经口急性毒性实验培训课件.ppt

1、经口急性毒性实验急性毒性试验实验动物的选择（物种和品系，年龄和体重，性别，分组，预检，禁食）(who?)受试物（what?)染毒方法(how?)剂量选择（how?)毒性作用观察(ending)2经口急性毒性实验 一一、实验目的、实验目的 1.学习急性毒性试验的实验设计原则 2.掌握灌胃技术，随机分组方法 3.掌握LD50的计算方法 4.观察和描述受试物的中毒特征 5.掌握急性毒性分级标准3经口急性毒性实验急性毒性作用：指机体一次接触或24小时内多次接触化学物后在短期（最长到14天）内所发生的毒性效应，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。4经口急性毒性实验 LD50：半数致死剂量

2、指引起一组受试实验动物半数死亡的剂量。常用以表示急性毒性的大小。其值越小，表示外源化学物的毒性越强；反之，毒性越低。LD50是经过统计学计算得到的毒性参数，是一个统计量，受实验动物个体易感性差异的影响较小，因此是最重要的急性毒性参数。5经口急性毒性实验二二、实验原理、实验原理 选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量（LD50），并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。本次实验采用改进寇氏法。改进寇氏法

3、：利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计的方法。要求如下：每个染毒剂量组动物数相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率80%。6经口急性毒性实验三、材料和试剂三、材料和试剂1.实验动物：健康成年小鼠，昆明种，普通级，雌雄各60只2.器材：灌胃针，注射器，吸管，容量瓶，滴管，动物体重秤等3.试剂：受试物为1.3g/ml敌敌畏油溶液（湖北荆州），植物油，苦味酸（染色标记）。7经口急性毒性实验四、操作步骤四、操作步骤1.实验动物选择：昆明种小鼠，雌雄各60（上午）2.实验动物的随机分组和标记（上午）3.剂量设计及受试物配制（上午）4.经口染毒（下午）5.中毒体征和动物死亡情况观

4、察记录（下午）6.LD50的计算（次日下午）7.结果评价、完成实习报告（次日下午）8经口急性毒性实验 剂量设计剂量设计预实验得出LD100、LD0，各设置五个剂量组，n=5 i=(lg LD100-lg LD0)/(n-1)，k=10i雌性：LD100=240mg/kgLD0=90mg/kg雄性：LD100=250mg/kgLD0=100mg/kg10经口急性毒性实验 改进寇氏法1、剂量设置：雌雄，等比数级，灌胃容量：0.1ml/10g 雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28 雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26 雌性5个剂量组

5、各组浓度 雄性5个剂量组 各组浓度 240mg/Kg 24mg/ml 250mg/kg 25mg/ml 187.5mg/Kg 18.8mg/ml 198.4mg/kg 19.8mg/ml 146.5mg/Kg 14.7mg/ml 157.4mg/kg 15.7mg/ml 114.4mg/Kg 11.4mg/ml 125.0mg/kg 12.55mg/ml 90mg/Kg 9mg/ml 100mg/kg 10mg/ml各组浓度各组剂量/灌胃容量例 雌性最高剂量组浓度最高剂量/灌胃容量 240mg/kg/0.1ml/10g24mg/ml2、每组实际需要量V最终体积损耗量 动物数平均体重灌胃容量损耗

6、量 1025g0.1ml/10g+2.5ml 5ml3、雌性最高剂量组溶液(即母液)：雄性最高剂量组溶液（母液）：24mg/ml配置22.9ml 25mg/ml配制24.2ml 雌AV*K/(K-1)雄A=V*K/(K-1)5*1.28/(1.281)=5*1.26/(1.26-1)22.9ml =24.2ml4、下一组溶液的配置：等比稀释法 A*（1/K）雌性=A（1/k）=22.9(1/1.28)=17.9ml 雄性=A（1/k）=24.2(1/1.26)=19.2ml从最高剂量组溶液A ml中取出5ml,作为高剂量组。剩余(A-5)ml,加油5ml，混匀后，再从中取出5ml作为下一个剂量

7、组，依次类推，完成时，最低剂量组体积为A，其余各组体积均为5ml.11经口急性毒性实验经口染毒经口染毒1.称重并标记:(每组10只）头，背，尾，右前，右中，右后，左后，左中，左前，全白2.灌胃：0.1ml/10g3.中毒体征和动物死亡情况观察（中毒表现参照教材毒理学基础P123）12经口急性毒性实验 中毒体征和动物死亡情况观察中毒体征和动物死亡情况观察1、中毒过程：潜伏期、中毒期、恢复期或死亡时间（只需记录中毒出现的时间死亡时间）2、中毒症状：参照毒理学基础P123，表6-13、死亡的判断：呼吸、心跳停止，瞳孔扩散4、尸体的解剖：目的判断发生毒作用的靶器官，排除动物的意外死亡13经口急性毒性实

8、验14经口急性毒性实验 急性毒性实验原始记录（急性毒性实验原始记录（14天）天）受试物名称：敌敌畏 受试物性状：乳油 受试物来源：毒理实验室 动物种属品系：小鼠，昆明种 动物来源：同济医学院实验动物中心 染毒途径：经口灌胃 室温：日期：剂量组别 动物 性别 体重 染毒量 染毒 体征及 死亡 （mg/kg）编号 （g）(ml)时间 出现时间 时间实验操作者：实验记录者：15经口急性毒性实验 LD50的计算小鼠经口染毒死亡情况（小鼠经口染毒死亡情况（14天）天）16经口急性毒性实验 结果的计算与分析结果的计算与分析 计算公式：m=lgLD50Xki（p0.5）Sm=式中 Xk：最大剂量的对数值 q

9、：存活率 p：各剂量组死亡率总和 n：各组动物数 Sm：标准差 i:相邻两剂量组之对数剂量差值 lgLD50及95%可信区间=m1.96*Sm 反对数求出LD50及95%可信区间 LD50：注明动物种属，品系，性别，途径，受试物纯度：注明动物种属，品系，性别，途径，受试物纯度npqi17经口急性毒性实验18经口急性毒性实验级别级别剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒低毒低毒微毒微毒大鼠经口大鼠经口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)5 555505050050050005000我国农药的急性经口毒性分级http:/ 标准化化学物毒作用强度，评价其对机体毒性的大小，比较不同化学物毒性大小；为其他

10、毒理实验设计提供参考；比较不同途径的LD50值，获得生物利用度的信息；推测人类的致死剂量以及中毒后体征，为临床中毒治疗提供参考。20经口急性毒性实验实习报告要求 一、目的意义 二、实验原理 三、实验材料（实验动物，受试物）及仪器 四、实验步骤(随机分组，试剂配制）五、实验结果（包括两个表、计算结果）六、结果评价21经口急性毒性实验 1、说明受试物的基本情况（名称、纯度、状态等）和配制方法；2、实验动物的种属、级别。实验前动物禁食情况和健康状况；3、染毒剂量（两人小组）和动物分组，体重范围；4、染毒时间，染毒持续时间，染毒后动物中毒的主要表现、死亡情况及发生时间；5、按剂量组列表说明每组动物数、性别、出现毒效应的动物数、死亡动物数；(雌雄大组）6、确定LD50的方法；7、LD50及其95%可信限的计算和结果；8、受试物的毒性分级依据、毒性级别。9、各组死亡数没有剂量效应关系的原因分析22经口急性毒性实验平均体重雄：A B 21.05g C 20.5g D 21.1g E 22.25g F 21.45g雌：A B C D E F23经口急性毒性实验