细胞工程第四章细胞培养课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《细胞工程第四章细胞培养课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 细胞 工程 第四 细胞培养 课件
- 资源描述:
-
1、细胞工程细胞工程-第四章细胞培第四章细胞培养养10112022-10-22细胞工程第四章细胞培养1011本章主要内容:本章主要内容:培养细胞的生物学特性常用培养液的组成和配制细胞培养的基本方法细胞系和细胞株的建立细胞冻存复苏等细胞培养的技术第四章 细胞培养细胞工程第四章细胞培养10114.1 培养细胞的生物学特征细胞工程第四章细胞培养10114.1.1 4.1.1 体外培养细胞的分型体外培养细胞的分型 1.1.贴附型:贴附型:大多数培养细胞贴附生长,属于贴壁依赖性细胞,判断细胞形态时不能按照体内组织学标推判定,仅大致分成以下四型:上皮细胞型上皮细胞型成纤维细胞型成纤维细胞型游走细胞型游走细胞型
2、多形型细胞多形型细胞2.2.悬浮型:悬浮型:见于少数特殊的细胞,如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形,不贴于支持物上,呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。细胞工程第四章细胞培养1011 细胞呈扁平不规则多角形,中央有圆形核,细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动,处于膜边缘的细胞总与膜相连,很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。上皮细胞型:上皮细胞型:乳腺癌细胞细胞工程第四章细胞培养1011 胞体呈梭型或不规则三角形,中央有卵圆形核,胞质突起,生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外,凡由中胚层间充质起源的组织,如心肌、平滑肌、
3、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外,凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。成纤维细胞型:成纤维细胞型:细胞工程第四章细胞培养1011游走细胞型:游走细胞型:呈散在生长,一般不连成片,胞质常突起,呈散在生长,一般不连成片,胞质常突起,呈活跃游走或变形运动,方向不规则。此型细胞呈活跃游走或变形运动,方向不规则。此型细胞不稳定,有时难以和其他细胞相区别。不稳定,有时难以和其他细胞相区别。单核细胞、单核细胞、巨噬细胞等。巨噬细胞等。细胞工程第四章细胞培养1011多型细胞型:多型细胞型:有一些细胞,如神经细胞难以确定其规律和有一些细胞,如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态,可统归于此
4、类。神经元神经胶质细稳定的形态,可统归于此类。神经元神经胶质细胞。胞。细胞工程第四章细胞培养1011细胞工程第四章细胞培养1011 见于少数特殊的细胞,如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形,不贴于支持物上,呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。2.2.悬浮型悬浮型概念:概念:培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源:来源:自血,脾或骨髓,尤以血中白细胞癌肿细胞也可能自血,脾或骨髓,尤以血中白细胞癌肿细胞也可能特点:特点:在悬浮中生长良好细胞圆形,单个或小细胞团在悬浮中生长良好细胞圆形,单个或小细胞
5、团优点:优点:生存空间大,提供数量大,传代方便生存空间大,提供数量大,传代方便(不需消化不需消化),易于收获,可获得稳定状态易于收获,可获得稳定状态缺点:缺点:观察不方便,很多细胞不能悬浮生长观察不方便,很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞尤以正常细胞)细胞工程第四章细胞培养10114.1.2 4.1.2 培养细胞的生长特点培养细胞的生长特点 1.1.贴附贴附贴附并伸展是贴壁细胞体外培养时的贴附并伸展是贴壁细胞体外培养时的基本生长特点。基本生长特点。细胞工程第四章细胞培养1011 体外培养的小鼠子宫上皮细胞体外培养的小鼠子宫上皮细胞(a)消化分离得到的细胞团块;消化分离得到的细胞团块;(b)生长
6、至第生长至第3天的细胞单层;天的细胞单层;(c)生长至第生长至第4天的细天的细胞单层;胞单层;(d)生长至第生长至第6天的细胞单层天的细胞单层细胞工程第四章细胞培养10114.1.2 4.1.2 培养细胞的生长特点培养细胞的生长特点 2.2.接触抑制接触抑制 接触抑制是体外培养中某些贴附型细胞生长特性之一。一接触抑制是体外培养中某些贴附型细胞生长特性之一。一般情况下,正常细胞不停顿的活动或移动,其外周的细胞膜呈般情况下,正常细胞不停顿的活动或移动,其外周的细胞膜呈现一些特征性皱褶样活动。但是,现一些特征性皱褶样活动。但是,当两个细胞由于移动而相互当两个细胞由于移动而相互靠近发生接触时,细胞不再
7、移动,在接触区域的细胞膜皱褶样靠近发生接触时,细胞不再移动,在接触区域的细胞膜皱褶样活动停止,从而使细胞停止运动。这种由细胞接触而抑制细胞活动停止,从而使细胞停止运动。这种由细胞接触而抑制细胞运动的现象称为接触抑制。运动的现象称为接触抑制。细胞工程第四章细胞培养10114.1.2 4.1.2 培养细胞的生长特点培养细胞的生长特点 2.2.接触抑制接触抑制 由于细胞之间有接触抑制生长特性,一般正常生长细胞并由于细胞之间有接触抑制生长特性,一般正常生长细胞并不互相重叠于其上而生长,而是呈单层生长。但是肿瘤细胞由不互相重叠于其上而生长,而是呈单层生长。但是肿瘤细胞由于无接触抑制而能够继续移动和增殖,
8、导致细胞向三维空间扩于无接触抑制而能够继续移动和增殖,导致细胞向三维空间扩展,使细胞发生堆积。展,使细胞发生堆积。因此,(因此,(接触抑制)接触抑制)可作为区分正常细可作为区分正常细胞与癌细胞的标志之一。胞与癌细胞的标志之一。细胞工程第四章细胞培养10114.1.2 4.1.2 培养细胞的生长特点培养细胞的生长特点 3.3.密度抑制密度抑制 细胞接触汇合后,虽发生接触抑制,但只要营养充分,细细胞接触汇合后,虽发生接触抑制,但只要营养充分,细胞仍然能够进行增殖分裂,数量仍然增多。但当细胞密度进一胞仍然能够进行增殖分裂,数量仍然增多。但当细胞密度进一步增大,培养液中营养成分减少,代谢产物增多时,细
9、胞因营步增大,培养液中营养成分减少,代谢产物增多时,细胞因营养的枯竭和代谢物的影响,则发生密度抑制,导致细胞分裂停养的枯竭和代谢物的影响,则发生密度抑制,导致细胞分裂停止。止。细胞工程第四章细胞培养10114.1.3 4.1.3 培养细胞的生长和增殖过程培养细胞的生长和增殖过程 细胞系的生长过程细胞系的生长过程分为:原代培养期、传代期和衰退期。分为:原代培养期、传代期和衰退期。细胞工程第四章细胞培养1011n 细胞系的生长过程细胞系的生长过程原代培养期原代培养期传代期传代期衰退期衰退期为新鲜组织自体内取出并在体为新鲜组织自体内取出并在体外培养生长至第一次传代的时期。外培养生长至第一次传代的时期
10、。原代培养的细胞生长一定时间之后,原代培养的细胞生长一定时间之后,如贴附型细胞即融合成片而逐渐铺如贴附型细胞即融合成片而逐渐铺满底物的表面,此时,便应将原代满底物的表面,此时,便应将原代细胞分开接种至细胞分开接种至2 2个或更多的新的培个或更多的新的培养器皿中,即传代,此即成细胞系。养器皿中,即传代,此即成细胞系。一般有限细胞系在此期的细胞开一般有限细胞系在此期的细胞开始时虽仍然存活,但增殖已很缓慢始时虽仍然存活,但增殖已很缓慢并逐渐完全停止,进而细胞发生衰并逐渐完全停止,进而细胞发生衰退死亡。退死亡。细胞工程第四章细胞培养1011每代细胞的生长过程每代细胞的生长过程 所谓细胞所谓细胞“一代一
11、代”一词,仅指一词,仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间,这已成为培养从细胞接种到分离再培养时的一段时间,这已成为培养工作中的一种习惯说法,它与细胞倍增一代非同一含义。工作中的一种习惯说法,它与细胞倍增一代非同一含义。如某一细胞系为第如某一细胞系为第153153代细胞,即指该细胞系已传代代细胞,即指该细胞系已传代153153次。它与细胞世代(次。它与细胞世代(GenerationGeneration)或倍增)或倍增(Doubling(Doubling)不同;在细胞一代中,细胞能倍增)不同;在细胞一代中,细胞能倍增3 36 6次。次。细胞工程第四章细胞培养10113.3.组织培养细胞一代生存期
12、组织培养细胞一代生存期细胞传一代后,一般要经过以下三个阶段:细胞传一代后,一般要经过以下三个阶段:潜伏期(潜伏期(Latent PhaseLatent Phase);指数生长期(指数生长期(Logarithmic growth PhaseLogarithmic growth Phase);停止期停止期/平台期(平台期(Stagnate PhaseStagnate Phase).细胞工程第四章细胞培养1011理想的实验用细胞理想的实验用细胞细胞工程第四章细胞培养10114.1.5 4.1.5 体内外细胞的差异和分化体内外细胞的差异和分化细胞工程第四章细胞培养1011(1)(1)主要表现主要表现
13、失去原有组织结构和细胞形态失去原有组织结构和细胞形态 可能出现脱分化或去分化可能出现脱分化或去分化 细胞趋向单一化;细胞趋向单一化;4.1.5 4.1.5 体内外细胞的差异和分化体内外细胞的差异和分化细胞工程第四章细胞培养1011(2 2)与体内主要不同点与体内主要不同点 相对相对孤立孤立、相对单一、相对单一 缺乏体内的缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的和细胞相互间的影响影响(3)(3)提示提示 要正确认识体外培养细胞要正确认识体外培养细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体。是一种特定条件下生长的细胞群体。细胞工程第四章细胞培养10114.2 细 胞
14、 培 养 液细胞工程第四章细胞培养10114.2.1 细 胞 的 常 用 液 体细胞工程第四章细胞培养10111.1.水:水:新鲜配置的三蒸水或超纯水新鲜配置的三蒸水或超纯水 2.2.平衡盐溶液平衡盐溶液(balanced salt solution(balanced salt solution,BSS)BSS)又称生又称生理盐水或盐溶液,是细胞培养中常用的基本液体。它主理盐水或盐溶液,是细胞培养中常用的基本液体。它主要由无机盐和葡萄糖配制而成,起着维持渗透压、缓冲要由无机盐和葡萄糖配制而成,起着维持渗透压、缓冲和调节酸碱度等重要作用。和调节酸碱度等重要作用。常用的缓冲液:常用的缓冲液:生理盐
15、水、生理盐水、PBSPBS、PBS(PBS(注意有无钙镁离注意有无钙镁离子子)、Hanks Hanks液(含有钙镁离子、葡萄糖、酚红)液(含有钙镁离子、葡萄糖、酚红)配液时注意:配液时注意:(1 1)用水;配制先后顺序;称量,要看)用水;配制先后顺序;称量,要看清药品的规格、纯度、结晶水的数量等。(清药品的规格、纯度、结晶水的数量等。(2 2)物质的)物质的纯度,常用的纯度有优级纯纯度,常用的纯度有优级纯(特级纯特级纯),分析纯(,分析纯(ARAR)和)和化学纯(化学纯(CDCD)三种。()三种。(3 3)物质的可溶性,避免沉淀析)物质的可溶性,避免沉淀析出。(出。(4 4)物质的稳定性,如葡
16、萄糖只能在)物质的稳定性,如葡萄糖只能在1010磅下维持磅下维持15152020分钟。(分钟。(5 5)贮存液)贮存液 通常先配制成通常先配制成1010倍或倍或100100倍倍的一系列母液,用前临时混合和稀释,过滤除菌备用。的一系列母液,用前临时混合和稀释,过滤除菌备用。细胞工程第四章细胞培养10113 3胶原酶胶原酶0.25%细胞工程第四章细胞培养10114.pH调节液(1)碳酸氢钠液碳酸氢钠液 可根据需要与使用方便配制10%以下的各种浓度。先用双蒸水溶解后,需经过滤除菌,分装小瓶中。亦可使用高压蒸气灭菌,密封,4冰箱保存。市售有5%10%浓度的安瓿封装品,使用也很方便。在调节pH过程中或超
17、过要求值时,可用高压灭菌的10%醋酸溶液或以CO2调节之。(2)Hepes缓冲液缓冲液 是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的氢离子缓冲剂。通常使用浓度为1015mmol/L。配制时,称取所需的Hepes量,用培养液溶解,用1mmol/LNaOH调节pH至7.0,过滤除菌分装小瓶中,4冰箱保存。细胞工程第四章细胞培养10115 5 抗生素溶液抗生素溶液(PS)(PS)为防止细胞培养过程中发生污染,一般在培养液中加入青霉素钠盐和硫酸链霉素,其浓度分别为每毫升含100U和100g。配制时取青霉素1106和链霉素1106g,溶于100ml Hanks或PBS中,使其含量为青霉素1104U/
18、ml,链霉素1104g/ml,使用时每100ml培养液中加入0.5-1ml。细胞工程第四章细胞培养10116.6.细胞工程第四章细胞培养10117.细胞工程第四章细胞培养10114.2.2 细 胞 培 养 基细胞工程第四章细胞培养1011营营 养养 需需 要要基本营养物质:基本营养物质:包括氨基酸、维生素、碳 水化合物及一些无机离子。促生长因子:促生长因子:体外培养细胞既需要上述基本营养 物质,还需要促细胞生长因子等物 质才能正常生长、繁殖。血清中含 有多种这类物质,有利于多数细胞的存活和生长。RPMI-1640培养液培养液1020%FBS细胞工程第四章细胞培养10114.2.1细胞培养基细胞
展开阅读全文