免疫化学诊断技术的分类与局限课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《免疫化学诊断技术的分类与局限课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 免疫化学 诊断 技术 分类 局限 课件
- 资源描述:
-
1、资料仅供参考,不当之处,请联系改正。利用测定(量)与疾病有关的化学分子。免疫化学免疫化学診斷技术診斷技术资料仅供参考,不当之处,请联系改正。酶联化学发光酶联化学发光偏振荧光偏振荧光时间分辨荧光时间分辨荧光电化学发光电化学发光直接化学发光直接化学发光资料仅供参考,不当之处,请联系改正。免疫免疫同位素标记同位素标记測定測定法法放射免疫法已有放射免疫法已有3030多年历史。比较其它多年历史。比较其它传统的方法,它有特异性好,灵敏度传统的方法,它有特异性好,灵敏度高,准确性好,可靠性强等特点,故高,准确性好,可靠性强等特点,故在临床科研上广泛使用。在临床科研上广泛使用。资料仅供参考,不当之处,请联系改
2、正。免疫同位素標記法之局限免疫同位素標記法之局限 资料仅供参考,不当之处,请联系改正。免疫免疫化学发光法化学发光法资料仅供参考,不当之处,请联系改正。免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介u原理:原理:抗体包被的塑料固相抗体包被的塑料固相 加入待测样本加入待测样本-抗原抗原 加入碱性磷酸酶标记的抗体加入碱性磷酸酶标记的抗体 洗洗 加入底物加入底物-4-4-Mup,Mup,发光发光u产品:产品:雅培雅培Axsym,Axsym,梅里埃梅里埃Vidas,Vidas,强生强生Vitros,Vitros,DPC Immulite 2000,DPC Immulite 2000,罗氏罗氏ESES300300资
3、料仅供参考,不当之处,请联系改正。u原理:原理:標記在小分子抗原上的熒光素經標記在小分子抗原上的熒光素經485485nmnm的激發偏振光照射的激發偏振光照射後,發出光子,經過偏振儀形成後,發出光子,經過偏振儀形成525550525550nmnm的偏振光;的偏振光;這一偏振光的強度與熒光素受激發時分子轉動的速度呈這一偏振光的強度與熒光素受激發時分子轉動的速度呈反反比比,游離的熒光素標記抗原,分子小,轉動速度,游離的熒光素標記抗原,分子小,轉動速度快快,激發,激發後發射的光子散向四面八方,因此偏振光信號弱;後發射的光子散向四面八方,因此偏振光信號弱;在測定過程中待測抗原小分子,熒光標記抗原小分子和
4、特在測定過程中待測抗原小分子,熒光標記抗原小分子和特導性沆體大分子同時加入到一反應杯中,待測抗原越少,導性沆體大分子同時加入到一反應杯中,待測抗原越少,與抗體競爭結合的量越少,而熒光標記抗原與抗體結合就與抗體競爭結合的量越少,而熒光標記抗原與抗體結合就越多,而熒光標記的小分子抗原與大分子抗體結合後,其越多,而熒光標記的小分子抗原與大分子抗體結合後,其分子的轉動速度減分子的轉動速度減慢慢,由此熒光偏振信號,由此熒光偏振信號強強。u产品:雅培产品:雅培AxsymAxsym免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介资料仅供参考,不当之处,请联系改正。u原理:原理:标记物为三價稀土離子如标记物为三價稀土離子
5、如:銪銪(EuEu3+3+)、釤釤(SmSm3+3+)、鏑鏑(Dy3+)Dy3+)和鋱和鋱(Tb3+)Tb3+)等,它們可利用具有雙功能基團結構等,它們可利用具有雙功能基團結構的螫合劑,在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結合,形的螫合劑,在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結合,形成稀土離子成稀土離子螫合劑螫合劑抗原結合物。抗原結合物。當當與與共同與抗體競爭結合共同與抗體競爭結合,形成抗原抗體免疫復合物,其中含有標記稀土離子,形成抗原抗體免疫復合物,其中含有標記稀土離子,然後利用時間分辨熒光分析儀,可測出復合物中稀土離然後利用時間分辨熒光分析儀,可測出復合物中稀土離子發射熒光的強度,以此確定待測抗原的含
6、量子發射熒光的強度,以此確定待測抗原的含量。u产品:产品:EG&GEG&G的的DELFIADELFIA免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介资料仅供参考,不当之处,请联系改正。u原理:原理:先將特异性抗體包被在磁性微珠。另外將發光劑先將特异性抗體包被在磁性微珠。另外將發光劑 Ru Ru(bpy)(bpy)3 3 2+2+標記在特异性抗體上。標記在特异性抗體上。將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發光劑標記的抗體將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發光劑標記的抗體共同溫育,形成磁性微珠包被抗體共同溫育,形成磁性微珠包被抗體抗原抗原發光劑標記發光劑標記杭體復合物。杭體復合物。加入加入TPATPA緩沖液和緩沖
7、液和TPATPA在電極表面進行電子轉移,產生電在電極表面進行電子轉移,產生電化學發光。化學發光。u产品:产品:罗氏罗氏ElecsysElecsys免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介资料仅供参考,不当之处,请联系改正。免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介u原理:原理:利用化學發光技術和磁性微粒子分離技術相結合的利用化學發光技術和磁性微粒子分離技術相結合的測定方法。以丫啶酯為發光的標記物,固相載體為極細小測定方法。以丫啶酯為發光的標記物,固相載體為極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯免中的雙抗體夾的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯免中的雙抗體夾心法和競爭結合法相似。心法和競爭結合法相似。
8、單克隆抗體或抗原包被磁性微粒單克隆抗體或抗原包被磁性微粒抗原抗體結合,洗滌分離抗原抗體結合,洗滌分離加入氧化劑發光:經過加入氧化劑(加入氧化劑發光:經過加入氧化劑(H H2 2O O2 2)和和 pH pH 糾正糾正液(液(NaOHNaOH)使成鹼性,這時丫啶酯在不需要催化劑的情使成鹼性,這時丫啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發光,集光器和光電倍增管接收。記錄況下分解、發光,集光器和光電倍增管接收。記錄5 5秒秒鐘內所產生的光子能。鐘內所產生的光子能。u产品:产品:拜耳拜耳ACS:180SE,Advia Centaur,Advia IMSACS:180SE,Advia Centaur,Advi
9、a IMS资料仅供参考,不当之处,请联系改正。免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介资料仅供参考,不当之处,请联系改正。直接化學發光的机理直接化學發光的机理 -ACRIDINE ESTERACRIDINE ESTER丫啶酯丫啶酯u最 簡 易 u最 快 速 非常稳定;非常稳定;与抗体或抗原结合不与抗体或抗原结合不影响发光;影响发光;N+CH3BrCOOCH3CH3R资料仅供参考,不当之处,请联系改正。丫啶酯丫啶酯 -ACRIDINE ESTERACRIDINE ESTER不需催化劑不需催化劑 穩定性高穩定性高 產光強產光強 線性好線性好 本底低本底低 反應快反應快 結合后不影響發光結合后不影響發光
10、 靈敏度高靈敏度高-可達可達1010-15-15 摩爾摩爾直接化學發光的机理直接化學發光的机理资料仅供参考,不当之处,请联系改正。丫丫丫丫 啶啶啶啶 酯酯酯酯 一一一一 直直直直 接接接接 閃閃閃閃 光光光光 ,強強強強 度度度度 是是是是 碘碘碘碘125 125 125 125 在在在在 一一一一 分分分分 鐘鐘鐘鐘 發發發發 出出出出 光光光光 子子子子 的的的的 十十十十 万万万万 倍倍倍倍0 06.06.05.05.02.02.01.01.00 0200,000200,000400,000400,000600,000600,000800,000800,0001,000,0001,000
11、,0003.03.04.04.0秒秒100100200200300300400400500500600600直直 接接 閃閃 光光 慢慢 發發 光光 光光 強強 度度直直 接接 閃閃 光光 慢慢 發發 光光 资料仅供参考,不当之处,请联系改正。直接化學發光的机理直接化學發光的机理Tracer Concentration(moles/L)sensitivity limitof fluorescencesensitivity limit ofchemiluminescenceFluorescenceFluorescenceBackground Noise LevelBackground Noise
12、 LevelChemiluminescenceChemiluminescenceBackground LevelBackground Level 10109 98 87 76 65 54 43 32 21 10 01010-15.51010-171010-161010-151010-141010-131010-121010-101010-91010-81010-11RelativeRelative LightLight IntensityIntensitytracer signal资料仅供参考,不当之处,请联系改正。直接化學發光的机理直接化學發光的机理直直直直 接接接接 化化化化 學學學學 發
13、發發發 光光光光 不不不不 受受受受 pHpH 和和和和 溫溫溫溫 度度度度 影影影影 響響響響n n減輕漂移減輕漂移n n提高重复性提高重复性资料仅供参考,不当之处,请联系改正。丫啶丫啶 酯直接發光酯直接發光CL(AE)CL(AE)電電 化化 學學 發發 光光 ECL(TU+TPA)ECL(TU+TPA)信 號 的 產 生丫啶 酯 与 H2 O 2 的 簡 單反 應需 三 個 電 板 去 激 發 由 几 個分 子 態 參 加 的 复 雜 反 應速 度不 到 2 秒5 秒,但 洗 電 极 需 40 60 秒靈 敏 度10-15 M,足 以 滿 足 免疫 試 驗 的 要 求10-11-10-17
14、 M本 底极 低較 高,過 剩 的 TPA會 發 光特 异 性不 受 溫 度 与 pH 的影響受 pH,金 屬 及 螯 合 物 影 響直接化學發光与电化學發光比较直接化學發光与电化學發光比较信信 號號 的的 產產 生生丫啶丫啶 酯酯 与与 H H2 2O O2 2 的的 簡簡 單單反反 應應需需 三三 個個 電電 板板 去去 激激 發發 由由 几几 個個分分 子子 態態 參參 加加 的的 复复 雜雜 反反 應應速速 度度不不 到到 2 2 秒秒5 5 秒,秒,但但 洗洗 電電 极极 需需 40-60 40-60秒秒靈靈 敏敏 度度10-10-1515 M M,足,足 以以 滿滿 足足免疫免疫
15、試試 驗驗 的的 要要 求求1010-11-11 -10-10-1717 M M本本 底底极极 低低較較 高,過高,過 剩剩 的的 TPATPA 會會 發發 光光特特 异异 性性不不 受受 溫溫 度度 与与 pH pH 的的影響影響受受 pH,pH,金金 屬屬 及及 螯螯 合合 物物 影影 響響资料仅供参考,不当之处,请联系改正。微顆粒微顆粒粗顆粒粗顆粒 Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Yu功能功能抗原抗体反應相抗原抗
16、体反應相結合与未結合的分离結合与未結合的分离u特點特點縮縮 短短 擴擴 散散 距距 离离 提提 高高 捕捕 獲獲 效效 率率 表表 面面 面面 積積 為為 包包 覆覆 的的 試試 管管 和和 玻玻 璃璃 珠珠 之之 50 50倍倍 有有 利利 于于 結結 合合 動動 力力 學學提提 供供 更更 高高 之之 靈靈 敏敏 度度 微磁顆粒技術微磁顆粒技術资料仅供参考,不当之处,请联系改正。扁平的設計結合相磁場狄窄空間以利快速抽吸吸液探針u以以 便便 最最 怏怏 速速,最最 干干 凈凈 地地 分离分离 結結 合合 物物 与与 未未 結結 合合 物物 u以以 便便 獲獲 得得 高高 靈靈 敏敏 度度 及
17、及 高高 重重 复复 性性試試 杯杯 的的 最最 佳佳 設設 計計 -配配 合合 微微 磁磁 粒粒 体体 技技 術術 资料仅供参考,不当之处,请联系改正。降降 低低 人人 抗抗 鼠鼠 抗抗 体体(HAMA)HAMA)的的 干干 扰扰為為 大大 分分 子子 的的 測測 定定 提提 供供 了了 高高 靈靈 敏敏 度度 和和 高高 特特 异异 性性反应过程的结构设计反应过程的结构设计 -资料仅供参考,不当之处,请联系改正。是是 一一 种种 确确 保保 高高 靈靈 敏敏 度度 同同 時時 又又 廣廣 譜譜 的的 設設 計計反应过程的结构设计反应过程的结构设计-磁颗粒磁颗粒资料仅供参考,不当之处,请联系
展开阅读全文