结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术课件.pptx

1、世界世界新发结核病例新发结核病例2007年年 927万万 2009年年 940万万2010年年 880万万2011年年 870万万中国中国新发结核病例新发结核病例2007年年 130万万 2010年年 100万万2011年年 100万万第二节第二节 流行病特征流行病特征疫苗预防疫苗预防 BCGBCG早期诊断早期诊断 细菌学细菌学 影像学影像学 分子生物学分子生物学 免疫学免疫学 等等新药开发新药开发 一线药物一线药物 二线药物二线药物 其他其他结核病防控的三大手段结核病防控的三大手段Robert KochRobert Koch（1843-19101843-1910）18821882年发现结核分

2、枝杆菌，年发现结核分枝杆菌，19051905年获得年获得诺贝尔生理或诺贝尔生理或医学奖医学奖。Friedrich Neelsen(1854-1898)Franz Ziehl（1857-1926）Ziehl-Neelsen 染色法染色法（分枝杆菌抗酸染色的基础分枝杆菌抗酸染色的基础）应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发型超敏反应（型变态反应）的一种试验1882年发现结核分枝杆菌，1905年获得诺贝尔生理或医学奖。经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。社会因素 社会、经济、医疗服务结核感染者体内存在特异的效应T淋

3、巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）其他因素 HIV-TB，MDR/XDR-TB上世纪50年代，美国细菌学家杜博斯所写的The White Plague(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺结核，可见在当时红楼梦中林黛玉的病症已是结核病的典型症状。题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征RNA作为临床分子诊断靶标的优点初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应乳白或米黄，不透明社会因素 社会、经济、医疗服务经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应Increas

4、ed case finding of tuberculosis from sputum and sputum deposits after magnetic bead concentration of mycobacteria.硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）TB-SAT检测的敏感度和特异性结核菌素试验（OT试验）：（三）核酸分子诊断技术-Xpert MTB/RIF和TB-SAT（二）TB-Beads技术结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）快速，24小时报告结果Liu J,Sun ZQ,Pei H,et al.临床诊断常

5、常结合 痰涂片，胸片，症状和体征（二）TB-Beads技术由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）上世纪50年代，美国细菌学家杜博斯所写的The White Plague(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺结核，可见在当时红楼梦中林黛玉的病症已是结核病的典型症状。传染源 痰涂片阳性的肺结核病人标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）快速，24小时报告结果营养要求高，常用罗氏培养基感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体后来，西方的一

6、些科学家发现这类病人的肺内有一个个坚实的团块，摸上去像土豆或花生这类植物的根上块茎，就将该病称之为Tuberculosis，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。蜡质D（引起迟发性过敏反应）由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）TB-SAT检测的敏感度和特异性（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）直接镜检：抗酸染色直接镜检：抗酸染色 分离培养：培养基、

7、时间（分离培养：培养基、时间（24周后见结果）周后见结果）痰液等痰液等分离培养分离培养直接涂片直接涂片靶基因菌种鉴定16SrRNA IS611016SrRNA IS6110异烟肼katGkatG、inhAinhA、ahpCahpC、oxyRoxyR、KasAKasA、ndhndh 利福平rpoBrpoB乙胺丁醇embBembB吡嗪酰胺 pncApncA链霉素 rpsLrpsL、rrsrrs喹诺酮类药物 gyrAgyrA、gyrBgyrB 50 ul 稀释液培养鉴定结果培养鉴定结果+PCR结果结果合计合计TB-SAT检检测结果测结果阳性阳性阴性阴性阳性阳性2317238阴性阴性12318330合

8、计合计243325568-感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。郭霍现象:注射结核杆菌于豚鼠皮下蜡质D（引起迟发性过敏反应）（二）TB-Beads技术基于IGRA原理的产品目前已被美国、加拿大、英国、德国、法国、日本等二十余个国家写入本国的结核诊疗指南中经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）2007年 130万306例入伍新兵 特异性 97.临床诊

9、断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应营养要求高，常用罗氏培养基细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性（分枝杆菌抗酸染色的基础）临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征虽然说红楼梦与医学无关，但其作者笔下的“痨病”代表林黛玉却惊动全世界。Xpert MTB/RIF结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。题目题目结核分枝杆菌结核分枝杆菌及其实验室及其实验室诊断新技术诊断新技术敬请各位专家批评指正！敬请各位专家批评指正！郑州大学第一附

10、属医院检验科郑州大学第一附属医院检验科/河南省检验医学重点实验室河南省检验医学重点实验室 赵俊伟赵俊伟2015年年12月月疫苗预防疫苗预防 BCGBCG早期诊断早期诊断 细菌学细菌学 影像学影像学 分子生物学分子生物学 免疫学免疫学 等等新药开发新药开发 一线药物一线药物 二线药物二线药物 其他其他结核病防控的三大手段结核病防控的三大手段-结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发型超敏反应（型变态反应）的一种试验传染源 痰涂片阳性

11、的肺结核病人题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术其他因素 HIV-TB，MDR/XDR-TB虽然说红楼梦与医学无关，但其作者笔下的“痨病”代表林黛玉却惊动全世界。快速，24小时报告结果结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）快速，24小时报告结果Nat Med,1996,2(6):662-667.Nat Med,1996,2(6):662-667.结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）胸中气满，喘息不便，内痛引肩项，身热，脱肉破腘。属于感染免疫(infectio

12、n immunity)，又称有菌免疫306例入伍新兵 特异性 97.与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）敬请各位专家批评指正！RNA作为临床分子诊断靶标的优点（分枝杆菌抗酸染色的基础）蜡质D（引起迟发性过敏反应）其他因素 HIV-TB，MDR/XDR-TB生命力旺盛的病原体RNA转录活跃结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）（二）TB-Beads技术传染源 痰涂片阳性的肺结核病人Zhang Y,et al.准确度=(231+318)/568 100%=96.结核菌素试验（OT试验）：（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）

13、RNA远不如DNA稳定所致疾病 结核病，以肺结核常见（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.后来，西方的一些科学家发现这类病人的肺内有一个个坚实的团块，摸上去像土豆或花生这类植物的根上块茎，就将该病称之为Tuberculosis，即结节的意思，这就是结核病命名的由来。快速，24小时报告结果快速，24小时报告结果与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）2007年 927万再次注射 局部反应大 不扩散 有免疫有超敏反应（分枝杆菌抗酸染色的基础）（分枝杆菌抗酸染色的基础）敏感度=231/243100%=95.1882年发现结核分枝杆菌，1905年获得

14、诺贝尔生理或医学奖。16SrRNA IS6110Nat Med,1996,2(6):662-667.病原体死亡，RNA很快降解细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性卡介苗BCG：Calmette和Gurin 牛分枝杆菌 13年230次社会因素 社会、经济、医疗服务（分枝杆菌抗酸染色的基础）敬请各位专家批评指正！胸中气满，喘息不便，内痛引肩项，身热，脱肉破腘。Nature,1992,358(6387):591-593.特异性=318/325100%=97.结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）病原体死亡，RNA很快降解敬请各

15、位专家批评指正！结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。306例入伍新兵 特异性 97.上世纪50年代，美国细菌学家杜博斯所写的The White Plague(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺结核，可见在当时红楼梦中林黛玉的病症已是结核病的典型症状。机体抗结核免疫特点：传染、免疫、超敏反应共存以后逐渐认识到这是一种“肺痨”，其病因为“痨虫”所致。结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）RNA作为临床分子诊断靶标的优点细长略带弯曲，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性Nat Med,1996,2(6):662-667.经培养确诊

16、的结核病患者样本183例 敏感度 95.结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）Increased case finding of tuberculosis from sputum and sputum deposits after magnetic bead concentration of mycobacteria.（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多（二）TB-Beads技术应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发型超敏反应（型变态反应）的一种试验与细

17、胞表面受体结合（粘附与入侵作用）乳白或米黄，不透明（三）核酸分子诊断技术-Xpert MTB/RIF和TB-SAT含多种酶（分解利用营养物质）再次注射 局部反应大 不扩散 有免疫有超敏反应（三）核酸分子诊断技术-Xpert MTB/RIF和TB-SAT经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.1882年发现结核分枝杆菌，1905年获得诺贝尔生理或医学奖。结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）标本处理：浓缩集菌（氢氧化钠处理）感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体Nat Med,1996,2(6):662-667.R

18、NA作为临床分子诊断靶标的优点2007年 927万题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术营养要求高，常用罗氏培养基（二）TB-Beads技术临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征Nature,1992,358(6387):591-593.其他因素 HIV-TB，MDR/XDR-TB准确度=(231+318)/568 100%=96.（分枝杆菌抗酸染色的基础）结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）液体：表面生长（菌膜）结核病目前仍然是一个全球性的严重的公共卫生问题。初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应（二）TB-B

19、eads技术16SrRNA IS6110基于IGRA原理的产品目前已被美国、加拿大、英国、德国、法国、日本等二十余个国家写入本国的结核诊疗指南中题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术初次注射 局部反应小 全身扩散 无免疫无超敏反应（二）TB-Beads技术题目结核分枝杆菌及其实验室诊断新技术（3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH）结核病又称为痨病和白色瘟疫。硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验临床诊断常常结合 痰涂片，胸片，症状和体征（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验敬请各位专家批评指正！卡介苗BCG：Calmette和Gurin 牛分枝杆菌 13年

20、230次Friedrich Neelsen(1854-1898)感染方式 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入机体由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）机体抗结核免疫特点：传染、免疫、超敏反应共存耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多306例入伍新兵 特异性 97.经培养确诊的结核病患者样本183例 敏感度 95.虽然说红楼梦与医学无关，但其作者笔下的“痨病”代表林黛玉却惊动全世界。传染源 痰涂片阳性的肺结核病人结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-）RNA 拷贝数 DNA拷贝数乳白或米黄，不透明Nat Med,1996,2(6):662-667.营养要求高，常用罗氏培养基（四）蛋白分子诊断技术-干扰素释放实验1882年发现结核分枝杆菌，1905年获得诺贝尔生理或医学奖。题目题目结核分枝杆菌结核分枝杆菌及其实验室及其实验室诊断新技术诊断新技术敬请各位专家批评指正！敬请各位专家批评指正！郑州大学第一附属医院检验科郑州大学第一附属医院检验科/河南省检验医学重点实验室河南省检验医学重点实验室 赵俊伟赵俊伟2015年年12月月