诊断学出血血栓与止血检测课件.ppt

1、诊断学诊断学（第八版）（第八版）P285第三章第三章 血栓与止血检测血栓与止血检测医学检验学医学检验学系系 孙艳丽孙艳丽E-mail：Tel:8462519 教学内容教学内容第一节第一节 血管壁检测血管壁检测第二节第二节 血小板检测血小板检测第三节第三节 凝血因子检测凝血因子检测第四节第四节 抗凝系统检测抗凝系统检测第五节第五节 纤溶活性检测纤溶活性检测第八节第八节 检测项目的选择和应用检测项目的选择和应用教学目的与要求教学目的与要求（3 3学时）学时）掌握内容：掌握内容：掌握血管、血小板、凝血因子、抗凝系掌握血管、血小板、凝血因子、抗凝系统、纤溶活性检测项目的临床意义。统、纤溶活性检测项目的

2、临床意义。熟悉内容：熟悉内容：各检测项目的原理、方法及参考值。各检测项目的原理、方法及参考值。DIC检查的项目及临床意义。检查的项目及临床意义。了解内容：了解内容：止凝血与抗凝血机制。止凝血与抗凝血机制。生理状态下生理状态下血管中流动的血液为什么不凝固？血管中流动的血液为什么不凝固？破损的血管为什么能止血？破损的血管为什么能止血？机体内存在着复杂的止、凝血系统机体内存在着复杂的止、凝血系统和抗凝系统和抗凝系统正常止凝血过程正常止凝血过程(止凝血机制止凝血机制)有三大因素有三大因素参与参与 一一二二三三血管血管血小板血小板凝血因子凝血因子血血 管管血小板血小板凝血因子凝血因子血管收缩血管收缩血小

3、板血栓形成血小板血栓形成纤维蛋白凝块形成与维持纤维蛋白凝块形成与维持生理性止凝血机制主要包括生理性止凝血机制主要包括三个时相三个时相：正常抗凝过程正常抗凝过程(抗凝机制抗凝机制)有两大因素参与有两大因素参与 一一二二抗凝系统抗凝系统 纤溶系统纤溶系统第一节第一节血管壁检测血管壁检测P285ECECECECEC1 1、收缩反应：神经、体液调节、收缩反应：神经、体液调节神经反射神经反射体液中的活性物质体液中的活性物质 血管壁的止血作用血管壁的止血作用复习复习内皮素、血栓烷内皮素、血栓烷A2A21 1、收缩反应：神经、体液调节、收缩反应：神经、体液调节 血管壁的止血作用血管壁的止血作用复习复习ECE

4、CECECEC2 2、激活血小板（、激活血小板（vWFvWF）：）：胶原胶原-vWF-vWF-血小板血小板胶原胶原血小板粘附血小板粘附 血管壁的止血作用血管壁的止血作用复习复习ECECECECEC3 3、促进血液凝固过程：、促进血液凝固过程：组织因子组织因子外源性凝血途径外源性凝血途径胶胶原原激活激活F内源性凝血途径内源性凝血途径 血管壁的止血作用血管壁的止血作用复习复习ECECECECEC4 4、抑制纤维蛋白溶解、抑制纤维蛋白溶解分泌分泌PAI抑制纤维蛋白溶解抑制纤维蛋白溶解PAIPAI：纤溶酶原激活抑制剂：纤溶酶原激活抑制剂 血管壁的止血作用血管壁的止血作用复习复习血管壁检测血管壁检测筛检

5、试验筛检试验1.出血时间测定（出血时间测定（BT）2.束臂试验束臂试验(CRT，毛细血管脆性试验，毛细血管脆性试验)1、出血时间测定出血时间测定（Bleeding time,BT）【原理原理】测定皮肤受特定条件的外伤后，测定皮肤受特定条件的外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。出血自然停止所需的时间即为出血时间。是反映毛细血管壁是反映毛细血管壁和血小板止血功能和血小板止血功能常用的筛选试验常用的筛选试验。【参考值参考值】出血时间测定器法出血时间测定器法(6.92.1)min，超过超过9min为异常为异常40mmHg(30-60)s【方法方法】出血时间测定器法出血时间测定器法受血小板数量和

6、血管壁影响。受血小板数量和血管壁影响。出血时间延长：出血时间延长：血小板数量、功能异常：血小板数量、功能异常：血小板无力症血小板无力症（GPIIb/IIIa缺乏或减少）缺乏或减少）血管壁异常：血管壁异常：遗传性毛细血管扩张症遗传性毛细血管扩张症 综合因素：综合因素：vWD（血管性血友病血管性血友病）、）、DIC 出血时间缩短：出血时间缩短：见于某些严重的高凝状态或血栓性疾病：见于某些严重的高凝状态或血栓性疾病：脑血栓、心肌梗死、糖尿病、高血脂、下肢静脑血栓、心肌梗死、糖尿病、高血脂、下肢静脉栓塞、脉栓塞、DIC高凝期高凝期【临床意义临床意义】2、束臂试验、束臂试验 又叫毛细血管脆性试验又叫毛细

7、血管脆性试验（capillary fragility test,CRT）、毛细血管抵抗试验毛细血管抵抗试验（capillary resistance test,CRT）。【原理原理】毛细血管的完整性与其本身的结构、功能，血小毛细血管的完整性与其本身的结构、功能，血小板的质、量，以及一些体液因素有关。板的质、量，以及一些体液因素有关。用加压的方法来部分阻止静脉血液回流，可以根用加压的方法来部分阻止静脉血液回流，可以根据一定范围内新出血点的数目及大小来估计毛细血管据一定范围内新出血点的数目及大小来估计毛细血管的脆性。的脆性。P285【参考值参考值】阴性：阴性：5cm直径圆圈中的出血点数：直径圆圈中

8、的出血点数：男性少于男性少于5个；女性及儿童少于个；女性及儿童少于10个个(12-13.5)kPa/(90-100)mmHg)8min【操作操作】【临床意义临床意义】新出血点超过正常为阳性，见于：新出血点超过正常为阳性，见于：血管壁的结构和（或）功能缺陷：血管壁的结构和（或）功能缺陷：遗传性毛细血管扩张症、遗传性毛细血管扩张症、vWD血小板的量、功能异常血小板的量、功能异常 血小板减少症血小板减少症、血小板功能缺陷症、血小板功能缺陷症（一）血管性血友病因子抗原测定（一）血管性血友病因子抗原测定（vWFvWF：AgAg）【原理】【原理】（1 1）免疫火箭电泳法：）免疫火箭电泳法：vWFvWF抗体

9、的琼脂糖凝胶板中加入一定量受检血浆（抗体的琼脂糖凝胶板中加入一定量受检血浆（vWFvWF抗抗原），在电场作用下，泳动一定时间，出现抗原原），在电场作用下，泳动一定时间，出现抗原-抗体反抗体反应形成的火箭样沉淀线，其高度与受检血浆中应形成的火箭样沉淀线，其高度与受检血浆中vWFvWF的浓度的浓度呈正相关，计算出呈正相关，计算出vWFvWF：AgAg的含量。的含量。（2 2）酶联免疫吸附试验（）酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）诊断试验诊断试验诊断试验诊断试验（一）血管性血友病因子抗原测定（一）血管性血友病因子抗原测定（VWFVWF：AgAg）【参考值】【参考值】94.1%94.1%32.5

10、%32.5%。【临床意义】【临床意义】减低减低:见于见于vWDvWD,是诊断是诊断vWDvWD及其分型的指标之一。及其分型的指标之一。增高增高:见于见于血栓性疾病血栓性疾病及血栓前状态及血栓前状态,如心肌梗如心肌梗塞、心绞痛、脑血管病变、糖尿病等。塞、心绞痛、脑血管病变、糖尿病等。第二节第二节血小板检测血小板检测P287复习复习 血小板结构血小板结构复习复习 血小板结构血小板结构vWF胶原胶原 Adhesion内皮细胞内皮细胞endothelium基基底底膜膜GPa-aGPb-Resting Platelet血小板粘附模式图血小板粘附模式图（一）黏附功能（一）黏附功能复习复习 血小板的止血作用

11、血小板的止血作用vWFResting PlateletADPGPActivated Platelet oneActivated Platelet twoGPb-aAggregation二.聚集功能 aGPb-aFibrinogen+血小板聚集模式图血小板聚集模式图胶原胶原Ca2+Ca+Resting PlateletADPActivated Platelet releasesa三三.释释放放反反应应颗粒：颗粒：-TG PF4 TSP致密颗粒：致密颗粒：ADPP-selectinCa2+血小板释放模式图血小板释放模式图 release四四.促促凝凝作作用用aCaaaFgActivated Pla

12、teletaaCaFIBRIN CLOTPF3PF3a-Ca2+PF3Coagulationa-a Ca2+PF3凝血活酶凝血活酶血小板促凝作用模式图血小板促凝作用模式图五五.血血块块收收缩缩功功能能血小板血块收缩功能模式图血小板检测血小板检测筛选试验：筛选试验：血小板计数血小板计数血块收缩试验血块收缩试验诊断试验：诊断试验：血小板相关免疫球蛋白的测定血小板相关免疫球蛋白的测定血小板粘附功能测定血小板粘附功能测定血小板聚集功能测定血小板聚集功能测定1、血小板计数、血小板计数(platelet count,PC或或BPC，PLT)【参考值参考值】（100-300）109/LP260 血小板减少血

13、小板减少：血小板生成障碍：血小板生成障碍：见于造血功能障碍（再障、见于造血功能障碍（再障、急白、急性放射病）急白、急性放射病）血小板破坏或消耗增多：血小板破坏或消耗增多：ITPITP、DICDIC、TTPTTP 血小板分布异常：脾肿大、血液被稀释血小板分布异常：脾肿大、血液被稀释 血小板增多血小板增多：原发性增多：原发性增多：骨髓增殖性疾病（真性红细胞增骨髓增殖性疾病（真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化早期、多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化早期、慢粒）慢粒）反应性增多：反应性增多：急性感染、溶血、某些癌症患者急性感染、溶血、某些癌症患者【临床意义临床意义】2、血块收缩试验血块

14、收缩试验（clot retraction test,CRT）【原理原理】血液凝固后，由于血小板释放的血血液凝固后，由于血小板释放的血小板收缩蛋白，使血块收缩，血清析出。小板收缩蛋白，使血块收缩，血清析出。测定析出血清量占全血量的百分数来表示测定析出血清量占全血量的百分数来表示血块收缩的程度，可间接了解血小板功能情况，血块收缩的程度，可间接了解血小板功能情况，此即血块收缩试验（此即血块收缩试验（CRT）。）。血块收缩率血块收缩率=血清（血清（mlml）/全血（全血（mlml）(100%-Hct%)(100%-Hct%)100%P288【正常参考值正常参考值】定量法（凝块法）：定量法（凝块法）：3

15、737，1 1小时其血块收小时其血块收率为率为65.8%65.8%11.0%11.0%定性试验：定性试验：3737，2 2小时开始收缩，小时开始收缩，18-2418-24小时完全收缩（血清占全血小时完全收缩（血清占全血1/3-1/21/3-1/2）。）。完全收缩完全收缩 部分收缩部分收缩 收缩不良收缩不良 不收缩不收缩 【结果判断结果判断】定性试验定性试验血块收缩主要取决于血小板、纤维蛋白原、红血块收缩主要取决于血小板、纤维蛋白原、红细胞量等因素。细胞量等因素。血块收缩不良或不收缩（血块收缩不良或不收缩（40%40%）：）：血小板数量、异常：血小板数量、异常：血小板无力症、血小板无力症、ITP

16、ITP、血小、血小板增多症板增多症纤维蛋白原异常：纤维蛋白原异常：低（无）纤维蛋白原血症低（无）纤维蛋白原血症红细胞增加：红细胞增加：红细胞增多症红细胞增多症 血块收缩过度血块收缩过度(升高升高)：先天性先天性/获得性获得性缺乏症缺乏症(？)【临床意义临床意义】3、血小板相关免疫球蛋白测定、血小板相关免疫球蛋白测定（platelet associated immunoglobulin,PAIg）包括：包括：PAIgG、PAIgM、PAIgA【方法方法】ELISA法法P298【参考值参考值】PAIgG：（078.8）ng/107血小板血小板PAIgM：（07.0）ng/107血小板血小板PAIg

17、A：（02.0）ng/107血小板血小板本试验是本试验是免疫性血小板减少性紫癜免疫性血小板减少性紫癜诊断、诊断、疗效及预后评估的重要指标，也有助于其他疗效及预后评估的重要指标，也有助于其他血小板疾病的免疫机制研究。血小板疾病的免疫机制研究。PAIg增高：增高：q见于见于ITP、同种免疫性血小板减少性紫癜、同种免疫性血小板减少性紫癜、药物免疫性血小板减少性紫癜等。以药物免疫性血小板减少性紫癜等。以ITP阳阳性率最高。性率最高。【临床意义临床意义】4、血小板粘附试验、血小板粘附试验（platelet adhension test,PAdT）【玻璃珠柱法原理玻璃珠柱法原理】血小板具有体内粘附于内膜下

18、组织或体外粘附于带血小板具有体内粘附于内膜下组织或体外粘附于带负电荷物质的性质。当血液通过玻珠柱时，血小板负电荷物质的性质。当血液通过玻珠柱时，血小板可粘附在充满玻珠的塑料管内，血中血小板数会因可粘附在充满玻珠的塑料管内，血中血小板数会因此而降低此而降低 血小板黏附的本质是血小板膜糖蛋白（血小板黏附的本质是血小板膜糖蛋白（GP GP Ib/V/IXIb/V/IX）通过）通过vWFvWF与血管内皮下胶原黏附。与血管内皮下胶原黏附。P288【正常参考值正常参考值】玻璃珠柱法：玻璃珠柱法：62.5%8.6%通 过 柱 前 血小 板 数/通过 柱 前 血 小板 数 为 粘 附率通 过 柱 前 血小 板

19、 数/通过 柱 前 血 小板 数 为 粘 附率PAdT增高增高血栓前状态和血栓性疾病：血栓前状态和血栓性疾病：心梗、糖尿心梗、糖尿病、深静脉血栓形成、妊高症、动脉粥样病、深静脉血栓形成、妊高症、动脉粥样硬化硬化PAdT减低减低血小板因素：血小板因素：血小板无力症、抗血小板药血小板无力症、抗血小板药止血综合因素：止血综合因素：vWD其他：其他：尿毒症、肝硬化、尿毒症、肝硬化、MDS、急性白血、急性白血病病【临床意义临床意义】5 5、血小板聚集试验、血小板聚集试验（platelet aggregation test,PAgT)platelet aggregation test,PAgT)根据血小板

20、聚集曲线的变化了根据血小板聚集曲线的变化了解血小板聚集的程度和速度。解血小板聚集的程度和速度。血小板聚集试验血小板聚集血小板聚集PRP血浆血浆血浆浊度减低，血浆浊度减低，透光度增加透光度增加【方法方法】仪器法，常用比浊法仪器法，常用比浊法P289血小板诱导剂血小板诱导剂如如ADPADP、肾上腺素、胶原、瑞肾上腺素、胶原、瑞斯托霉素斯托霉素PAgT增高增高血栓前状态和血栓性疾病血栓前状态和血栓性疾病PAgT减低减低先天性：先天性：血小板无力症、血管性血友血小板无力症、血管性血友病（病（vWDvWD）后天性：后天性：骨髓增殖性疾病、服用抗血骨髓增殖性疾病、服用抗血小板药物小板药物【临床意义临床意义

21、】（四）血小板（四）血小板P-P-选择素测定选择素测定血小板血小板颗粒膜蛋白颗粒膜蛋白-140(GMP-140)-140(GMP-140)测定测定【原理原理】GMP-140GMP-140是存在于血小板是存在于血小板颗粒膜的标志蛋白分子，当颗粒膜的标志蛋白分子，当血小板血小板激活激活时，时，GMP-140GMP-140进入血浆或与血小板质膜融进入血浆或与血小板质膜融合，并大量表达于膜表面，形成质膜表面的一个新抗合，并大量表达于膜表面，形成质膜表面的一个新抗原。利用抗原。利用抗P-P-选择素的单抗定量测定受检血浆中或血选择素的单抗定量测定受检血浆中或血小板小板P-P-选择素的含量可反映体内血小板的

22、激活程度。选择素的含量可反映体内血小板的激活程度。【临床意义临床意义】1.1.是血小板被是血小板被激活激活的一个最有意义的特异性分子标志物。的一个最有意义的特异性分子标志物。2.2.增高见于急性心肌梗塞增高见于急性心肌梗塞 、心绞痛、高血压、糖尿病、心绞痛、高血压、糖尿病、脑血栓形成、动脉硬化等。脑血栓形成、动脉硬化等。【原理原理】血小板血小板激活激活后，膜磷脂花生四烯酸后，膜磷脂花生四烯酸(AA)(AA)代谢亢进，生代谢亢进，生成成TXATXA2 2，其不稳定，并很快转化为，其不稳定，并很快转化为TXBTXB2 2，测定血浆中含测定血浆中含量可反映量可反映AAAA代谢水平，从而反映血小板是否

23、被激活。代谢水平，从而反映血小板是否被激活。【参参考考值值】(76.3(76.348.1)ng/L 48.1)ng/L【临床意义临床意义】TXB TXB2 2促血管收缩，促血小板聚集。促血管收缩，促血小板聚集。1 1、增高：见于血栓性疾病、动脉硬化、糖尿病、恶性肿瘤等。、增高：见于血栓性疾病、动脉硬化、糖尿病、恶性肿瘤等。2 2、降低：见于先天性花生四烯酸代谢障碍性疾病或服用阿司匹、降低：见于先天性花生四烯酸代谢障碍性疾病或服用阿司匹林类药物等。林类药物等。（六）血浆血栓烷六）血浆血栓烷B B2 2(TXB(TXB2 2)测定测定 第三节第三节凝血因子检测凝血因子检测P291参与凝血的因子：参

24、与凝血的因子：因子因子常用名称常用名称因子因子常用名称常用名称因子因子常用名称常用名称I纤维蛋白原纤维蛋白原凝血酶原凝血酶原组织因子（组织因子（TF）Ca2+易变因子易变因子稳定因子稳定因子抗血友病甲因子抗血友病甲因子Christmas因子因子Stuart-Prower因子因子血浆凝血激酶先质血浆凝血激酶先质Hageman因子因子纤维蛋白稳定因子纤维蛋白稳定因子PK激肽释放酶原激肽释放酶原HMWK高相对分子质量激肽原高相对分子质量激肽原主要合成场所：肝脏主要合成场所：肝脏生理状态下以未激活生理状态下以未激活状态存在状态存在 凝血因子凝血因子复习复习内源凝血途径内源凝血途径外源凝血途径外源凝血途

25、径第一阶段：第一阶段：凝血活酶形成凝血活酶形成第三阶段：第三阶段：纤维蛋白形成纤维蛋白形成第二阶段：第二阶段：凝血酶形成凝血酶形成 共共同同凝凝血血途途径径内内源源凝凝血血系系统统外外源源凝凝血血系系统统 凝血机理凝血机理复习复习第一阶段：凝血活酶，又称凝血酶原酶第一阶段：凝血活酶，又称凝血酶原酶（a-Va-Ca2+-PF3复合物）形成复合物）形成因子因子的激活有两条途径：的激活有两条途径：内源性凝血途径（次要）内源性凝血途径（次要）外源性凝血途径（主要外源性凝血途径（主要,当形成凝血酶后使内当形成凝血酶后使内凝途径进一步放大）凝途径进一步放大）凝血机理凝血机理复习复习第二阶段：凝血酶形成第二

26、阶段：凝血酶形成 第三阶段：纤维蛋白形成第三阶段：纤维蛋白形成 凝血机理凝血机理复习复习Xaa Ca2+PF3 凝血酶原凝血酶原凝血酶凝血酶a 纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白可溶性可溶性稳定性稳定性单体单体纤维蛋白纤维蛋白纤维蛋白纤维蛋白筛选试验：筛选试验：1、活化部分凝血活酶时间测定（活化部分凝血活酶时间测定（APTT)2、凝血时间（凝血时间（CT）3、血浆凝血酶原时间测定（血浆凝血酶原时间测定（PT）诊断试验：诊断试验：血浆纤维蛋白原测定（血浆纤维蛋白原测定（Fg）各种凝血因子的测定各种凝血因子的测定凝血因子检测凝血因子检测(activated partial thromboplas

27、tin time,APTT)1 1、活化部分凝血活酶时间测定、活化部分凝血活酶时间测定【原理原理】在受检血浆中加入活化的部分凝在受检血浆中加入活化的部分凝血活酶时间试剂（接触因子激活剂和部血活酶时间试剂（接触因子激活剂和部分磷脂）和分磷脂）和Ca2+，观察血浆凝固所需的，观察血浆凝固所需的时间。时间。P291是是内源凝血系统内源凝血系统较为敏感、最为常较为敏感、最为常用的筛选试验。用的筛选试验。内源性凝血途径内源性凝血途径 外源性凝血途径外源性凝血途径 TF +Ca2+TF+Ca2+PF3 共共 同同a+a+Ca2+PF3 途途 径径APTTCa2+【参考值参考值】1、（、（31-43）秒秒2

28、、与对照相差在、与对照相差在10秒以内秒以内【临床意义临床意义】APTTAPTT延长延长APTTAPTT缩短缩短血栓性疾病、血栓前状态血栓性疾病、血栓前状态先天性凝先天性凝血因子缺陷血因子缺陷1 1、内凝途径、内凝途径：因子：因子、，如血友病如血友病2 2、共同途径：、共同途径：因子因子、纤维蛋白原（纤维蛋白原（）后天性凝后天性凝血因子缺陷血因子缺陷1 1、肝实质损伤、肝实质损伤2 2、维、维K K不足时：阻塞性黄疸不足时：阻塞性黄疸3 3、纤溶亢进：、纤溶亢进：DICDIC纤溶亢进期纤溶亢进期4 4、抗凝物质、抗凝剂：、抗凝物质、抗凝剂：肝素肝素等等监测肝素治疗的首选指标监测肝素治疗的首选指

29、标2、凝血时间、凝血时间（clotting time,CT）【原理原理】血液离体后凝固所需时间。血液离体后凝固所需时间。反映了凝血过程的三个阶段有无障反映了凝血过程的三个阶段有无障碍。碍。【参考值参考值】4-12分钟（试管法）分钟（试管法）【评价评价】该法目前已被该法目前已被APTT代替代替【临床意义临床意义】见见APTT检查检查P291(prothrombin time,PT)3 3、血浆凝血酶原时间测定（、血浆凝血酶原时间测定（PTPT）【原理原理】在受检血浆中加入钙离子和组织因子在受检血浆中加入钙离子和组织因子（TF或组织凝血活酶），观察血浆的凝或组织凝血活酶），观察血浆的凝固时间即为凝

30、血酶原时间。固时间即为凝血酶原时间。是反映是反映外源凝外源凝血系统血系统最常用最常用的筛选试验。的筛选试验。P292内源性凝血途径内源性凝血途径 外源凝血途径外源凝血途径 TF +Ca2+TFa+a+Ca2+PF3 Ca2+共共 同同a+a+Ca2+PF3 途途 径径PT PT秒数：直接测定的时间秒数：直接测定的时间【参考值参考值】（121）s（超过对照（超过对照 3s 以上为异以上为异常）常）PT比值（比值（PTR)：待测血浆：待测血浆PT/对照对照PT【参考值参考值】PTR：1.00.05 国际正常化比值（国际正常化比值（INR）：）：INRPTRISI （ISI=国际敏感指数），国际敏感

31、指数），ISI越小，灵敏度越高。越小，灵敏度越高。【参考值参考值】INR：2.02.5【参考值参考值】【临床意义临床意义】PT缩短缩短血栓前状态、高凝状态（血栓前状态、高凝状态（DIC早期）早期）PTPT延长延长先天性凝先天性凝血因子缺陷血因子缺陷1 1、外凝途径、外凝途径：因子：因子2 2、共同途径：、共同途径：因子因子、纤维蛋白原（纤维蛋白原（）后天性凝后天性凝血因子缺陷血因子缺陷1 1、肝实质损伤、肝实质损伤2 2、维、维K K不足时：阻塞性黄疸不足时：阻塞性黄疸3 3、纤溶亢进、纤溶亢进、DICDIC低凝期低凝期4 4、抗凝物质、抗凝剂：、抗凝物质、抗凝剂：华法林华法林等等监测口服抗凝

32、剂（香豆素类）的首选试验：监测口服抗凝剂（香豆素类）的首选试验：正正常的常的1.5-2倍倍(fibrinogen,Fg)（一）血浆纤维蛋白原测定（一）血浆纤维蛋白原测定【原理原理】凝血酶比浊法：在受检血浆中凝血酶比浊法：在受检血浆中加入一定量的凝血酶，使血浆中的纤维加入一定量的凝血酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，通过比浊原理蛋白原转变为纤维蛋白，通过比浊原理计算计算Fg的含量。的含量。【参考值参考值】（2-4）g/LP303诊断试验诊断试验 减低：减低：见于见于DIC消耗性低凝期及纤溶期、原消耗性低凝期及纤溶期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化等。发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化等。增高：增

33、高：见于糖尿病、急性心肌梗死、风湿病、见于糖尿病、急性心肌梗死、风湿病、急性肾炎、多发性骨髓瘤、大手术后、急性肾炎、多发性骨髓瘤、大手术后、妊娠高血压综合征、急性感染、恶性肿妊娠高血压综合征、急性感染、恶性肿瘤等。瘤等。【临床意义临床意义】（二）血浆凝血因子（二）血浆凝血因子、促凝促凝活性测定活性测定【参考值】【参考值】F:C 103%F:C 103%25.7%25.7%；F :C 98F :C 98.1%1%30.4%30.4%；F :C 100%F :C 100%18.4%18.4%；F :C 92.4%F :C 92.4%20.7%20.7%【临床意义】【临床意义】1.1.增高增高 血栓

34、前状态和血栓性疾病。血栓前状态和血栓性疾病。DVTDVT等等2.2.降低降低 血友病血友病A A(病因？病因？)、血友病、血友病B B（病因？）（病因？）、因子、因子缺乏症缺乏症 肝脏疾病，维生素肝脏疾病，维生素K K缺乏、缺乏、DICDIC等。等。诊断试验诊断试验（三）血浆（三）血浆VkVk依赖凝血因子促凝活性测定依赖凝血因子促凝活性测定VkVk依赖凝血因子：依赖凝血因子：IIII、VIIVII、IXIX、X,X,多由肝脏产生。多由肝脏产生。【参考值】【参考值】FF：C 97.7%C 97.7%16.7%16.7%；F F：C102.4%C102.4%30.9%30.9%；F F：C103%

35、C103%17.3%17.3%；F F：C 103%C 103%19%19%【临床意义】【临床意义】1 1.增高：血栓前状态和血栓性疾病。增高：血栓前状态和血栓性疾病。2.2.降低：降低：先天性先天性、因子缺乏因子缺乏 获得性肝脏疾病、口服抗凝剂、维生素获得性肝脏疾病、口服抗凝剂、维生素K K缺乏，缺乏，DICDIC、新生儿出血症、肠道灭菌和吸收不良综合症等。新生儿出血症、肠道灭菌和吸收不良综合症等。诊断试验诊断试验第四节第四节抗凝系统检测抗凝系统检测P303抗凝系统是维持血液呈液态的重要因素。抗凝系统是维持血液呈液态的重要因素。1.1.细胞抗凝系统：细胞抗凝系统：血管内皮细胞、单核血管内皮细

36、胞、单核-巨噬细巨噬细胞、肝细胞胞、肝细胞2.2.体液抗凝系统：体液抗凝系统：抗凝血酶、蛋白抗凝血酶、蛋白C C系统、组织系统、组织因子途径抑制物、肝素等因子途径抑制物、肝素等 抗凝系统抗凝系统复习复习细胞抗凝系统细胞抗凝系统复习复习单核单核-巨噬细胞巨噬细胞凝血过程有关凝血过程有关 物质和产物物质和产物吞吞 噬噬清清 除除体液抗凝系统体液抗凝系统复习复习1 1.抗凝血酶抗凝血酶III（antithrombin III，AT-III）AT-III灭灭活活IIa,VIIa,IXa,Xa,XIIa,激肽释放酶激肽释放酶 体液抗凝系统体液抗凝系统复习复习2.组织因子途径抑制物组织因子途径抑制物(ti

37、ssue factor pathway inhibitor，TFPI)灭灭活活VIIa,TF,XaVIIa,TF,XaTFPI体液抗凝系统体液抗凝系统复习复习3.蛋白蛋白C系统系统l 蛋白蛋白C C（Protein C,PCProtein C,PC）l 蛋白蛋白S S（Protein Protein S S,P,PS S ）l 血栓调节素（血栓调节素（throbomodulin,TMthrobomodulin,TM）l 活化蛋白活化蛋白C C抑制物抑制物(activated protein C(activated protein C inhibitor,APCI)inhibitor,APCI)

38、抗凝机制：抗凝机制：灭活凝血因子灭活凝血因子和和；限制因；限制因子子aa与血小板结合；增强纤维蛋白的溶解。与血小板结合；增强纤维蛋白的溶解。抗凝系统检测抗凝系统检测病理性抗凝物质的筛检试验病理性抗凝物质的筛检试验 凝血酶时间测定（凝血酶时间测定（thrombin time,TT)生理性抗凝物质的诊断试验生理性抗凝物质的诊断试验血血浆浆AT-III活性活性测测定定血浆蛋白血浆蛋白C C活性测定活性测定血浆凝血酶抗凝血酶复合物测定血浆凝血酶抗凝血酶复合物测定P303【原理原理】受检血浆中加入受检血浆中加入“标准化标准化”凝血酶后凝血酶后测定开始出现纤维蛋白丝所需要的时间。测定开始出现纤维蛋白丝所需

39、要的时间。凝血酶时间测定凝血酶时间测定（thrombin time,TT)P294凝血酶凝血酶FgFb检查抗凝物的定性试验，也可检测凝血检查抗凝物的定性试验，也可检测凝血第三阶段以及纤溶活性测定。第三阶段以及纤溶活性测定。延长：延长：抗凝物质存在抗凝物质存在:肝素或类肝素物质肝素或类肝素物质纤维蛋白原显著减少或结构异常：纤维蛋白原显著减少或结构异常：先先天性或严重肝病天性或严重肝病纤维蛋白（原）降解产物增高：纤维蛋白（原）降解产物增高：DICDIC【临床意义临床意义】生理性抗凝因子检测生理性抗凝因子检测（一）血浆（一）血浆AT-III活性测定活性测定【原理】【原理】受检血浆中加入过量凝血酶，使

40、抗凝血酶与凝血酶形成受检血浆中加入过量凝血酶，使抗凝血酶与凝血酶形成1:11:1复复合物，剩余的凝血酶作用于发色底物合物，剩余的凝血酶作用于发色底物S-2238,S-2238,释出显色基团对硝基苯胺。显释出显色基团对硝基苯胺。显色的深浅与剩余凝血酶含量与活性呈正相关，而与色的深浅与剩余凝血酶含量与活性呈正相关，而与ATAT呈负相关。呈负相关。【参考值】【参考值】发色底物法：发色底物法：108.5%108.5%5.3%5.3%【临床意义】【临床意义】1.1.增高增高 见于血友病、白血病、再障等急性出血期；见于血友病、白血病、再障等急性出血期；也可见于口服抗凝药物治疗过程中。也可见于口服抗凝药物治

41、疗过程中。2.2.减低减低 见于先天性和获得性见于先天性和获得性AT-AT-缺乏症缺乏症,后者见于血后者见于血栓前状态、血栓性疾病、栓前状态、血栓性疾病、DICDIC和肝脏疾病等和肝脏疾病等。【原理】【原理】从毒蛇液中提取的从毒蛇液中提取的protacprotac为蛋白为蛋白C C特异性的激活剂特异性的激活剂，被激活后的，被激活后的PCPC作用与特异的发色底物作用与特异的发色底物Chromozym PCAChromozym PCA，释放，释放出对硝基苯胺而显色，显色深浅与出对硝基苯胺而显色，显色深浅与PCPC：A A呈正相关关系。呈正相关关系。【参考值】【参考值】100.2%100.2%士士1

42、3.18%13.18%【临床意义】【临床意义】PC PC是一种依赖于维生素是一种依赖于维生素K K的天然的天然抗凝抗凝因子。因子。PC:A PC:A减低：见于先天性或获得性减低：见于先天性或获得性PCPC缺乏症缺乏症,后者见于后者见于DICDIC、肝病、手术后、口服抗凝剂、急性呼吸窘迫综合征肝病、手术后、口服抗凝剂、急性呼吸窘迫综合征。（二）血浆蛋白（二）血浆蛋白C C活性测定活性测定（三）血浆凝血酶抗凝血酶复合物测定（三）血浆凝血酶抗凝血酶复合物测定thrombin-antithrombin complex（TAT）【原理】【原理】用兔抗人凝血酶抗体包被酶标板，加入受检者用兔抗人凝血酶抗体包

43、被酶标板，加入受检者血浆后再加入辣根过氧化酶标记的鼠抗人血浆后再加入辣根过氧化酶标记的鼠抗人ATAT抗体后，后抗体后，后者使者使OPDOPD显色，显色的深浅与受检血浆中所含的凝血酶显色，显色的深浅与受检血浆中所含的凝血酶-抗凝血酶复合物呈正相关。抗凝血酶复合物呈正相关。【参考值】（【参考值】（1.45士士0.4）g/L【临床意义】【临床意义】反应凝血酶活性反应凝血酶活性 TAT TAT增高增高:见于急性心肌梗塞、见于急性心肌梗塞、不稳定型心绞不稳定型心绞痛、痛、DICDIC、DVTDVT、脑梗塞、急性白血病等。、脑梗塞、急性白血病等。第五节第五节纤溶活性检测纤溶活性检测P296几乎在凝血开始的

44、同时，纤维蛋白溶几乎在凝血开始的同时，纤维蛋白溶解系统也被激活。解系统也被激活。纤溶系统纤溶系统复习复习可溶性可溶性纤维蛋白纤维蛋白稳定性稳定性纤维蛋白纤维蛋白纤维纤维蛋白蛋白原原A A极附属物极附属物A A极附属物极附属物极附属物多聚体极附属物多聚体B B1-421-42X,Y,D,EX,Y,D,EB B15-2415-24X X,Y,Y,D,E,D,E,D-D-二聚体二聚体aa纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶凝血酶凝血酶FPA,FPBFPA,FPB FDP-二聚体二聚体复习复习纤溶活性检测纤溶活性检测P296筛选试验：筛选试验：1、D-二聚体二聚体定性定性试验（试验（D-D）2、纤维蛋

45、白（原）降解产物、纤维蛋白（原）降解产物定性定性试验（试验（FDP）3、优球蛋白溶解时间（、优球蛋白溶解时间（ELT）诊断试验：诊断试验：1、D-二聚体二聚体定量定量试验（试验（D-D）2、纤维蛋白（原）降解产物、纤维蛋白（原）降解产物定量定量试验（试验（FDP）3、血浆组织型纤溶酶原激活剂（、血浆组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）测定）测定4、血浆纤溶酶原激活抑制物、血浆纤溶酶原激活抑制物-1（PAI-1）活性测定）活性测定5、血浆鱼精蛋白副凝固试验（、血浆鱼精蛋白副凝固试验（3P）D-D-二聚体测定二聚体测定（D-dimer,D-D）它是交联纤维蛋白的特异性产物，它是交联纤维蛋白的特异性产物

46、，为为继发性纤溶特有的代谢物继发性纤溶特有的代谢物，其在血浆，其在血浆中浓度增高，表示纤维蛋白溶解亢进。中浓度增高，表示纤维蛋白溶解亢进。P306筛检试验筛检试验可溶性可溶性纤维蛋白纤维蛋白稳定性稳定性纤维蛋白纤维蛋白纤维纤维蛋白蛋白原原A A极附属物极附属物A A极附属物极附属物极附属物多聚体极附属物多聚体B B1-421-42X,Y,D,EX,Y,D,EB B15-2415-24X X,Y,Y,D,E,D,E,D-D-二聚体二聚体aa纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶凝血酶凝血酶FPA,FPBFPA,FPB-二聚体二聚体【方法方法】1、胶乳法、胶乳法-定性试验（筛检试验）定性试验（筛检试

47、验）2、酶免法、酶免法-定量试验（诊断试验）定量试验（诊断试验）【临床意义临床意义】纤溶活性增强的筛选、诊纤溶活性增强的筛选、诊断试验。断试验。1、是诊断是诊断DIC的重要依据的重要依据。此外，血栓性疾。此外，血栓性疾病时也升高。病时也升高。2、可作为、可作为原发性纤溶与继发性纤溶鉴别原发性纤溶与继发性纤溶鉴别的可的可靠指标，前者呈阴性或不升高，后者呈阳性或靠指标，前者呈阴性或不升高，后者呈阳性或升高。升高。3、溶栓治疗溶栓治疗的监测。的监测。筛检试验筛检试验纤维蛋白（原）降解产物检测纤维蛋白（原）降解产物检测（FDPs）纤维蛋白原降解产物和纤维蛋白降解纤维蛋白原降解产物和纤维蛋白降解产物统称

48、为纤维蛋白（原）降解产物产物统称为纤维蛋白（原）降解产物（FDPs）。）。FDPs对血液凝固和血小对血液凝固和血小板的功能均有一定的影响。板的功能均有一定的影响。P306筛检试验筛检试验可溶性可溶性纤维蛋白纤维蛋白稳定性稳定性纤维蛋白纤维蛋白纤维纤维蛋白蛋白原原A A极附属物极附属物A A极附属物极附属物极附属物多聚体极附属物多聚体B B1-421-42X,Y,D,EX,Y,D,EB B15-2415-24X X,Y,Y,D,E,D,E,D-D-二聚体二聚体aa纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶凝血酶凝血酶FPA,FPBFPA,FPB FDP-二聚体二聚体【方法方法】1、胶乳法、胶乳法-定性

49、试验（筛检试验）定性试验（筛检试验）2、酶免法、酶免法-定量试验（诊断试验）定量试验（诊断试验）【临床意义临床意义】纤溶活性增强的筛选、确诊纤溶活性增强的筛选、确诊试验。试验。1、原发性纤溶原发性纤溶 2、继发性纤溶：继发性纤溶：DIC、恶性肿瘤、急、恶性肿瘤、急性早幼粒细胞白血病、肺血栓栓塞、深性早幼粒细胞白血病、肺血栓栓塞、深静脉血栓形成、心、肝、肾疾病，溶栓静脉血栓形成、心、肝、肾疾病，溶栓治疗等所致的治疗等所致的继发性纤溶继发性纤溶亢进时亢进时FDP含含量升高。量升高。（三）优球蛋白溶解时间（三）优球蛋白溶解时间（ELTELT）【原理】【原理】血浆优球蛋白蛋白组分中含血浆优球蛋白蛋白组

50、分中含有有纤维蛋白原、纤溶酶原和组织纤维蛋白原、纤溶酶原和组织型纤溶酶原激活剂型纤溶酶原激活剂等，但不含纤等，但不含纤溶酶抑制物。受检血浆置于醋酸溶酶抑制物。受检血浆置于醋酸溶液中，使优球蛋白沉淀，经离溶液中，使优球蛋白沉淀，经离心除去纤溶抑制物，将沉淀的优心除去纤溶抑制物，将沉淀的优球蛋白溶于缓冲液中，再加入适球蛋白溶于缓冲液中，再加入适量钙溶液或凝血酶，使纤维蛋白量钙溶液或凝血酶，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，观察凝原转变为纤维蛋白凝块，观察凝块完全溶解所需时间。块完全溶解所需时间。【临床意义】【临床意义】1.1.纤维蛋白凝块在纤维蛋白凝块在70min70min内完全溶内完全溶解解,表明