HIV感染的血清学检测培训课件.ppt
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1、内容nHIV抗体检测:抗体检测:nHIV抗体筛查检测nHIV确认实验nHIV P24抗原检测:抗原检测:1HIV感染的血清学检测10/22/2022HIVHIV抗体检测抗体检测全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS(2004年版)2HIV感染的血清学检测10/22/2022nHIVHIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查:抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查:n以监测为目的的检测是为了解不同人群以监测为目的的检测是为了解不同人群HIVHIV感染率及其变感染率及其变化趋势而进行的检测,检测的人群包括各类高危人群和一化趋势而进行
2、的检测,检测的人群包括各类高危人群和一般人群。般人群。n以诊断为目的的检测是为了确定个体以诊断为目的的检测是为了确定个体HIVHIV感染状况而进行感染状况而进行的检测,包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据的检测,包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。特殊需要进行的体检等。n以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIVHIV而进行而进行的检测,包括献血员筛查和原料血浆筛查。的检测,包括献血员筛查和原料血浆筛查。nHIVHIV抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复检)和确认试抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复检)和确认试验验3H
3、IV感染的血清学检测10/22/2022HIV抗体试剂盒进展代次代次 抗原抗原 方法方法特异性检测特异性检测 检测时间检测时间1 全病毒全病毒 间接间接 IgG 抗体抗体HIV-1 2个月个月2 重组或多肽重组或多肽 间接间接 IgG 抗体抗体HIV-1/-2 3-4 周周3 重组重组+多肽多肽 夹心夹心 IgM/IgG 抗体抗体 4-7 天天 HIV-1/-2/-O4 抗原抗原+抗体抗体 夹心夹心IgM/IgG 抗体抗体 抗原抗原 5pg HIV-1/-2/-O p24 抗原抗原4HIV感染的血清学检测10/22/2022 HIV抗体检测筛查试验5HIV感染的血清学检测10/22/2022H
4、IV抗体筛查检测n程序筛查、复检、确认n原理酶联免疫、凝集、层析n标本血液、唾液、尿液、组织液n产品ELISA、快速、简单6HIV感染的血清学检测10/22/2022筛查试剂要求nHIV 混合型n国家SDA生物诊断试剂注册批准n批检合格n临床评估质量优良7HIV感染的血清学检测10/22/2022筛查方法:筛查方法:n常用的筛查方法是酶联免疫试验(ELISA)n快速检测(RT)及其它检测 (1)明胶颗粒凝集试验(PA)(2)斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA)(3)斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验 (4)艾滋病唾液检测卡n尿液HIV抗体检测8HIV感染的血清学检测10/22/202
5、2一、酶联免疫试验:ELISAn n 92022-10-22包被抗原血中抗体与抗原反应显色反应酶联免疫法酶联免疫法病毒溶解抗原、重组的衍生抗原、合成肽抗原酶联HRP、AP或化学发光10HIV感染的血清学检测10/22/2022(一)斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA)n以硝酸纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点状,即为固相抗原。加血清样品作用,以后步骤同ELISA。n阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内,使用抗原量少。二、快速诊断试剂二、快速诊断试剂11HIV感染的血清学检测10/22/2022(二)免疫胶体金(或胶体硒)快速试验n与斑点EIA相似,也是
6、以硝酸纤维膜为载体。n区别在于不用酶标记抗体,而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白,用渗滤法作为洗涤方法。12HIV感染的血清学检测10/22/2022n稳定,可室温长期保存。试验不需任何设备,稳定,可室温长期保存。试验不需任何设备,迅速、简便、特异性较好,敏感性约相当于迅速、简便、特异性较好,敏感性约相当于中度敏感的中度敏感的ELISAELISA,适用于应急检测、门诊,适用于应急检测、门诊急诊个体检测。急诊个体检测。n已有被已有被SFDASFDA批准注册的进口试剂和国内产品。批准注册的进口试剂和国内产品。一般可在一般可在1010 30min30min内判读结果。内判读结果。免疫胶体硒快速试
7、验特点免疫胶体硒快速试验特点13HIV感染的血清学检测10/22/2022v样品垫:加入血浆,血清或全血样品.红细胞在此迁移过程中被去除v质控条:固定的含捕捉硒标物的特异性试剂,不管样品中有无被检测物都应出现红色线条.控制测试结果的有效性病人条:固定的含特异性分析试剂,任何与硒标特异性试剂结合的分析复合物在此被结合固定,形成三文治结合物,肉眼可见的红色线条说明有阳性反应连接物垫:含分析特异性试剂结合的硒标,为一种肉眼可见的红色信号,被分析物和硒标特异性试剂在此反应结合14HIV感染的血清学检测10/22/2022 撕下所需的测试纸条数,撕下表面保护膜15HIV感染的血清学检测10/22/202
8、2血清/血浆样品加50ul样品于样品垫中15分钟内读取结果16HIV感染的血清学检测10/22/2022全血样品 加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果17HIV感染的血清学检测10/22/2022病人条质控条18HIV感染的血清学检测10/22/2022 注意事项n非EDTA抗凝的血浆样品可能会 得到不正确的结果n反应条颜色深浅的程度与样品中 抗体的滴度没有必然的联系 n结果的判断n19HIV感染的血清学检测10/22/2022 (三)艾滋病唾液检测卡n在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原,可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-
9、2抗体,原理为酶免疫间接法。n主要检测唾液中的HIV IgA与IgG抗体,敏感性特异性与ELISA相近,可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。n以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法(WB)试剂已经美国FDA批准。20HIV感染的血清学检测10/22/2022(四)明胶颗粒凝集试验(PA)nPA是HIV血清抗体检测的一种简便方法,是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待检样品作用,混匀后保温(一般为室温)。当待检样品含有HIV抗体时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。nPA试剂有两种,HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA
10、试剂(AFD HIV-1/2 PA),已经我国食品药品监督管理局(SFDA)注册批准;HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(SERODIA-HIV-1/2)可初步区分HIV-1型和HIV-2型,目前我国尚未引进。21HIV感染的血清学检测10/22/2022 尿液测定n采样优点,尤其对吸毒者标本n机理:IgA为主,IgG少量nHIV-1型抗体n阳性结果务必用血清学检测22HIV感染的血清学检测10/22/2022快速试剂的应用n偏远地区n急诊n临床(高危)n职业暴露n临产23HIV感染的血清学检测10/22/2022结果报告:结果报告:对呈对呈阴性反应阴性反应的样品,可由实施检测的实验
11、室出具的样品,可由实施检测的实验室出具HIVHIV抗抗体阴性报告。体阴性报告。对呈对呈阳性反应阳性反应的样品,须进行复检,的样品,须进行复检,不能出阳性报告不能出阳性报告。复检试验:复检试验:对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如果两种试剂复测均呈阴性反应,则如果两种试剂复测均呈阴性反应,则报告报告HIVHIV抗体阴性抗体阴性;如均呈阳性反应,或一阴一阳,需如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行送艾滋病确认实验室进行确认确认。对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性
12、报告,可出具对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告,可出具“HIVHIV抗体待复查抗体待复查”报告。报告。24HIV感染的血清学检测10/22/2022初筛试验呈阳性反应样品的转送:初筛试验呈阳性反应样品的转送:n 填写填写“HIVHIV抗体待复测送检单抗体待复测送检单”,经,经1 1名检验人员名检验人员和和1 1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室,再转送艾滋病确认实验地艾滋病筛查中心实验室,再转送艾滋病确认实验室,或在本实验室复检后直接送确认实验室。室,或在本实验室复检后直接送确认实验室。n 对筛查阴性和阳性者,均需做好检
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