结核分枝杆菌传统药敏试验方法培训课件.ppt

1、药敏试验的目的药敏试验的目的1结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/20222结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022/3结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/20224结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/20225结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/20226结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/20227结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022药敏试验的校正药敏试验的

2、校正获获得最相得最相关关的的临临床耐床耐药标药标准准 可能的敏感株的敏感可能的敏感株的敏感级别级别在治在治疗疗反反应变应变化方面化方面测测定敏感性水平定敏感性水平从从未接受未接受过过治治疗疗的患者的患者(PS)与与至少接受至少接受5/6个个月治月治疗疗的患的患者者(PR)的的标标本菌株的敏感性本菌株的敏感性进进行比行比较较 PS=100 菌株菌株;PR=50 菌株菌株Cantti G,et al.Bull WHO 1969;41:21-43.8结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022可能敏感菌株可能敏感菌株/（可能无耐药性菌株）在不同药（可能无耐药性菌株）在

3、不同药物浓度下的抑菌分布物浓度下的抑菌分布Minimal inhibitory concentrations(MIC)最小抑菌最小抑菌浓浓度度Frequency of strainsClinicallysusceptiblestrains(PS)Breakpoint1 SD3 SD9结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022Frequency of strainsMinimal inhibitory concentrations(MIC)Clinicallysusceptiblestrains(PS)Clinicallyresistantstrains(PR)

4、10结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药菌株最低抑菌浓度的分布菌株最低抑菌浓度的分布Frequency of strainsMinimal inhibitory concentrations(MIC)PSPR2 mcg/mlBreakpoint13.1 as“R”75.811.1 as“S”11结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022可能敏感可能敏感/可能耐药菌株对利福平的最小抑菌可能耐药菌株对利福平的最小抑菌浓度的累积分布浓度的累积分布（此试验采

5、用（此试验采用 L-J 培养基用绝对浓度法）培养基用绝对浓度法）85.812结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022Frequency of strainsMinimal inhibitory concentrations(MIC)Clinicallysusceptiblestrains(PS)Clinicallyresistantstrains(PR)13结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022采用采用 L-J 培培养养基基Do not quote this data!(n=81)(n=111)14结核分枝杆菌传统药敏试

6、验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022 校正的乙胺丁醇的临界浓度校正的乙胺丁醇的临界浓度(此试验采用改良罗氏培养基的绝对浓度法)42%50%15结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022In L-J MediumIn 7H10 Medium67%67%16结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022抗抗结结核核药药物的最低抑菌物的最低抑菌浓浓度比平均峰度比平均峰值值EMBETHOFXCFXINHRMPKMCPMPASSM17结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022推荐的临临界浓

7、浓度药药物LJ*7H107H11Bactec 460MGIT 960异异烟肼肼0.20.20.20.10.1利福平40.01.01.02.01.0乙胺胺丁醇2.05.07.52.55.0链链霉素4.02.02.02.01.0吡嗪酰胺吡嗪酰胺NRNRNR100.0100.0卡那霉素30.05.06.04.0阿米卡星40.01.01.0卷曲霉素40.010.010.01.252.5环环丙沙星2.02.02.02.01.0氧氟氧氟沙星2.02.02.02.02.0莫西沙星0.5 0.25 加替沙星1.0乙硫异酰胺异酰胺5.010.02.55.0丙硫异异烟胺胺40.01.252.5PAS1.02.08

8、.02.0环丝酰胺环丝酰胺40.0NRNRNRNR氨苯氨苯硫脲脲NRNRNRNRNR利奈唑酮唑酮1.01.0*Proportion WHO推荐推荐药药敏敏试验试验的的临临界界浓浓度度,200718结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/202219结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022(4)20结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022浓缩过程中利福平的稳定性浓缩过程中利福平的稳定性21结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022抗结核药物的储存抗结核药物的储存在

9、密封的硅在密封的硅胶胶容器容器内储内储存存(最好在最好在真真空下空下储储存存)22结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/202223结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022比例法比例法 (by Middlebrook&Cohn)Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 +3 10-5 26 9 0%resistant 34.6 0.1Interpretation Resistant Susceptible24结核分枝杆菌传统药

10、敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022药药敏敏试验结试验结果果-11.If use nichrome wire(0.7 mm wire/3 mm of internal diameter),inoculate oneloopful of bacterial suspension of 10-2/or if use pipette,inoculate 0.1 ml of 10-3/of bacterial suspension2.If use nichrome wire,inoculate one loopful of 10-4/bacterial suspension or

11、 if use pipette,inoculate 0.1 ml of 10-5/.DrugNoneINHRIFSMEMBPNBConcentrations(/)00.240.04.02.0500.0Tube NoC1H1R1S1E1PBInoculum(10-4)13+2+11870Tube NoC2H2R2S2E2Inoculum(10-6)2282000InterpretationR(7.1)(2/28x100)S(0.03)(1/2800 x100)S(0.6)(18/2800 x100)S(0.3)(7/2800 x100)MTB25结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试

12、验方法10/28/2022药药敏敏试验结试验结果果-21.If use nichrome wire(0.7 mm wire/3 mm of internal diameter),inoculate oneloopful of bacterial suspension of 10-2/or if use pipette,inoculate 0.1 ml of 10-3/of bacterial suspension2.If use nichrome wire,inoculate one loopful of 10-4/bacterial suspension or if use pipette,

13、inoculate 0.1 ml of 10-5/.DrugNoneINHRIFSMEMBPNBConcentrations(/)00.240.04.02.0500.0Tube NoC1H1R1S1E1PBInoculum(10-4)14+2+21+3+0Tube NoC2H2R2S2E2Inoculum(10-6)22+50010Interpretation?S?MTB26结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022药药敏敏试验结试验结果果-31.If use nichrome wire(0.7 mm wire/3 mm of internal diamete

14、r),inoculate oneloopful of bacterial suspension of 10-2/or if use pipette,inoculate 0.1 ml of 10-3/of bacterial suspension2.If use nichrome wire,inoculate one loopful of 10-4/bacterial suspension or if use pipette,inoculate 0.1 ml of 10-5/.DrugNoneINHRIFSMEMBPNBConcentrations(/)00.240.04.02.0500.0Tu

15、be NoC1H1R1S1E1PBInoculum(10-4)13515000Tube NoC2H2R2S2E2Inoculum(10-6)200000InterpretationRR?MTB27结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/202228结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022 17个跨国参比实验室网络第个跨国参比实验室网络第14轮熟练度测试结果轮熟练度测试结果（数据来源于（数据来源于Armand Van Deun 2007年）年）敏感性敏感性特特异异性性效能效能可重可重复复性性Isoniazid异异烟烟肼肼S敏感敏感=

16、13R耐耐药药=17Average(%)99999998100%1314111495%4313Rifampicin利福平利福平S敏感敏感=10R耐耐药药=17Average(%)99999998100%1414121495%3323StreptomycinS敏感敏感=11R耐耐药药=16Average(%)97919594100%12117995%5688EthambutolS敏感敏感=17R耐耐药药=4Average(%)88979697100%111381195%6476蓝色数字表示实验室数量蓝色数字表示实验室数量29结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/20

17、22 51个国家（或地区）参比实验室利福平和个国家（或地区）参比实验室利福平和异烟肼药敏试验结果的一致性异烟肼药敏试验结果的一致性（世界卫生组织第四期全球耐药报告，（世界卫生组织第四期全球耐药报告，2008）%Agreement一致性一致性Isoniazid异异烟烟肼肼Rifampicin利福平利福平10038(77.6)37(72.5)95-996(12.2)9(17.6)90-944(8.2)5(9.8)901(2.0)0Total number of labs 合合计计49(100.0)51(100.0)30结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022Te

18、stDrug药药物敏感性(%)特异异性(%)患病情况况下的耐药结药结果预测值预测值(%)1%15%110%130%1KM2100909.234.552.681.1CPM21009620.056.873.591.5OFX21009725.064.178.793.5ETH279918.232.049.479.0二二线线抗抗结结核核药药物耐物耐药预测值药预测值1 Prevalence rates2 Results of SLDST proficiency tests done once in 2004(coordinated by Dr.Nuria Martine Casabona)(partici

19、pated SRL=9)3 Based on sensitivity/specificity of 9 rounds proficiency tests of SRLs,1994-200231结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022Resistance predictive values(%)Resistance prevalence 敏感性敏感性=99.6%特特异异性性=97.9%32结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/202233结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/202234结核分枝杆菌传统药敏试验方法结核分枝杆菌传统药敏试验方法10/28/2022