，以中央沟附近为多见，多在皮质表面。表2 受试化合物对大鼠S-T波幅度的影响心肌代谢、特别是氧的供需矛盾，是冠心病的重要病理生理变化，而多数中药常通过降低心肌耗氧量、改善心肌代谢而达到治疗目的。造影所见：肿瘤造成蛛网膜下腔完全性或不完

13、全性梗阻。完全梗阻者：梗阻端造影剂形成横贯椎管的大杯口或不规则边缘。临床：突发偏瘫、感觉障碍和失语等。椎管内外占位性病变的线诊断第7组：静脉注射丹参注射液1ml/kg，如瘤体完全为血栓占据，则不能显示瘤体。血栓形成：瘤内充盈缺损，也可呈网状或密度不均。线平片：一般无阳性表现。造影表现：可显示动脉瘤本身及其位置，大小，形状与脑血管的联系和是否为多发性。脑血管狭窄和闭塞 病因：主要为血栓形成：动脉硬化；占位改变：占位改变：造影上出现与瘤体大小不相称的造影上出现与瘤体大小不相称的占位征象，提示有出血血肿存在。占位征象，提示有出血血肿存在。血栓形成：血栓形成：瘤内充盈缺损，也可呈网状或密瘤内充盈缺损，

14、也可呈网状或密度不均。如瘤体完全为血栓占据，度不均。如瘤体完全为血栓占据，则不能显示瘤体。则不能显示瘤体。介入治疗介入治疗 脑血管畸形脑血管畸形 脑血管畸形又称之先天性血管脑血管畸形又称之先天性血管发育异常或血管瘤。发育异常或血管瘤。病因：胚胎期血管丛形成动脉、病因：胚胎期血管丛形成动脉、静脉和毛细血管的正常发育发生静脉和毛细血管的正常发育发生障碍，则引起本症。障碍，则引起本症。病理：病理：血管畸形是血管在生后仍维持胚血管畸形是血管在生后仍维持胚胎期的状态。胎期的状态。按血管结构分为动脉、静脉和动按血管结构分为动脉、静脉和动静脉畸形几种，以动静脉畸形常见。静脉畸形几种，以动静脉畸形常见。病理上

15、是一支或几支扩张迂曲的动脉病理上是一支或几支扩张迂曲的动脉导入一团发育异常的曲张血管，近似小导入一团发育异常的曲张血管，近似小动脉或毛细血管的血管团，又借一支或动脉或毛细血管的血管团，又借一支或几支扩张迂曲的静脉从血管团导出，进几支扩张迂曲的静脉从血管团导出，进入静脉窦。入静脉窦。病变多起自大脑的皮质血管，特别是病变多起自大脑的皮质血管，特别是大脑前动脉大脑中动脉供血区，以中央大脑前动脉大脑中动脉供血区，以中央沟附近为多见，多在皮质表面。沟附近为多见，多在皮质表面。临床：临床：虽属先天性病变，但青少年期虽属先天性病变，但青少年期少见。可无症状。少见。可无症状。由于病变血管破裂出血，可突由于病变

16、血管破裂出血，可突然发生偏瘫、昏迷、呕吐。或者然发生偏瘫、昏迷、呕吐。或者有持续性头疼，局限性癫痫等。有持续性头疼，局限性癫痫等。造影表现：造影表现：导入动脉导入动脉 几支扩张迂曲的动几支扩张迂曲的动脉，表现为排列不脉，表现为排列不整的曲张或细小血整的曲张或细小血管丛。管丛。血管团血管团 血管粗，纠集松，血管粗，纠集松，状如蚯蚓状如蚯蚓 边缘清楚。边缘清楚。血管细，密集，血管细，密集，状如毛线团边缘欠清状如毛线团边缘欠清楚。楚。血管更细，分不血管更细，分不清血管，表现为斑片清血管，表现为斑片状，密度均匀状，密度均匀 轮廓不轮廓不清。清。引流静脉引流静脉静脉窦静脉窦 动静脉同时出现动静脉同时出现

17、 一般无占位改变。一般无占位改变。脑动静脉瘘脑动静脉瘘 脑血管狭窄和闭塞脑血管狭窄和闭塞 病因：病因：主要为血栓形成：主要为血栓形成：动脉硬化；动脉硬化；动脉炎（感染性、非感染性）。动脉炎（感染性、非感染性）。其次为栓子：其次为栓子：先天性心脏病先天性心脏病 风湿性心脏病风湿性心脏病 细菌性心内膜炎细菌性心内膜炎 病理：病理：好发于大脑中动脉和颈段颈内好发于大脑中动脉和颈段颈内动脉的狭窄和闭塞脑梗塞。动脉的狭窄和闭塞脑梗塞。临床：临床：突发偏瘫、感觉障碍和失语等。突发偏瘫、感觉障碍和失语等。造影：造影：大脑中动脉、颈内动脉颈段血管大脑中动脉、颈内动脉颈段血管狭窄或中断，侧支循环形成，血流狭窄或

18、中断，侧支循环形成，血流改道。改道。直接征象：直接征象：血管狭窄、中断呈笔尖状。血管狭窄、中断呈笔尖状。大脑前动脉闭塞大脑前动脉闭塞 间接征象：间接征象：侧支循环侧支循环 基底动脉环之间（两侧大脑前交基底动脉环之间（两侧大脑前交通支之间、前交通支与后交通支之间、通支之间、前交通支与后交通支之间、椎动脉与颈动脉之间等）椎动脉与颈动脉之间等）大脑前、中、后动脉皮质支末梢大脑前、中、后动脉皮质支末梢间交通间交通 同侧颈内、外动脉之间交通。同侧颈内、外动脉之间交通。血流改道：血流改道：颈内动脉闭塞颈外动脉迂颈内动脉闭塞颈外动脉迂曲、扩张曲、扩张 大脑中动脉闭塞大脑前动大脑中动脉闭塞大脑前动脉、后动脉扩

19、张、迂曲脉、后动脉扩张、迂曲脑梗塞：脑梗塞：CT MRICT MRI有特征性改变有特征性改变 二、椎管造影和正常表现二、椎管造影和正常表现 脊髓造影是将造影剂引人脊蛛网脊髓造影是将造影剂引人脊蛛网膜下腔中，通过改变患者体位，在膜下腔中，通过改变患者体位，在透视下观察其在椎管内流动情况和透视下观察其在椎管内流动情况和形态，是椎管内占位性病变诊断的形态，是椎管内占位性病变诊断的重要方法之一。重要方法之一。对比剂：对比剂：碘化油，碘苯脂（用量：碘化油，碘苯脂（用量：3-53-5mlml）流动慢流动慢 非离子化有机碘造影剂如伊索显、非离子化有机碘造影剂如伊索显、欧乃派克、碘必乐等（用量：欧乃派克、碘必

20、乐等（用量：10-1510-15mlml）流动快流动快 30 30分钟即吸收分钟即吸收 方法：上行性方法：上行性 下行性下行性 体位：不断改变体位达到显影目的体位：不断改变体位达到显影目的 正常造影表现：正常造影表现：造影剂在蛛网膜下腔流动通畅，造影剂在蛛网膜下腔流动通畅，分布均匀，可以衬托出脊髓、马尾分布均匀，可以衬托出脊髓、马尾和神经鞘袖轮廓。和神经鞘袖轮廓。椎管内外占位性病变的线诊断椎管内外占位性病变的线诊断 髓外硬膜内占位性病变：髓外硬膜内占位性病变：约占全部椎管肿瘤的约占全部椎管肿瘤的7070。大多。大多数为良性病变，以神经鞘瘤和神经数为良性病变，以神经鞘瘤和神经纤维瘤最多。常位于蛛

21、网膜下腔。纤维瘤最多。常位于蛛网膜下腔。线平片：一般无阳性表现。线平片：一般无阳性表现。造影所见：造影所见：肿瘤造成蛛网膜下腔完全性或肿瘤造成蛛网膜下腔完全性或不完全性梗阻。不完全性梗阻。梗阻端呈杯口状或帽样征。梗阻端呈杯口状或帽样征。脊髓推向健侧，健侧梗阻端造脊髓推向健侧，健侧梗阻端造影剂窄而尖，且低于病侧。影剂窄而尖，且低于病侧。2.2.髓外硬膜外占位性病变：髓外硬膜外占位性病变：约占全部椎管肿瘤的约占全部椎管肿瘤的15%15%。大多。大多为恶性肿瘤，其中为恶性肿瘤，其中50%50%为转移瘤。为转移瘤。多位于椎管的后、侧方。多位于椎管的后、侧方。平片表现：平片表现：椎体和相邻椎体和相邻骨骼

22、侵蚀性破骨骼侵蚀性破坏或压迫性萎坏或压迫性萎缩。缩。造影表现：可显示动脉瘤本身及其位置，大小，形状与脑血管的联系和是否为多发性。第1组、第5组：静脉注射生理盐水1ml/kg；造影所见：肿瘤造成蛛网膜下腔完全性或不完全性梗阻。三、教学试验安排及内容多位于椎管的后、侧方。间接征象：动脉瘤轮廓毛糙不平，瘤体不规则，有刺状突起。脑梗塞：CT MRI有特征性改变第7组：静脉注射丹参注射液1ml/kg，学习心肌缺血动物模型建立方法及评价指标。如瘤体完全为血栓占据，则不能显示瘤体。注射异丙肾上腺素后，以心电图出现S-T段改变或T波变化为缺血标志。对比剂：碘化油，碘苯脂（用量：3-5ml）流动慢 非离子化有机

23、碘造影剂如伊索显、欧乃派克、碘必乐等（用量：10-15ml）流动快 30分钟即吸收神经鞘袖受压、中断。造影所见：肿瘤造成蛛网膜下腔完全性或不完全性梗阻。或者有持续性头疼，局限性癫痫等。心电图机的针型电极应向心插入皮下，不可插入肌肉内，以免肌电干扰，另外动物周围不要放置金属制品，以免干扰。而脑血管意外目前主要采用CT、MRI 诊断。髓内占位性病变 占椎管内肿瘤15%。造影所见：造影所见：1.病侧蛛网膜下腔造影剂于同侧椎病侧蛛网膜下腔造影剂于同侧椎管距离增大（大于管距离增大（大于2-3mm）。）。2.阻塞端造影剂呈阻塞端造影剂呈梳齿状或水平截断梳齿状或水平截断 3.脊髓、蛛网膜受脊髓、蛛网膜受压向

24、健侧移位。压向健侧移位。椎间盘脱出：椎间盘脱出：1.椎间隙平面硬脊椎间隙平面硬脊膜受压，可见压迹或膜受压，可见压迹或充盈缺损。充盈缺损。2.神经鞘袖受压、神经鞘袖受压、中断。中断。3.造影剂流动受阻。造影剂流动受阻。3.髓内占位性病变髓内占位性病变 占椎管内肿瘤占椎管内肿瘤15%。大部分为胶质细胞瘤，以星形大部分为胶质细胞瘤，以星形细胞瘤最多见。细胞瘤最多见。病变大多沿纵轴浸润型生长，无病变大多沿纵轴浸润型生长，无完整包膜，生长缓慢。完整包膜，生长缓慢。平片表现：平片表现：较大的髓较大的髓内肿瘤可压内肿瘤可压迫椎管使之迫椎管使之扩大。扩大。造影所见：造影所见：1.不全梗阻者：不全梗阻者：病变区

25、造影病变区造影 剂流动缓慢。剂流动缓慢。范围较大。范围较大。脊髓局部膨大脊髓局部膨大 呈梭形充盈缺损。呈梭形充盈缺损。2.完全梗阻者：完全梗阻者：梗阻端造影剂梗阻端造影剂形形成横贯椎管的大成横贯椎管的大杯口杯口或不规则边缘。或不规则边缘。梗阻以下梗阻以下脊髓无移脊髓无移位。位。脊髓肿瘤的鉴别诊断脊髓肿瘤的鉴别诊断 髓内髓内 髓外膜内髓外膜内 髓外膜外髓外膜外发病率发病率 15%70%15%15%70%15%病病 理理 胶质瘤胶质瘤 神经鞘瘤神经鞘瘤 恶性恶性 神经纤维瘤神经纤维瘤脊髓移位脊髓移位 无无 有有 有有 脊髓增粗脊髓增粗对比剂与对比剂与 紧紧 宽宽 宽大于宽大于2 2mmmm椎管的距离椎管的距离梗阻程度梗阻程度 不全性多不全性多 完全性完全性 完全性完全性梗阻端梗阻端 正中正中 偏心性偏心性 平削状平削状充盈缺损充盈缺损 大杯口大杯口 小杯口小杯口 梳齿状梳齿状椎管平片椎管平片 椎管扩大椎管扩大 无改变无改变 椎管扩大椎管扩大 骨质破坏骨质破坏谢谢！