梅毒的实验室诊断PT学习课件.ppt
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1、梅毒的实验室诊断梅毒的实验室诊断1 2011.8.31 梅毒的实验室诊断 梅毒(Syphilis)是由苍白螺旋体(Treponema Pallidum TP)感染引起的一种慢性性传播疾病,本病表现复杂、病期长,几乎可侵犯全身各个器官,发展过程时隐时现,症状和体征呈多样化,自然感染过程(不治疗)可产生不同临床症状的一期、二期、三期梅毒。22011.8.31 病原体n梅毒螺旋体特点1.小而细螺旋状,长614um,直径0.250.3um.有814规则、紧密螺旋。2.透明不容易着色.3.微需氧(13),人工培养不生长。4.繁殖方式为裂殖.5.对热敏感,骤冷超低温保存数年,复活后接种动物其毒性、活力、形
2、态不变。32011.8.31 致病机理n梅毒螺旋体破损皮肤及粘膜感染 24周潜伏感染局部螺旋体大量繁殖硬下疳 经38周 症状自行消失 TP附近淋巴结 血液播散 全身组织和器官 二期梅毒 三期梅毒 心血管、神经等损害。42011.8.31 传播途径 性传播:性接触n是主要的传染途径n未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性。n随着病期的延长,传染性越来越小。n到感染后4年,通过性接触一般无传染性。52011.8.31 传播途径 垂直传播:胎传n在妊娠任何阶段,梅毒螺旋体均可通过胎盘传染。n病期越长,传染性越小。n早期梅毒的母亲,发生流产、死产、胎儿先天梅毒或新生儿死亡率高于晚期梅毒的母亲。62
3、011.8.31 传播途径间接传播:n污染物、输血。72011.8.31 各期梅毒标本采集及检查方法 临床症状 取材部位 检查方法n一期梅毒 硬下疳、淋巴结 暗视野检查 血液 血清学检查n二期梅毒 皮损、淋巴结 暗视野检查 血液 血清学检查n隐性梅毒 血液 血清学检查n三期梅毒 血液 血清学检查n神经梅毒 血液、脑脊液 血清学检查82011.8.31 梅毒实验室诊断方法梅毒病原体检查血清学检查暗视野检查法镀银染色法直接免疫荧光法确证试验:FTA-ABS、TPHA、TPPA、TP-ELISA、TP-RT 19S-IgM初筛试验:VDRL、USRRPR、TRUST92011.8.31 梅毒实验室诊
4、断方法病原体(梅毒螺旋体)检查:一、暗视野检查 二、直接荧光抗体检查 三、涂片染色检查法:镀银染色、吉姆萨染色、墨汁负染色。102011.8.31 病原体检查法n 一、暗视野检查法n 原理一期梅毒硬下疳、肿大淋巴结的淋巴液。二期梅毒皮肤粘膜损害、扁平疣、梅毒疹。梅毒孕妇羊水(7周)以上标本均有梅毒螺旋体存在,此时用暗视野显微镜检查能找到梅毒螺旋体。112011.8.31 病原体检查法 检查方法检查方法n1、皮损取材:在载玻片加一滴生理盐水,用棉拭子蘸取无菌生理盐水抹去皮损(硬下疳、溃疡、梅毒疹、扁平疣)表面污物,挤压皮损周围,用钝刀刮取组织液混入载玻片盐水中,加盖玻片后暗视野镜检。n2、肿大淋
5、巴结取材:酒精消毒淋巴结表面,用1ml无菌注射器配12号针头,吸取无菌生理盐水0.25-0.5ml,无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水,再吸入注射器内,如此反复2-3次,取少量淋巴液于载玻片上,加盖玻片后暗视野镜检。122011.8.31 病原体检查法n3、羊膜穿刺:梅毒孕妇的羊膜穿刺由专职人员操作,将取得的羊水直接滴于载玻片上加盖玻片暗视野镜检。132011.8.31 病原体检查法n 结果 暗视野镜检可观察到特征性的梅毒螺旋体。螺旋整齐,数目固定(814)。白色透明折光性强。特征性运动方式:旋转运动、伸缩移行、弯曲前行。142011.8.31 暗视野显微镜法直接镜检图像(暗视野显微镜法直接镜检图像
6、(1000)152011.8.31 病原体检查法n 临床意义 、暗视野检查可作为梅毒诊断的确证试验,若发现有梅毒螺旋体,即可确诊为梅毒感染。、此法特别适用于血清学试验阴性的早期梅毒诊断,尤其对早期有硬下疳,但梅毒血清反应尚未呈阳性者意义更大。3、暗视野检查是目前快速诊断先天性梅毒可靠的检查方法。162011.8.31 病原体检查法n注意事项 1、取材前,要清洁皮损表面的污物。2、应多取组织液提高阳性率,但要尽量避免出血。3、取材后立即观察,以免影响活力 4、注意梅毒螺旋体的特征及运动方式,以鉴别其它螺旋体。5、口腔中存在其他螺旋体,不推荐用于口腔皮损检查。172011.8.31 病原体检查法
7、6、阴性结果不能排除梅毒,应稍后复查或做 血清学检查。原因可能是:螺旋体数量不足 已用过抗生素或某些外用药 损害接近自然消退182011.8.31 病原体检查法n二.直接免疫荧光试验(DFA)TP-Ag(标本)TPMcAb-FITC37 x30分TPAg-Ab-FITC 洗涤封片荧光镜检莱果绿色梅毒螺旋体192011.8.31 直接免疫荧光法镜检图像(直接免疫荧光法镜检图像(1000)202011.8.31 病原体检查法方法学评价:nDFA法特异性及敏感性均大于暗视野显微镜 检测。n可区分梅毒螺旋体与非致病性螺旋体,可适 用于口、肛周等部位的损害。n可因取材、荧光素、抗体质量及操作技术等 因素
8、而致假阴性。212011.8.31 病原体检查法n三.镀银染色法标本涂片(TP)自然干燥固定、媒染 洗涤银氨液染色封片镜检可见棕褐色梅毒螺旋体222011.8.31 病原体检查法 观察有无染成棕褐色的梅毒螺旋体。n染色阳性,又有典型皮损可确诊。n染色阴性,不能完全排除梅毒。n某些腐生螺旋体可导致假阳性结果。232011.8.31 病原体检查法n常见病原体检查方法比较242011.8.31 梅毒血清学试验 根据抗体的特性和反应性质梅毒血清学试验分为:非梅毒螺旋体血清试验(初筛试验)梅毒螺旋体血清试验(确证试验)252011.8.31 梅毒血清学试验-非梅毒螺旋体血清试验n抗原:心磷脂、卵磷脂、胆
9、固醇混合物。方法有:性病研究实验室试验(VDRL)加热血清反应素试验(USR)不加热血清反应素环状卡片实验(RPR)甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)262011.8.31 梅毒血清学试验-梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验n抗原:梅毒螺旋体 目前常用方法有:1.梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)2.梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)4.梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)5.梅毒螺旋体快速诊断试验(TP-RT)其他方法:梅毒螺旋体19S-IgM抗体测定试验 梅毒螺旋体抗体试验(化学发光法)272011.8.31
10、非梅毒螺旋体血清试验-TRUSTn原理 VDRL-甲苯胺红Ab(血清)红色凝集物(肉眼观察)n 方法282011.8.31 非梅毒螺旋体血清试验-TRUSTn结果 定性试验 阳性:出现由小至大的红色絮状物(14)。阴性:颗粒均匀、细小、不出现凝集。定量试验 以出现阳性反应的最高稀释度作为最终滴度。292011.8.31 TRUST凝集图像302011.8.31 非梅毒螺旋体血清试验-TRUSTn临床意义 1.非特异性反应的初筛试验,可用作疗效观察、判愈、复发或再感染指征。2.初筛试验阳性可表示:现症感染患者 接受治疗近期患者 生物学假阳性者312011.8.31 非梅毒螺旋体血清试验-TRUS
11、Tn注意事项 1.试剂保存,不能以下冰冻。2.实验环境以2329 为宜,用前试剂恢复室 温。3.试剂在效期内使用,怀疑试剂失效,需用试 剂阴、阳对照及已知阴、阳标本对照。4.用旋转式摇床,不能用平衡式振荡仪。5.试验要用纯血清,以防假阴性。6.血清加抗原后要充分混匀分开。322011.8.31 非梅毒螺旋体血清试验-TRUST 7.试验完毕立即观察结果,否则影响结果准确性。8.定性阳性者,确诊治疗前应作定量试验,一是可以了解患者抗体滴度,便于复查作比较,以判断疗效和预后观察;二可以避免“前带现象”。9.初筛试验阳性,应做确证试验以排除生物学假阳性。10.AIDS合并感染梅毒,梅毒血清可阴性,应
12、作暗视野检查螺旋体,同时做HIV检查。332011.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPAn一、TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)n 原理 TP-Ag(明胶颗粒)Ab(血清)洋红 色凝集(肉眼观察)342011.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPAn方法 定性、定量试验352011.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPAn结果 定性试验2+4+:颗粒凝集覆盖整个孔底,边缘粗糙 呈膜状。1+:颗粒凝集呈多边性粗糙大环状。+/-:颗粒浓集于孔底呈小环状:颗粒聚集于孔中央,边缘光滑呈小红点。定量试验 出现阳性反应的最高稀释度作为最终滴度362011.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPA37201
13、1.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPAn临床意义 1.确证试验阳性可诊断梅毒感染,一种是现症感染者,另一种是治愈者。2.由于特异性梅毒螺旋体抗体可终生阳性,因此不能用来作为疗效观察及治愈的判断标准。一般只作定性试验,根据临床需要才做定量试验。382011.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPAn注意事项1.反应板要清洁干净,遐免假阳性。2.要用U形板不能用V形板,遐免假阴性。3.试剂保存,不能以下冰冻。4.反应温度以1830 为宜,用前试剂恢复至室温。5.试剂要在有效期内使用,不同批号不要混用。6.血清要分纯,不能混有血液有形成分。392011.8.31 梅毒螺旋体血清试验-TPPA 7.
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