霍乱等感染性腹泻实验室检测技术课件.ppt
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1、霍乱等感染性腹泻霍乱等感染性腹泻实验室检测技术实验室检测技术霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-221 感染性腹泻的病原体种类很多,其中肠杆菌科感染性腹泻的病原体种类很多,其中肠杆菌科常见致泻菌有致泻性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌,常见致泻菌有致泻性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌,病原性大肠埃希氏菌:肠出血性大肠杆菌(病原性大肠埃希氏菌:肠出血性大肠杆菌(EHECEHEC)、)、肠毒素性大肠杆菌(肠毒素性大肠杆菌(ETECETEC)、)、侵袭性大肠杆菌侵袭性大肠杆菌(EIECEIEC)、)、致病性大肠杆菌(致病性大肠杆菌(EPECEPEC)、)、肠集聚性粘肠集聚性粘附大肠杆菌附大肠杆菌(EAg
2、gEC)EAggEC),肠产志贺样毒素且具有侵袭肠产志贺样毒素且具有侵袭力的大肠杆菌(力的大肠杆菌(ESIECESIEC)和结肠类耶尔森氏菌。和结肠类耶尔森氏菌。下面对以上几种常见感染性腹泻的实验室检测下面对以上几种常见感染性腹泻的实验室检测技术进行简要介绍。技术进行简要介绍。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-222v 致致 病病 性性 弧弧 菌菌v 大大 肠肠 杆杆 菌菌v 志志 贺贺 氏氏 菌菌v 小肠结肠炎耶尔森氏菌小肠结肠炎耶尔森氏菌v 空空 肠肠 弯弯 曲曲 菌菌v 致致 腹腹 泻泻 原原 虫虫v 轮轮 状状 病病 毒毒霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-223
3、致致 泻泻 性性 弧弧 菌菌霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-224 弧菌属种类较多,已定名的有弧菌属种类较多,已定名的有3030多种,其中有多种,其中有1212个个种是人的致病性弧菌或从人的临床标本中分离得到,种是人的致病性弧菌或从人的临床标本中分离得到,主要包括:霍乱弧菌、副溶血弧菌、河弧菌、拟态主要包括:霍乱弧菌、副溶血弧菌、河弧菌、拟态弧菌和麦氏弧菌等。弧菌和麦氏弧菌等。弧菌属中将与弧菌属中将与O1O1群霍乱弧菌具有共同鞭毛抗原,生群霍乱弧菌具有共同鞭毛抗原,生化性状相似,仅菌体抗原不同的弧菌统称为化性状相似,仅菌体抗原不同的弧菌统称为霍乱弧霍乱弧菌菌。根据菌体抗原不同,将
4、霍乱弧菌分成若干。根据菌体抗原不同,将霍乱弧菌分成若干O O血清血清群,目前已有群,目前已有200200多个群,其中作为国际检疫传染病,多个群,其中作为国际检疫传染病,霍乱的病原诊断,仍以检出霍乱的病原诊断,仍以检出O1O1群群或或O139O139群群霍乱弧菌霍乱弧菌为准。为准。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-225山东省及其他省份历年霍乱弧菌分型状况山东省及其他省份历年霍乱弧菌分型状况霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-226O1群和O139群抗原构造与血清分型霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-227 及时发现传染源和尽快确定疫情,是扑灭霍乱及时发现传染源
5、和尽快确定疫情,是扑灭霍乱的关键环节,病人的早期发现,首先依靠临床的关键环节,病人的早期发现,首先依靠临床实验室诊断和流行病学指征,从而为有效采取实验室诊断和流行病学指征,从而为有效采取措施提供可靠依据。措施提供可靠依据。O1O1群和群和O139O139群霍乱弧菌的检验程序详见下表。群霍乱弧菌的检验程序详见下表。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-228快速诊断快速诊断增菌培养(碱性胨水)增菌培养(碱性胨水)分离培养分离培养TCBS、ABS(庆大霉素琼脂等)庆大霉素琼脂等)标本(粪便等)标本(粪便等)波片凝集阳性波片凝集阳性(结合菌落、菌体形态)(结合菌落、菌体形态)凝集菌落或可疑菌
6、落凝集菌落或可疑菌落纯培养纯培养(普通培养)(普通培养)鉴定鉴定分型分型确诊报告确诊报告第二次第二次增菌增菌(碱性胨水)(碱性胨水)初步报告初步报告10-20小时小时6-8小时小时10-20小时小时直直接接霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-229TCBS培养基上弧菌的生长情况*产生给予类型菌落的百分数。#Hollis最初报道的蔗糖阳性率为3%,而收到的菌株中,蔗糖阳性率则比较高(15%)。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2210SPASPA霍乱诊断液使用说明霍乱诊断液使用说明 本诊断液为含A蛋白葡萄球菌菌液经高效价霍乱抗血清致敏后制成,呈均匀混浊白色混悬液。供玻片凝集
7、试验用,可作为急性腹泻病人的快速诊断和人群检索时过筛之用。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2211霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2212注意事项:1、SPA诊断液在使用前,先与质量控制标准液作 玻片凝集,如出现凝集,证明可以使用,如未出现凝集,该诊断液不可再用。与阴性对照液(盐水或PBS)不应出现凝集,如凝集时亦不可再用。2、做协同凝集试验所用的标本,应是水样便或经增菌后的培养物,不可用大便直接作凝集,以免影响结果判断。3、本品应放于4冰箱保存。用前需先作上述质量检查。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2213假阳性出现多原因:(假阳性出现多原因:(2
8、%2%)1、大便内有杂质、非特异性物质的存在。2、操作不当:a、切勿直接用大便做凝集反应。b、增菌液中挑取菌膜下层的液体,勿直接挑取菌膜作凝集反应。c、挑取诊断液与增菌液的比例要适当,挑取的量大一点,少了易干,干后贴在玻片上不易观察结果。三分钟后观察凝集结果,但时间不宜过长。阴性对照要用生理盐水,或直接用诊断液。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2214 3、免疫血清没通过其他弧菌吸收,难免有非特异性交叉凝集出现。免疫用菌株经几十年传代发生变异,免疫血清效价降低。4、金黄色葡萄球菌传代多次,发生变异,不易乳化,易出现沉淀,颗粒本身增大。5、观察结果:凝集后液体清、不凝集,对照液液体
9、混浊。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2215 埃尔托型霍乱弧菌噬菌体生物分型(中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所):为区别埃尔托型霍乱弧菌的两类不同菌株(流行株和非流行株),对各种来源的菌株进行分型,可作为追溯传染来源、传播途径和分析流行形式的流行病学工具之一。详见手册P61-64。霍乱弧菌与有关细菌的鉴别见手册P54-57。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2216 噬菌体分型:根据5株国内分离的弧菌噬菌体(VP1-VP5)将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型。对5株噬菌体全敏感的噬菌体1型菌株是最常见的流行株,但并非所有噬菌体1型菌株均为流行株。2型主要是
10、1型的粗糙型,3-6型也属流行株范畴。7型以后属非流行株,对5株噬菌体全抵抗的是32型。非流行株仅引起散发病例,是一些疫区和非疫区自然水体中的主要菌型。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2217 近年来,O139群霍乱弧菌已成为霍乱流行的主要病原。通过研究证明,O139群霍乱弧菌可能是O1群ELtor 生物型的变异株。从以下四点说明0139的特性,见下图。(1)抗原构造 (2)分泌肠毒素 (3)耐药性 (4)临床特点霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2218O139群霍乱弧菌和O1群弧菌特性对比*霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2219 O139群霍乱弧菌
11、和O1群弧菌二者生物型既有区别又有联系,最大区别是荚膜和O1群生物合成基因的有无。这些提示说明O139群霍乱弧菌不是O1群ELtor生物型简单的点突变,可能存在更复杂的突变机制。二者是否只有个别基因和表型的差异以及是什麽原因导致了这些差异(尤其是O139群表面荚膜的出现)还有待于进一步的研究。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2220大大 肠肠 杆杆 菌菌霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2221一、分类 到目前为止到目前为止 ,所发现的对人类有致所发现的对人类有致病作用的大肠埃希氏菌已有六个种别病作用的大肠埃希氏菌已有六个种别,即即:肠道致病性大肠杆菌肠道致病性大肠杆
12、菌 (EPEC)EPEC)肠道侵袭性大肠杆菌肠道侵袭性大肠杆菌 (EIEC)EIEC)肠毒素性大肠杆菌肠毒素性大肠杆菌(ETEC)ETEC)肠集聚性粘附大肠杆菌肠集聚性粘附大肠杆菌 (EAggEC)EAggEC)肠出血性大肠杆菌肠出血性大肠杆菌 (EHEC)EHEC)肠产志贺样毒素且具有侵袭力的大肠杆菌肠产志贺样毒素且具有侵袭力的大肠杆菌 (ESIEC)ESIEC)霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2222二、实验室诊断 1.肠道致病性大肠杆菌(EPEC):EPEC是最早被认识的腹泻性大肠埃希氏杆菌,其生化特性与一般大肠杆菌相同,如分解葡萄糖产酸并产气,发酵乳糖和蔗糖,靛基质和甲基
13、红试验室诊断主要靠血清学。到 1997 年为止,国际上据不完全统计已发现了39个“O”群,但各国常见的“O”群比较局限,主要的O血清型包括O55、O86、O111、O119、O125、O126、O127、O128ab和O142。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2223 2.肠道侵袭性大肠杆菌(EIEC):EIEC 的生化反应、抗原成份、致病机理均与志贺氏菌有相同之处。除 O 124 的部分菌株有动力外,其他均为无动力株。另外,EIEC与志贺氏菌抗原之间互相交叉也比较突出。EIEC 的实验室诊断中血清学是很重要的检测手段。目前,国内已有 11 种/套的诊断血清。我省在近几年的腹泻检
14、测中检出:028ac、O29、O112、O124、O136、O144、O152、Ol64和0167 9个血清型。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2224 3.肠毒素性大肠杆菌(ETEC):ETEC 的生化反应与一般大肠杆菌相同。本菌的特点是产生不耐热的肠毒素(LT)和耐热的肠毒素(ST),有些菌株两种肠毒素均产生,有些菌株只产生其中的一种。最常见的0血清型有:06、O8、O15、O20、O25、O27、O63、O78、O80、O114、O115、O128ac、O148、O153和O167。ETEC 的实验室诊断主要是肠毒素的测定。常用的试验方法有:兔肠结扎试验,Bikerl试验(
15、平板扩散试验)和酶联免疫试验。目前己有诊断血清。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2225 4.肠集聚性粘附大肠杆菌(EAggEC):EAggEC 是近几年新发现的一种与人类腹泻有关的大肠杆菌,该菌对Hela的细胞(子宫颈癌细胞)或Hep-2 细胞(喉癌细胞)有特殊的积聚性黏附现象,使细菌与细菌之间,细菌与细胞之间呈砖块样堆积状黏附.。目前,EaggEC 的诊断主要是细胞试验和特异性 DNA 探针。霍乱等感染性腹泻实验室检测技术2022-10-2226 5.肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 的鉴定:O157:H7 大肠杆菌属于肠出血性大肠杆菌(EHEC)的一个最常见、最重
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