检疫性细菌病害课件.ppt
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1、植物病原细菌检疫检验技术植物病原细菌检疫检验技术 直接检测:直观检验和生长检验 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测1、活菌检测 分离培养法:营养培养基、选择培养基或鉴别培养基分离纯化得到的细菌 浓缩接种及离体叶检测:提取液浓缩接种感病植物,观测发病情况。例如:浙江大学等在1灭菌水琼脂中加75106的苯并咪唑,做平板,加感病植物叶片,针刺摩擦接种,培养(光、温、湿度),短期获得症状。主要应用于水稻细菌性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。4.非活菌检测 非活菌检测的方法很多,下表是检测病原细菌常用的一些方法,前9种血清学方法,均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴
2、定,又能直接用于病种或病株,甚至是无症感染组织的检测。5.血清学检验 原理:方法:酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光抗体法 免疫荧光抗体法:将荧光染料(异硫氢酸荧光黄或罗丹明)与抗体以化学方法接合,再与抗体反应,形成有荧光标记的抗体抗原复合物,在荧光显微镜下,可观察到黄绿色荧光。梨火疫病Fire blight of pear1878年首先由burrill描述,在纽约发生,后由Erwin命名,是第一个被确定的植物细菌病害。主要分布于北美洲于西北欧,中欧、地中海、东南欧及大洋州和亚洲也有分布。大约40多个国家。梨火疫病的地理分布 梨火疫病菌寄主范围很广,能为害梨、苹果、山楂、木旬子、李等多个
3、属220多种植物,大部分属蔷薇科Pomoideae亚科。仁果类果树的一种毁灭性病害。一棵多年生的梨和苹果树发病后可在几星期内死亡侵害花、果实、枝条和叶片。u 花:侵染后变深褐色,枯萎。u 叶片:从叶缘沿叶脉扩展,先呈水浸状,后黑褐色。u 嫩稍:先水浸状,后褐色至黑色,向下弯曲,呈鱼钩状。u 果实:病部褐色凹陷,扩展到全果,潮湿时病部生粘稠的细菌溢,初乳白色,后红褐色。u 病枝:叶片凋萎,幼果僵化,但病叶病果不脱落,远望似火烧状,故称火疫病。u 伤口:初期水浸状,后下陷,呈溃疡斑,病健交界处产生龟裂纹,韧皮部红褐色,有黏液状菌脓。严重时,病害从嫩稍很快扩展到枝条、主干,直至根部,全株死亡。Adv
4、anced fire blight on fruit-note bacterial ooze on fruit.Fireblight in nursery stock u主要鉴定特征:主要鉴定特征:梨火疫病最典型的症状是花、果实和叶片受火疫病菌侵害后,很快变黑褐色枯萎,犹如火烧一般,但仍挂在树上不落,故此得名。目前国际上将其症状据受侵害的部位,分成个阶段。(1)花枯萎:侵染开放的花引起花枯萎。一般发生于早春,病菌直接从花器侵入,初为水渍状斑,花基部或花柄暗色,不久萎蔫。病菌可扩展至花梗及花簇中其它的花;在温暧潮湿条件下,花梗上有菌脓渗出。随着枯萎发展,花梗、花等变褐至黑褐色,条件适宜时可继续侵
5、染杀死小枝并形成小溃疡斑。(2)溃疡枯萎:是指前一季越冬溃疡边缘的病菌重新复活的结果。初症是在复活的溃疡附近的健康树皮组织上出现窄的水渍状区,几天后,树皮内部组织出现褐色条斑,随后病菌侵入附近繁殖枝内部并引起萎蔫死亡。这些枝条特别是嫩枝与下面谈及的枝枯萎有明显区别,即在萎蔫之前枝尖芽褪色(黄至桔黄色)。(3)枝枯萎:细菌直接侵入前 13叶的枝尖,然后杀死整个枝条及支持枝。初症是枝尖萎蔫,但萎蔫前不褪色,象拐杖状。条件适宜时,几天内可移动1530cm,造成整枝死亡,病枝、枝皮、叶通常变黑。潮湿时,枝条上出现菌脓。后期,终芽前出现的枝枯萎一般不会萎蔫,且仅在枝最上部出现坏死。随着病菌不断深入,并侵
6、染主干,皮层收缩,下陷,形成溃疡斑。(4)病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞,或由风引起的伤口侵入叶片,初叶边坏死,并向中脉、中柄、茎扩展,后变黑,通常有菌脓。(5)损伤枯萎和砧木枯萎:这二种比较特殊,前者主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起,如果实 很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种EMAL-26、EMLA-9和MARK-39砧木。通常是由感病的接穗在这些砧木上发病后引起,最终成溃疡带而杀死树体。学名:Erwinia amylovora(Burrill)Winslow 异名:Micrococcus amylovorus Burril Bacillus amylovorus(Burri
7、ll)Trevisan Bacterium amylovorus (Burrill)Chester 分类地位:原核生物界(Procaryotes),薄壁菌门(Gracilicutes),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)欧文氏菌属(Erwinia)解淀粉欧文氏菌 形态特征:形态特征:直杆菌,有荚膜,周生鞭毛,能运动,大小为0.9-1.8 0.6-1.5m,多数单生,有时成双或短时间内3-4个呈链状。革兰氏染色阴性。在蔗糖培养基上27下培养3d,菌落直径34mm,白色至奶油色,半球形隆起,有黏性,表面光滑,边缘整齐,中心绒环状。兼性厌氧,过氧化物酶阳性,氧化酶阴性,好气条件下利用葡
8、萄糖产酸不产气,厌氧条件产酸缓慢。明胶碟形液化缓慢。不产生硫化氢,不利用丙二酸盐。葡萄糖酸盐氧化和七叶苷水解不稳定。氯化钠浓度高于2以上时生长延缓,至67%时则完全抑制。抗青霉素,对氯霉素、链霉素和土霉素敏感。细菌生长的温度范围637,最适温度2527.5,致死温度4550,10 min,最适酸碱度为PH6.0。梨火疫病菌以简单的细胞分裂繁殖,一个细胞在条件适宜时,天内在寄主植物组织中能达到109细胞,每个细胞都是一个侵染源,感染寄主而引起病害的发展。除蛋白酶外,病菌不产任何有助于侵入寄主的酶,主要是在环境条件适宜时,通过胞间组织侵入薄壁组织的病菌产生胞外多糖。胞外多糖在病害发展过程中起重要的
9、作用,其是菌脓的重要成份。菌脓的理化性质随湿度变化而变化,干时皱、硬,大时膨胀易被雨水扩散,中等湿度的菌脓粘易被昆虫、风传播。u发病规律:发病规律:病菌在病株病疤边缘组织处越冬,挂在树上的病果也是越冬场所,如果冬季温和,病菌还能在病株树皮上度过,来年早春病菌在上年的溃疡处迅速繁殖,遇到潮湿、温和的天气,从病部渗出大量乳白色粘稠状的细菌分泌物,即为当年的初侵染源,通过昆虫、雨滴、风、鸟类以及人的田间操作将病菌传给健株。病菌亦通过伤口、自然孔口(气孔、蜜腺、水孔)、花侵入寄主组织,有一定损伤的花、叶、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。u 近距离传播:雨水是果园短距离传播的主要因子,其次风亦是中短距离传播的
10、重要因子,往往在沿着盛行风的方向,病原菌以单个菌丝、菌脓或菌丝束被风携带到较远距离。除次之外,昆虫对病菌的传播扩散起一定的作用。传病昆虫包括蜜蜂在内有77个属的100多种昆虫,其中密蜂的传病距离约为200 400 m。u 远距离传播:主要是感病寄主繁殖材料,包括种苗、接穗、砧木、水果、被污染的运输工具、候鸟等。梨火疫病的远距离传播梨火疫病的远距离传播发生条件发生条件:受伤的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵染。经冰雹袭击,病害蔓延更加迅速。较高气温(1824)和较高的湿度(70以上)有利于病菌侵染。u检验方法:1.产地检验:2.症状观察:梨火疫病的症状很典型,是鉴定的重要方法,但必须与其他症状相似的
11、梨梢枯病区分开。梨梢枯病仅限于危害花器、叶片和嫩梢,不危害枝条和茎干,病部无细菌溢脓,叶片上最初为深褐色斑点,周围有红色晕圈,枯死的病叶不会长期挂在树上3.可采用选择性培养基和鉴别性培养基进行。MS培养基菌落为红橙色,背景为兰绿色。配方:琼脂20g,甘露醇10g,L-天门冬酰胺3g,牛胆酸钠2.5g,磷酸氢二钾2.0g,烟酸0.5g,MgSO47H2O0.2g,次氮基三乙酸0.2g,硫酸十七烷基钠0.1ml,0.5%溴麝香草酚兰水溶液9ml,0.5%中性红2.5ml,蒸馏水970ml,pH7.3灭菌后加1%放线菌酮5ml,1%硝酸铯水溶液1.75ml。CG培养基在29培养48小时后形成典型的火
12、山口状菌落。配方:水380ml,蔗糖160g,营养琼脂12g,结晶紫0.8ml(1%乙醇溶液),0.1%放线菌酮20ml。梨火疫病菌致病性试验可用梨片或梨嫩枝测定,亦可用烟草过敏反映检查。NA上培养48小时的细菌配成108 cells/ml的悬液,注入烟草叶片或接种于1cm厚梨片、或针刺接种于丈长的巴黎枝条,28下培养,一般1012小时后,烟草注射区出现白色坏死斑。13天后,梨片或枝条上出现白色菌脓,则可确诊。免疫荧光、ELISA、ODD和凝集实验6.分子生物学方法:分子生物学方法:核酸探针和PCR技术检疫和防治检疫和防治 1.严格检疫,禁止从疫区引入蔷薇科仁果类果树树苗。2.剪除病梢病枝。3
13、.药剂防治:120mg/kg链霉素喷雾,或花期用波尔多液喷雾防治,效果很好。4.种植抗病品种:5.避免在低洼易涝地定植。芽前刮除发病树皮,在生长季节每隔7天检查1次各种发病新梢和组织,发现后及时剪除。对因各种农事操作造成的伤口都要进行涂药保护等。Stewarts bacterial wilt of corn:1889年纽约首先报道,现已20多个国家。分布于美国、加拿大、墨西哥、越南、泰国、马来西亚、前苏联、波兰、瑞士、意大利、前南斯拉夫、罗马尼亚、希腊、哥斯达黎加、波多黎各、圭亚那、秘鲁、巴西。主要是甜玉米,也侵染马齿玉米、粉质玉米、硬粒玉米和爆裂玉米。:维管束病害、毁灭性病害。:整个生育期都
14、可危害,以开花期症状最明显。早期症状表现为植株矮化,萎蔫,雄穗退色早枯,叶片边缘产生波纹状不规则病斑,初期水浸状,黄色,与叶脉平行,贯穿全叶,宽110mm,严重时病叶萎蔫死亡。生长后期,叶片产生许多小病斑,结合成大块,火烧状干枯死亡。髓部有空腔,导管被黄色黏液阻塞,萎蔫植株的下部切口有黄色细菌溢脓。果穗的菌脓可通过内层包叶的气孔渗出,籽粒表面沾满细菌菌脓,病籽粒变形、皱缩和变色。Necrotic lesions on mature leaves;second phase of Stewarts wilt disease.:玉米细菌性枯萎病菌玉米细菌性枯萎病菌 学名学名 Pantoea stew
15、artii(Smith)Mertaert et al.异名异名 Erwinia stewartii(Smith)Dye;Pseudomonas stewartii Smith;Apalnobacter stewartii(Smith)McCulloch;Bacillus stewartii(Smith)Holland;Bacterium stewartii(Smith)Smith;Phytomonas stewartii(Smith)Bergye et al;Pseudobacterium stewartii(Smith)Hrasilnikov,1949;Xanthomomas stewart
16、ii(Smith)Dowson英文名英文名 Stewarts bacterial wilt of corn 分类地位分类地位 原核生物界(Procaryoces),薄壁菌门(Gracilicutes),肠杆菌科(Enterobacteri-aceae),泛菌属(Pantoea)u形态特征:好气性短杆菌,两端钝圆,无鞭毛,有荚膜,G,单生或双生,0.40.80.92.2。在牛肉膏培养基上形成黄色圆形菌落,全缘,表面扁平光滑,能利用葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、木糖、甘油鹤甘露糖、醇等产酸,但不产生气体。在肉汤培养液中生长微弱,形成灰色环和黄色沉淀物。细菌生长温度最低温度89,最适温度30,
17、最高温度39,致死温度53 10min,适宜PH4.58.5,最适6.08.0。:初侵染来源带菌的种子和昆虫。土壤和病原残体不能越冬,昆虫是病原细菌的传播介体和重要的越冬场所。最重要的传病昆虫是玉米叶甲,它以成虫带菌越冬,细菌存在于消化道中。越冬后现在早播玉米苗上取食,引起初侵染,并产卵发育成新一代成虫,继续向其它植株传病。Corn flea beetle(Chatocnema pulicaria)vector of the Stewarts wilt bacterium(Pantoea stewartii).:发病与流行主要决定于冬季气温(12、1、2月)的高低,若平均气温总和在37以上,有
18、利虫媒越冬,带菌昆虫成活率高,有可能引起发病。低于32则很少流行。此外有利于发病的条件包括土壤氮肥水平偏高,钾肥水平偏低,高温高湿等。:u产地检验:u种植检验:种子长出的植株有明显的症状。u分离培养基:采用伊凡诺夫选择培养基,其成分如下:u甘油30ml 柠檬酸铁铵10g 磷酸氢二钾2.5g,氯化钠15gu硫酸镁0.1g,琼脂17g 氯化钙0.1g,蒸馏水1000ml,PH7.0u 为了抑制杂菌的污染,还可采用选择性黑色素培养基,其成分如下:u酵母浸膏 1g 甘油 30ml 制霉菌素 200mg/mlu牛胆酸钠 3g 氯化钠 15g 1%水溶性黑色素20mlu琼脂 17g 蒸馏水 1000ml
19、PH6.7u30下培养7d,对光观察,菌落中心呈黑色,边缘透明,菌落圆形,表面光滑,呈粘状。u将分离的细菌接种在玉米苗上,验证是否发病。4.噬菌体检验法:用专化性噬菌体,如ZP6、ZP82等检验。5.血清学检验:用酶联免疫法等检验。1.禁止从国外疫区进口玉米种子2.种子处理:(1)微波炉70处理10min,效果很好。(2)环氧乙烷熏蒸:(3)恒温处理:50下处理4d,消灭种子内部细菌效果显著,不影响发芽。(4)抗菌素温浸法:3.防治传播媒介昆虫:4.种植抗病品种:柑橘黄龙病Citrus Yellow shoot 分布:分布:1939年在中国广东发现该病,现已扩展到亚洲和非洲37个国家和地区,中
20、国主要发生在广东、广西、福建、台湾、海南、云南、贵州、四川、浙江、湖南、江西等省。寄主:寄主:主要是柑橘属、金柑属和枳属。草本植物有长春花。危害:危害:是柑橘的毁灭性病害,感病的柑桔品种得病后可在35年内丧失结果能力,甚至枯死。症状:症状:典型症状是在浓绿的树冠中出现12条或多条的发黄枝梢,有两种类型:一种是整张叶片均匀黄化,另一种是叶片呈黄绿相间的斑驳状。共同特点是叶质硬化、无光泽,但在黄梢下部的老叶仍呈正常绿色。病果小,果皮光滑,畸形,无光泽,味酸,果皮着色时黄绿不均匀或在果蒂附近变橙红色,而其余部份仍为青绿色的青果 病原Liberobacter asiaticum(亚洲)、Liberob
21、acter africanum(非洲)分类地位:原核生物界(Procaryoces),薄壁菌门(Gracilicutes),韧皮部杆菌属 Liberobacter英文名称:Citrus Huanglongbing;Citrus Yellow shoot;Citrus greening 未能在人工培养基上分离获得纯培养,在电镜下为椭圆形或短杆状的细菌,大小为306005001400m,细胞壁厚度为2530 m。革兰氏染色阴性,对四环素及青霉素敏感。根据其对热的反应和传病木虱的不同,分为两个株系:在亚洲,其发病的最适温度为2732,传播介体为亚洲木虱(Diaphorina citri),病原为柑桔
22、黄龙病原亚洲株系(L.asiaticum);在非洲,其发病的最适温度为2024,传播介体为非洲木虱(Trioza aryteae)病原为柑橘黄龙病非洲株系(L.africanum)。可以通过嫁接及菟丝子传播,但不能通过汁液和土壤传播。传播:远距离传播主要是来自病区调运的苗木、接穗;大田主要依靠柑橘木虱进行传播,在亚洲是亚洲木虱,在非洲是非洲木虱。发生条件:亚洲多发生在热带亚热带地区,喜高温;在非洲多在冷凉气候下发生,30以上高温病害受抑制。检验与检测:1.产地检验:每年1012月症状表现最明显2.生物学诊断:鉴别寄主法3.电镜检查:4.荧光显微镜检查:黄色荧光5.化学诊断:染色法6.血清学检测
23、:检疫与防治:1、实行检疫 禁止病区苗木及一切带病材料进入新区和无病区,新开辟的果园要种植无病苗。2、建立无病苗圃,培育无病苗木 要切实做到对优良单株进行脱毒(茎尖嫁接脱毒或热力脱毒)并经鉴定证明不带菌;在网室内建立种质圃;在隔离地方或在网室内建立无病母本园;在隔离地方或在网室内建立无病苗圃。3、挖除病株 发现病株或可疑病株,应立即挖除,用无病苗进行补植。4、防治柑桔木虱 通过水肥管理控梢以减少木虱繁殖和传播。新梢期喷布12次杀虫剂。果园四周栽种防护林带,对木虱的迁飞也有阻碍作用。椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing分布分布 椰子致死黄化病的名称来源于Nutman
24、and Roberts(1955)。他们首次用致死黄化(lethal yellowing)命名在加勒比海、牙买加西部地区发生的一种椰子致死黄化型的毁灭性病害。该病害在加勒比海地区至少已有100年的历史,在西非也有50年的历史。目前分布在拉丁美洲开曼群岛、巴哈马群岛、古巴、多半尼加、海地,非洲和西印度群岛,亚洲的印度尼西亚、辛都、马来西亚、美国佛罗里达洲南部地区等地也有报道。寄主范围:寄主范围:除为害椰子树(Cocos nucifera L.)外,还可以为害油棕、枣椰子、扇棕、马尼拉棕、海棕等30多种棕榈科植物。大部分椰子品种抗病性差,在棕榈科的15个主要类群中,至少有7个是感病的。感病寄主属包
25、括:Allagoptera,桄榔属 Arenga,Arikuryroba,Boraxxus,鱼尾属Caryota,散尾属Chrysalidocarpus,椰子属Cocos,Corypha,Dictyosperma,Gaussia,Hyophorbe,Latania,薄葵属Livistona,Mascarena,Nannorrhops,刺葵属Phoenix,Pritchardia,棕榈属Trachycrpus,Veitchia。危害情况危害情况:是椰子和棕榈科植物的毁灭性病害。在牙买加,据统计1961年的600万株感病的Jamaica Tall椰子中的90在1981年因感染黄化植原体而死亡。在加
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