真菌感染检查培训课件.ppt

1、真菌感染检查真菌感染检查检验特点检验特点 形态学检查为检测真菌的重要手段形态学检查为检测真菌的重要手段 抗原检测适合血清和脑脊液中隐球菌、抗原检测适合血清和脑脊液中隐球菌、念珠菌、荚膜组织胞浆菌。念珠菌、荚膜组织胞浆菌。血清学诊断适用于深部真菌感染血清学诊断适用于深部真菌感染。真菌感染检查2检测程序标本直接镜检抗原检出分离培养不染色乳酸酚棉蓝染色墨汁染色氢氧化钾消化后涂片镜检二相性真菌脑心浸液脑心浸液沙氏培养基病原性真菌血琼脂平板观察菌落性状和菌丝孢子形态真菌感染检查3显微镜检查显微镜检查-湿片法或直接涂片高倍视野镜检，见有菌丝孢湿片法或直接涂片高倍视野镜检，见有菌丝孢子或单细胞真菌（有诊断价

2、值，但不能确定真菌种类子或单细胞真菌（有诊断价值，但不能确定真菌种类）真菌感染检查4真菌感染检查5真菌感染检查6真菌感染检查7真菌感染检查8真菌感染检查9真菌感染检查10真菌的菌落真菌的菌落-真菌分类重要的依据真菌分类重要的依据 真菌的真菌的菌落菌落一般是指在一定基质上，接种某一般是指在一定基质上，接种某种真菌的一个孢子或一段菌丝，经过培养，向种真菌的一个孢子或一段菌丝，经过培养，向四周蔓延生长出丝状的群体称为真菌菌落。菌四周蔓延生长出丝状的群体称为真菌菌落。菌落呈放射状生长，因而菌落外周的生命力最旺落呈放射状生长，因而菌落外周的生命力最旺盛。在不同成分的培养基上和不同条件下培养，盛。在不同成

3、分的培养基上和不同条件下培养，同一种真菌，形成的菌落也有差别。因此，同一种真菌，形成的菌落也有差别。因此，菌菌落的形态观察是指在固定的条件下，菌落所表落的形态观察是指在固定的条件下，菌落所表现的形状、大小、色泽和结构等。不同的真菌现的形状、大小、色泽和结构等。不同的真菌菌落所表现特征差别显著，它为真菌分类工作菌落所表现特征差别显著，它为真菌分类工作提供了重要的依据。提供了重要的依据。真菌感染检查11菌落颜色菌落颜色 除酵母菌的菌落比较简单，丝状真菌的除酵母菌的菌落比较简单，丝状真菌的菌落形态各种各样。常以下述特征加以菌落形态各种各样。常以下述特征加以描述。描述。其其颜色颜色的多样很难用色泽描述

4、，常借助的多样很难用色泽描述，常借助于色谱加以鉴别。很多真菌产生多种颜于色谱加以鉴别。很多真菌产生多种颜色的色素，使菌落的背面染有颜色，有色的色素，使菌落的背面染有颜色，有的甚至分泌可溶性色素，扩散到全部基的甚至分泌可溶性色素，扩散到全部基质中去。质中去。真菌感染检查12菌落质地菌落质地 气生菌丝构成气生菌丝构成表面表面菌丝体菌丝体质地质地。底部菌丝体埋伏于培养基。底部菌丝体埋伏于培养基中或紧贴培养基表面向四周蔓延，中或紧贴培养基表面向四周蔓延，由底部体直接生出分生孢子梗，菌落外观呈由底部体直接生出分生孢子梗，菌落外观呈短茸毛短茸毛状，状，由底部菌丝体生出气生菌丝，再由它生出分生孢子梗，因由底

5、部菌丝体生出气生菌丝，再由它生出分生孢子梗，因而往往有缠绕的气生菌丝团，一般菌落而往往有缠绕的气生菌丝团，一般菌落较厚，呈絮状较厚，呈絮状。也有部分气生菌丝扭结成绳索、还有分生孢子梗自底部菌也有部分气生菌丝扭结成绳索、还有分生孢子梗自底部菌丝成束地生长，在菌落的外观上丝成束地生长，在菌落的外观上成粒状或粉状成粒状或粉状。有些真菌产生子实体或菌核，则菌落表面呈有些真菌产生子实体或菌核，则菌落表面呈颗粒结构颗粒结构。有的菌落出现有的菌落出现同心环同心环或或辐射状沟纹辐射状沟纹。有的真菌只在菌落中间区域生出分生孢子头，边缘菌丝则有的真菌只在菌落中间区域生出分生孢子头，边缘菌丝则不生育。不生育。菌落的

6、大小也大有不同，有些种的菌落可蔓延扩展到整个菌落的大小也大有不同，有些种的菌落可蔓延扩展到整个培养基，而另一些种的菌落则局限生长。培养基，而另一些种的菌落则局限生长。真菌感染检查13真菌菌落外观结构描述真菌菌落外观结构描述 菌落表面菌落表面平滑或具皱纹、致密或疏平滑或具皱纹、致密或疏松、同心环或辐松、同心环或辐 射状沟纹等；射状沟纹等；菌落质菌落质地地绒毛状、毡状、棉絮状、羊毛状、绒毛状、毡状、棉絮状、羊毛状、束状、绳索状、粉粒状、明胶状或皮革束状、绳索状、粉粒状、明胶状或皮革状等；状等；菌落的边缘菌落的边缘可呈全缘、锯齿可呈全缘、锯齿状、树枝状或纤毛状等；状、树枝状或纤毛状等；菌落高度菌落高

7、度扁平、丘状隆起、中心部分突起或凹陷扁平、丘状隆起、中心部分突起或凹陷等。等。真菌感染检查14真菌感染检查15193 patients(392 samples);43 with ICSensitivity SpecificityMannan(ag)40%98%Antimannan(ab)53%94%ag and/or ab80%93%（一）抗原：甘露聚糖一）抗原：甘露聚糖Detection of Mannan/Antimannan in Serum of Patients with Invasive CandidiasisSendid B et al,J Clin Microbiol 1999

8、;37:1510-7真菌感染检查16（二）抗原：半乳甘露聚糖二）抗原：半乳甘露聚糖Serial Aspergillus Galactomannan Screeningn=362 high-risk neutropenic patientsSandwich ELISA 2 times weekly,11.7%positiven=30 proven IAn=9 probable IAn=264 with no IASensitivity89.7%Specificity98.1%PPV87.5%NPV98.4%Maertens J et al,Blood 2001;97:1604-10真菌感染检查1

9、7GMGM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断 与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。检测方法有检测方法有ELISAELISA、放射免疫分析（、放射免疫分析（RIARIA）和乳胶）和乳胶凝集试验等，但敏感性低。凝集试验等，但敏感性低。ELISAELISA检测检测2424只兔只兔(王莉，等。王莉，等。2003)2003)敏感性敏感性和和特异性特异性：血清血清 95%78%95%78%尿液尿液 90%51.4%90%51.4%真菌感染检查18检测曲霉检测曲霉GMGM抗原的抗原的ELISAELISA试试验验真菌感染检查19GMGM抗原抗原ELIS

10、AELISA检测方法检测方法（PlateliaPlatelia试剂盒）试剂盒）王莉，等。临床皮肤科杂志，待发表。王莉，等。临床皮肤科杂志，待发表。真菌感染检查20（四）（四）-1,3-1,3葡聚糖葡聚糖 使用仪器及配套试剂盒能快速地检测出使用仪器及配套试剂盒能快速地检测出血液和体液中真菌血液和体液中真菌-1,3-1,3葡聚糖的实际葡聚糖的实际含量，对真菌的早期诊断具有重要意义。含量，对真菌的早期诊断具有重要意义。真菌感染检查22-1,3-D-1,3-D-葡聚糖检测阴性是否需要作进一步的葡聚糖检测阴性是否需要作进一步的复查复查？FuruyaFuruya的报道即使是的报道即使是确诊确诊的深部真的深

11、部真菌感染患者菌感染患者,-1,3-D-,-1,3-D-葡聚糖检测葡聚糖检测也有可能是阴性也有可能是阴性,因此单次因此单次-1,3-1,3-D-D-葡聚糖检测阴性并不能排除深部葡聚糖检测阴性并不能排除深部真菌感染的可能真菌感染的可能，必須在疾病的过必須在疾病的过程中重复进行程中重复进行-1,3-D-1,3-D-葡聚糖检测葡聚糖检测。Furuya T et al.Usefulness of-D-glucan measurement for diagnosis of deep mycosis,Jnp J Antibiot 1993;46(6):437-443真菌感染检查23确诊深部真菌感染病人确诊

12、深部真菌感染病人病史調查病史調查临床表现及影像学检查临床表现及影像学检查:1)1)发热、咳嗽、痰血发热、咳嗽、痰血1010余天余天 2)2)抗生素治疗效果不佳抗生素治疗效果不佳 3)3)胸部胸部CTCT检查检查,发现左肺阴影发现左肺阴影 支氣管鏡活組織檢查支氣管鏡活組織檢查:找見真菌找見真菌真菌感染检查24真菌分子生物学的鉴定方法 核酸碱基GC比分析 限制性片段长度多态性 Southern印迹分析 脉冲场凝胶电泳（PFGE）PCR 随机扩增多态性(RAPD)DNA片段测序等真菌感染检查25分子流行病学研究Yu J，et al.Mycopathologia,2004.引物引物OPI07 RAPD

13、扩增结果扩增结果 引物OPK20 RAPD扩增结果 IGS区扩增结果区扩增结果真菌感染检查26真菌感染检查项目的选择和应用 浅部真菌直接显微镜检查 深部真菌标本培养、观察培养物性状并借助理化特性作鉴别。真菌感染检查27Direct Examination It is highly recommended that a direct microscopic examination be made on most this provide an immediate presumptive diagnosis for the physician,but it may also aid in the

14、selection of an appropriate culture medium.A phase-contrast microscope is a valuable adjunct in the direct examination of specimens.The advantages include the following:1)mounts can be made and examined quickly;2)there is no need for direct staining;and3)the objects can be clearly visualized.真菌感染检查2

15、8Tests for detection of fungal antibodies(1)Determination of antibody and/or antigen titers may be useful in diagnosing fungal infections and when performed in a serial fashion also provide a means of monitoring the progression of disease and the patients response to therapy.真菌感染检查29 With the except

16、ionof antibody tests for histoplasmosis and occidioidomycosis,however,most tests designed to detect an antibody response as a means of diagnosing invasive fungal infections lack sensitivity and specificity,are poorly standardized and are not widely availableTests for detection of fungal antibodies(2

17、)真菌感染检查30Tests for detection of fungal antibodies(3)Antibody tests for Candida and Aspergillus.Are often unable to distinguish active from past infection and Colonization from transient fungemia真菌感染检查31Tests for detection of fungal antibodies(4)In addition,a negative test for fungus-specific antibod

18、ies does not rule out infection because imunocompromised patients,and some individuals with disseminated infection may not mount an antibody response to the infecting organism.真菌感染检查32Tests for detection of fungal antigens(1)Detection of fungal antigens or metabolites in serum or other body fluids r

19、epresents the most direct means of providing a serologic diagnosis of invasive fungal infection.Both the RIA and the EIA tests have been shown to be rapid,sensitive,specific,rapid,and reproducible.真菌感染检查33Tests for detection of fungal antigens(2)Although significant advances have been made in recent

20、 years,most methods for rapid detection of fungal antigens are available only in research laboratories.Notable exceptions are the tests for detection of the polysaccharid ride antigens of C.neoformans and H.capsulatumd.真菌感染检查34Tests for detection of fungal-specific nucleic acid sequences(1)The use o

21、f the PCR to detect fungal nucleic acids directly in clinical material offers great promise for the rapid diagnosis of fungal infections.真菌感染检查35Tests for detection of fungal-specific nucleic acid sequences(2)In addition to detection of fungal pathogens in clinical terid,immunologic and molecular approaches have been applied successfully to the identification of fungi in culture.真菌感染检查36