《生物技术实践》《微生物的分离和培养》复习课件-新版.ppt

1、3固体培养基的配制过程为：计算称量溶化灭菌倒平板。4平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用方法。1培养基中含有水、无机盐、氮源和生长因子等营养物质。2实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、热灭菌和高压蒸汽灭菌等。1培养基(1)概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出的供其 的营养物质。营养物质生长繁殖液体培养基固体培养基菌落（2）种类（加入琼脂等凝固剂）：微生物在上面可形成 。(3)营养成分：水、无机盐、，此外还要满足微生物生长对 、特殊营养物质及 的要求。2无菌技术(1)目的：防止 污染。(2)方法消毒和灭菌。碳源氮源pH氧气外来杂菌消毒灭菌概念使用较为 的物理或化学方法杀死物体 或 的部

2、分微生物(不包括 )使用 理化因素杀死物体内外 微生物(包括 和 )常用方法 消毒法、消毒法、消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等温和表面内部芽孢和孢子煮沸巴氏化学药剂强烈所有芽孢孢子1下面是察氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题：蔗糖NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4琼脂水定容至1 000 mL20 g3 g1 g1 g0.5 g0.01 g20 g(1)该培养基根据物理性质划分应是什么培养基？为什么？(2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别

3、是什么？(3)蔗糖提供的是哪类营养物质？NaNO3提供的是哪类营养物质？(4)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条件？提示：(1)固体培养基。因为该培养基加入了凝固剂琼脂。(2)4种成分。分别是碳源、氮源、无机盐和水。(3)蔗糖提供的是碳源。NaNO3提供的是氮源和无机盐。(4)满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需要。1培养基的成分营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合

4、成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等营养物质定义作用主要来源生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物2.培养基的种类(1)按物理性质分：名称特征功能固体培养基外观呈固体状态的培养基主要用于微生物的分离、鉴定液体培养基呈液体状态的培养基主要用于工业生产(2)按培养基功能分：选择培养基：允许特

5、定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，如无氮培养基可选择培养固氮微生物。鉴别培养基：微生物或其代谢产物与培养基某些物质发生特定的颜色反应，以鉴别不同微生物。例一：下列描述正确的是()A同一种物质不可能既作碳源又作氮源B除水以外的无机物仅提供无机盐C凡是碳源都能提供能量D有些无机氮源也能提供能量解析：对异养型微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。除水以外的无机物种类繁多，但也是某些微生物的碳源和氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合

6、成作用的能源。答案：D1制备固体培养基计算：依据牛肉膏蛋白胨培养基 比例，计算各成分的用量 ：牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取的动作要迅速，称后及时盖上瓶盖配方称量 ：牛肉膏和称量纸水取出称量纸加蛋 白胨和氯化钠加琼脂(注意：不断用玻璃棒 搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂)补加蒸 馏水至100 mL灭菌 ：培养基冷却至50 左右时，在 附近倒平板溶化干热灭菌倒平板酒精灯火焰1培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。2在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线前、每次划线前及划线操作结

7、束后，都要灼烧接种环，请分析其目的分别是什么。提示：第一次灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的微生物，使每次划线的微生物来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者1微生物培养中有关实验操作的注意事项(1)(1)倒平板操作：倒平板操作：培养基灭菌后，需冷却至50左右时才能倒平板，原因是琼脂在44以下凝固。培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙。整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行。平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成污染。若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。(2)(2

8、)平板划线操作：平板划线操作：第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。2稀释涂布平板操作(1)(1)稀释操作时：稀释操作时：每支试管及其中9mL水、移液管需灭菌；操作时试管口和移液管应在离火焰12cm处。(2)(2)涂布平板时：涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别注意：酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管要在酒精灯火焰周围使用。例二：有关平板划线操作正确的是()A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划35条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养解析：无菌操作显得很困难，但在酒精灯火焰附近约10cm的四周为无菌区，因而菌种试管和待接种试管管口不能离开火焰附近，接种环、棉塞也不能离开火焰附近。接种完毕之后为了防止菌体污染，要在火焰上灼烧管口和接种环。为防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。答案：D退出