临床科研选题及申请书的撰写技巧概要课件.ppt

1、临床医生科研选题及项目申请书临床医生科研选题及项目申请书撰写方法撰写方法2013年9月 xx报告提纲临床医生科研选题临床医生科研选题课题申请的技巧课题申请的技巧撰写项目申请书及注意事项撰写项目申请书及注意事项n医学的发展无时无刻不体现着科技的进步：n原始的压迫法、刮刺法、按摩法解剖、生理、病理、诊断免疫、生物合成基因诊断人类基因组计划-n对细菌、病毒感染的束手无策抗生素干扰素疫苗出现（天花的消灭）被动免疫转为主动免疫HIV疫苗的出现？-n原始的望闻问切的诊断物理检查生化检查影像学检查基因探针-n超声对人体软组织有较高的灵敏度和分辨率-CT能分辨各种密度相近的软组织-核磁共振不但能获得解剖图像，

2、还可显示组织器官的化学结构及其变化PET不仅可显示解剖还可测得功能代谢-n疾病的治疗从普通化学药物生物药物（胰岛素、白细胞介素等）基因药物n一些疾病有单纯的手术治疗-手术、放射线综合治疗一、临床医生科研选题一、临床医生科研选题科技进步是临床发展的永远动力科技进步是临床发展的永远动力n爱因斯坦指出：“提出一个问题往往比解决一个问题更重要，因为解决一个问题也许仅仅是一个数学上或实验上的技能而已。而提出新的问题，新的可能性，以新的角度去看旧的问题，却需要创造性的想象力，而且标志着科学的真正进步。”n选择课题、确定主攻方向是科学研究中具有战略意义的首要问题。应应主动申请而非被动申请（个人晋升、重点学科

3、和实验室评定等压力）n临床工作者的优势：从临床上发现问题n困难:临床工作繁忙、难以保证查文献、选准科学问题及写好申请书，缺乏与基础学科等沟通、交叉合作，较难中标为什么申请？为什么申请？科研选题的原则科研选题的原则n1、需要性原则：选择有重大意义或急需解决的问题。n2、目的性原则：目标集中，不含糊，不笼统。n3、创新性原则：针对科学而言，没有地域性。n4、先进性原则：针对技术而言，有地域性。n5、科学性原则：有依据；符合客观规律；设计科学。n6、可行性原则：主要技术指标实现的可能性。n7、效能性原则：社会效益、经济效益、应用价值等。临床医生如何选题临床医生如何选题n课题的概念：为探索医学领域中的

4、某个具体的理 论、方法或技术问题，根据假说随机设计的旨在说明 三要素（受试对象、施加因素、效应结果）及其相互 关系并在一定时间内实现设计目标的最基本的单元。n课题最基本的特征是的探索，其指向是具体的理论、方法或技术问题；n课题要根据假说、经过设计；n课题的核心是要说明三要素及其相互关系n课题是有时空观念的，即有边界、有期限的。选题的基本程序选题的基本程序n提出问题：A、问题通常产生于观察与理论之间的矛盾；B、问题产生于怀疑精神与科学的创造性思维的结论；C、根据生产和实际需要提出问题。医学课题属此类。n查阅文献，提出假说：建立假说是科研工作的前提和灵魂；假说要以科学的实验为依据，在此基础上要敢于

5、大胆设想。n确定题目：体现三要素；体现假说内容；留有余地；言简意赅，用词具体；25个汉字，不用缩写。n提出科研设计：专业设计；统计学设计。选题的基本方法选题的基本方法nA、同步选择法：与科技发展前沿、主流同步；nB、阶段分析选择法：根据学科发展不同阶段；nC、交叉点选择法：不同学科的交叉点；nD、移植选择法：将某学科方法移植到另一学科；nE、机遇线索捕捉法：偶然发现、思想火花等；nF、经验转移选择法：用解决某问题的经验去解决另一问题；nG、适应需要选择法：nH、缺点列举选择法：选题的注意事项选题的注意事项n以往存在的选题问题：缺乏创新、选题过大或意义不大 选题缺乏创新性问题占未获立项或资助的7

6、0左右n选题后需要检验：选题是否有创新性 研究的基本价值 能否在3年的时间内完成这些工作。查新是较好的验题选择 也可以与同行或相关领域的科学家讨论 选题是一个过程，是一个经过较长时间思考的过程，需要经历较长时阅读文献、听报告、讨论 选题后要仔细确定题目选题后要仔细确定题目n题目应准确恰当、简明具体、醒目规范、主题明了。n题目是申请者对评议专家说的第一句话：n题目的两个作用:一是要给评议专家一个简明、准确的信息 二是有助于文献追踪或检索。撰写课题申请书及注意事项撰写课题申请书及注意事项一、简表的填写一、简表的填写（1 1）项目名称项目名称 英文名称应与中文名称一致。英文名称应与中文名称一致。（2

7、 2）研究类型研究类型 是指研究课题的性质，包括是指研究课题的性质，包括基础研究、应用基础研究基础研究、应用基础研究。基础研究：。基础研究：指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标 的研究活动。应用基础研究：指有广泛应用前景，但以获取新原的研究活动。应用基础研究：指有广泛应用前景，但以获取新原 理、新技术、新立法为主要目的的研究。理、新技术、新立法为主要目的的研究。（3 3）申报学科申报学科 应填写申请项目所属的最基础学科，即申请指南中所列学科的应填写申请项目所属的最基础学科，即申请指南中所列学科的 末级学科。如涉及多学科

8、可填写两个，以名称末级学科。如涉及多学科可填写两个，以名称1 1为主，名称为主，名称2 2为辅为辅。（4 4）申请金额申请金额 以万元为单位以万元为单位,用阿拉伯数字表示用阿拉伯数字表示,注意小数点。注意小数点。（5 5）起止年月起止年月 研究年限一般为研究年限一般为3-53-5年。年。起始时间从申请的次年起始时间从申请的次年1 1月算起，终止时间为完成年度的月算起，终止时间为完成年度的1212月。月。（6 6）基地类别基地类别 指研究项目将利用的实验室，国家、省、市部门批准的实验室。指研究项目将利用的实验室，国家、省、市部门批准的实验室。一、简表的填写一、简表的填写（7 7）摘 要 应该包括

9、该研究目的、重要性、内容及其方法，预期结果、理论意义及应用前景等，重点突出申请者的新见解。对字数要求400字内。主题词用分号隔开，不超过5个。中英文主题词应一致。（摘要：针对-现状，提出-假说，用-方法 进行研究，探索-问题，对阐明-机制/揭示-规律具有意义。摘要示例摘要示例基金题目：基于livin介导的胶质瘤干细胞抗凋亡通路与化疗耐药机制 摘要：申请者在既往研究中，发现livin 基因介导的抗凋亡通路与胶质瘤化疗耐药之间关系密切，但查阅大量国内外相关文献，尚未见到对此机制的系统研究报道。课题组依据先前的试验结果和国内外同行专家研究肿瘤干细胞化疗耐药的理论推断，胶质瘤干细胞通过Livin基因过

10、表达关闭抗凋亡诱导通路，阻断死亡信号转导，导致胶质瘤的化疗耐药。为了验证上述推论，课题组拟建立胶质瘤干细胞转化模型和胶质瘤干细胞动物转化模型，采用慢病毒过表达、RNA 干扰、实时荧光定量RT-PCR 和化疗药物干预等技术和手段，对胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞U251进行干预，探明Livin介导的抗凋亡诱导通路，分析化疗药物干预对livin抗凋亡通路相关基因和化疗耐药基因的影响及其机制，进而从肿瘤干细胞理论角度揭示肿瘤耐药的根源，丰富和发展肿瘤干细胞理论，为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法，并为攻克胶质瘤的化疗耐药治疗难关奠定坚实的理论和实验基础。撰写课题申请书及注意事项撰写课题申请书及注意事项二、项

11、目主要成员二、项目主要成员（1 1）项目组主要成员项目组主要成员 指在项目组内对学术思想、技术路指在项目组内对学术思想、技术路 线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人 员（不包括项目申请者）。重点重大项目组成员可根员（不包括项目申请者）。重点重大项目组成员可根 据具体研究内容多少配备，而一般项目组成员宜在据具体研究内容多少配备，而一般项目组成员宜在 3 38 8人左右。人左右。（2 2）项目中的分工项目中的分工 指项目组成员具体承担的工作和时间。指项目组成员具体承担的工作和时间。（3 3）签章签章 项目组成员本人应在申请书上亲笔签名。项目组

12、成员本人应在申请书上亲笔签名。撰写课题申请书及注意事项撰写课题申请书及注意事项成员填写注意以下几点成员填写注意以下几点1 1、项目组成员必须形成合理梯队，既有设计指导者，又有、项目组成员必须形成合理梯队，既有设计指导者，又有 工作的主要操作者，还应有必要的辅助人员，分工必须工作的主要操作者，还应有必要的辅助人员，分工必须 明确，工作不互相重复。明确，工作不互相重复。2 2、项目分工中应写明承担工作的名称，如、项目分工中应写明承担工作的名称，如“动物饲养动物饲养”、“膜片钳技术膜片钳技术”等，而不要只填等，而不要只填“负责负责”或或“参加参加”、“参与参与”。3 3、高、高中初中初级职称人员级职

13、称人员搭配合理搭配合理。撰写课题申请书及注意事项撰写课题申请书及注意事项三、经费预算三、经费预算（一）研究经费（一）研究经费1 1、科研业务费、科研业务费 主要指测试、计算、分析费；国内调研和参加学术会议费；论主要指测试、计算、分析费；国内调研和参加学术会议费；论 文印刷、出版费；仪器有偿使用费；水、电、气费。文印刷、出版费；仪器有偿使用费；水、电、气费。2 2、实验材料费、实验材料费 指原材料、试剂、药品等消耗品购置费；实验用动植物购置和指原材料、试剂、药品等消耗品购置费；实验用动植物购置和 种植、饲养费。标本、样品、模型采集加工、包装运输费等。种植、饲养费。标本、样品、模型采集加工、包装运

14、输费等。3 3、仪器设备费、仪器设备费 项目中专用仪器设备的购置、运输、安装费；自制专用仪器设项目中专用仪器设备的购置、运输、安装费；自制专用仪器设 备的材料、配件购置和加工费。大型仪器、较昂贵的仪器和行政办公设备不备的材料、配件购置和加工费。大型仪器、较昂贵的仪器和行政办公设备不 属其列。属其列。4 4、实验室改装费、实验室改装费 为改善资助项目研究的实验条件而对实验室进行的简易改装为改善资助项目研究的实验条件而对实验室进行的简易改装 所需费用。不得将实验室扩建、土建、维修等费用列入其中。所需费用。不得将实验室扩建、土建、维修等费用列入其中。5 5、协作费、协作费 指外单位协作承担项目的研究

15、在实验工作中开支的实验经费。指外单位协作承担项目的研究在实验工作中开支的实验经费。撰写课题申请书及注意事项撰写课题申请书及注意事项三、经费预算三、经费预算（二）国际合作与交流费（二）国际合作与交流费1 1、项目组成员出国合作交流、项目组成员出国合作交流 按国家标准计算花费按国家标准计算花费2 2、境外专家来华合作交流、境外专家来华合作交流 负责往返机票及吃住补助负责往返机票及吃住补助（三）劳务费（三）劳务费 不超过总经费的不超过总经费的10%10%。（四）管理费（四）管理费 按总经费的按总经费的5%5%计算。计算。报告正文报告正文（4000-8000字）字）四、四、立立项项依依据据 n你的研究

16、工作将会在理论或实际应用中解决什么问题，将会给本领域贡献什么，增加哪些新的认识，对学术理论或国民经济和社会发展起到什么样的作用及具有多大价值。n基础研究项目重在结合国际上本学科领域的发展动态，论述项目的科学意义及创新的学术思想；应用基础研究项目重在结合学科发展的同时，围绕我国国民经济和社会发展中重要科技问题，论述其潜在的应用前景。报告正文报告正文（4000-8000字）字）四、四、立立项项依依据据 n重点突出有根有据、段落分明论点清楚、参考文献选择得当。n要介绍国外动态及国内研究情况包括自己的工作，填补空白不是立项依据，也不能简单罗列文献。n因立项依据不足而未获立项或资助者占总项目的60左右报

17、告正文报告正文四、四、立立项项依依据据 列出引用的主要文献，文献数量不要过多，列出引用的主要文献，文献数量不要过多，一般控制在一般控制在10102020条左右为宜。引用文条左右为宜。引用文献一定要按正式发表论文的要求，正确标明献一定要按正式发表论文的要求，正确标明引用作者顺序、年、卷、期、页，以免评审引用作者顺序、年、卷、期、页，以免评审专家核查不到此文献时，会对申请者产生专家核查不到此文献时，会对申请者产生“弄虚作假弄虚作假”的误会。引用文献应涵盖国内的误会。引用文献应涵盖国内外文献，也可引用自己的文章，但不宜过多。外文献，也可引用自己的文章，但不宜过多。引用文献应是近引用文献应是近1010

18、年内的文献，特别是年内的文献，特别是3 35 5年的文献。年的文献。报告正文报告正文立立项项依依据据注注意意事事项项1 1、格式清晰、逻辑合理。能让评议专家对你要阐明的项目研格式清晰、逻辑合理。能让评议专家对你要阐明的项目研究意义、国内外研究现状和研究目标一目了然。对研究意义究意义、国内外研究现状和研究目标一目了然。对研究意义的叙述要简明扼要，叙述恰当，是的叙述要简明扼要，叙述恰当，是“填补空白填补空白”、“国内首国内首创创”，还是，还是“国际领先国际领先”，用语一定要谨慎，实事求是。，用语一定要谨慎，实事求是。2 2、对国内外研究现状的分析要全面、透彻；对提出的研究目对国内外研究现状的分析要

19、全面、透彻；对提出的研究目标要合理、适当，避免太分散。标要合理、适当，避免太分散。3 3、对理论依据的推测和假设必须严谨、科学，特别是对创新对理论依据的推测和假设必须严谨、科学，特别是对创新性内容的提出和分析，必须考虑到其理由的充分和合理。性内容的提出和分析，必须考虑到其理由的充分和合理。4 4、语言要科学、准确，切忌含糊。语言要科学、准确，切忌含糊。5 5、设立小标题，分段渐进，环环相扣，可读性要强。设立小标题，分段渐进，环环相扣，可读性要强。6 6、注意是否有当年发表的相关进展的文章。注意是否有当年发表的相关进展的文章。7 7、文字要充分校对，包括参考文献的格式。文字要充分校对，包括参考文

20、献的格式。报告正文报告正文项项目目研研究究意意义义撰撰写写方方法法1 1、存在问题：对科学意义阐述不足或夸大。2、撰写方法：从疾病入手，简述其特点、危害，目前主要的治疗方法及其存在的问题。简要分析该病发病机理和主要研究热点，引出目前存在的主要问题，也就是本项目要解决的问题，以此为切入点提出假设，阐述如果实现预期目标，对该病甚至相关疾病的预防、治疗具有的理论意义和临床价值。报告正文报告正文 老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类第一位的致盲疾病。迄今为止,治疗白内障唯一有效的方法是通过手术摘除混浊

21、的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的发病时间延缓10年，白内障手术的数量就会减少45%1。所以，一些学者认为通过预防白内障发生或延缓其发展的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济问题2。项项目目研研究究意意义义撰撰写写方方法法报告正文报告正文 但是目前我们对老年性白内障发病机理的认识还不十分清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。

22、如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。项项目目研研究究意意义义撰撰写写方方法法存在问题：存在问题：文献复习不够，对国内外现状缺乏真正了解，提出的问题文献复习不够，对国内外现状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决别人已解决-低水平重复。低水平重复。对研究

23、方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，缺乏实际应对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性用的可行性-无法实现预期目标。无法实现预期目标。-已有方法与掌握方法的人的结合；已有方法与掌握方法的人的结合；-方法理论上可行与现实可行性的结合。方法理论上可行与现实可行性的结合。对国内外现状只是简单罗列，缺乏归纳分析，缺乏逻辑性对国内外现状只是简单罗列，缺乏归纳分析，缺乏逻辑性和针对性和针对性-总结与表达不够。总结与表达不够。综述撰写方法国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）要紧紧围绕本次申请项目的主题。要紧紧围绕本次申请项目的主题。1、从疾病切入，简要论述国内外研究成果，、从疾病切

24、入，简要论述国内外研究成果，并引出当前的热点研究方向。并引出当前的热点研究方向。2、从研究方向展开，较详细地分析国内外在、从研究方向展开，较详细地分析国内外在本方向的研究进展，引出阐明疾病发病机理或发明本方向的研究进展，引出阐明疾病发病机理或发明新的治疗方法的关键问题所在。新的治疗方法的关键问题所在。3、围绕关键问题，详细论述国内外以往的研、围绕关键问题，详细论述国内外以往的研究结果、当前的现状及今后的发展趋势。综合分析究结果、当前的现状及今后的发展趋势。综合分析后提出目前尚未解决的问题。后提出目前尚未解决的问题。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）综述撰写方法4 4、对拟采用的技术方

25、法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于本研究成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于本研究的依据。的依据。新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研究新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研究的理论依据和实验依据。的理论依据和实验依据。要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技术方法要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技术方法的原理、流程及在实际应用中可能出现的问题要十分清的原理、流程及在实际应用中可能出现的问题要十分清楚，绝不能是一种简单的移植。楚，绝不能是一种简单的移植。例如：单链抗体例如：单链抗体+功能基团，理论上可以实现融合

26、，功能基团，理论上可以实现融合，但存在但存在“活性、表达载体选择、纯化活性、表达载体选择、纯化”等问题。等问题。5 5、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。障的发生机理。就致病的环境因素讲，就致病的环境因素讲，氧化因氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。年性白内障的发生有关。就研究的部位分，就研究的

27、部位分，晶晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的膜下单层的晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞在白内障的形成中在白内障的形成中的变化更引人关注。的变化更引人关注。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n因为因为晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一

28、、对称的结构，对维持晶状体的透明晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，起重要作用。不仅如此，晶状体上皮细胞还是晶晶状体上皮细胞还是晶状体中受外来刺激影响较早的部位，状体中受外来刺激影响较早的部位，已有研究证已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生退行性实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异3-5 3-5。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）体外实

29、验也证实体外实验也证实多种因素多种因素(H2O2(H2O2、UV-BUV-B、晶、晶状体蛋白的自身抗体状体蛋白的自身抗体)诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节6-86-8。因此，因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题。在，也是有待我们深入研究的问题。国内外现状分

30、析（综述）国内外现状分析（综述）n白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶状白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，包括基因的和非基因的随机变化互作用的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的改变。目前，国内外对白内异性多种基因表达的改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：障相关基因的研究主要以下三方面：国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n一是对体外培养的晶状体白内障模型及上

31、皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究。研究。UV-BUV-B辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是主要的靶细胞，其胞是主要的靶细胞，其Na-K-ATPNa-K-ATP酶的活性增加，酶的活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有其中有c-fosc-fos基因的表达增加；还有组蛋白基因的表达增加；还有组蛋白H4H4、H3 H3 的低表达的低表达 和蛋白酶和蛋白酶C C、-肌动蛋白、肌动蛋白、-肌动蛋白基肌动蛋白基因的高表达因的高表达9-129-12。CarperCarper等等131

32、3利用利用RT-PCR-RT-PCR-DD(reverseDD(reverse transcription-polymerase chain transcription-polymerase chain reaction differential display)reaction differential display)技术研究技术研究H2O2H2O2诱导诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示NADHNADH脱氢酶脱氢酶4 4亚基、细胞色素亚基、细胞色素b b、谷氨酰胺转移酶基因表、谷氨酰胺转移酶基因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子达减少以

33、及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 2（alternative splicing factoralternative splicing factor）、）、-三羟基异丁酰三羟基异丁酰辅酶辅酶A A水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因（vimentinvimentin）、杂交的）、杂交的型中间纤维蛋白基因的型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状白内

34、障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制体纤维细胞分化受抑制14,1514,15。GongGong等等1616报告报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白33（3 3 ConnexinConnexin）基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（knockout mouseknockout mouse）在晶状体形成）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。虽然体外实验晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与和白内障转基因小鼠都提示我们一

35、些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Lee17Lee17利用利用RT-PCRRT-PCR技术研究显示前极性白内技术研究显示前极性白内障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、I I型型胶原纤维、胶原纤维、-平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、TGF-1TGF-1、TGF-2TGF-2、TGF-TGF-型受体、结缔

36、组织生长因子的基因表型受体、结缔组织生长因子的基因表达有差异。达有差异。KantorowKantorow等等1818利用利用RT-PCR-DDRT-PCR-DD研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的初步结果是老年性白内障有三个高异性表达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和表达基因和1212个低表达的基因。但就个低表达的基因。但就DD-PCRDD-PCR技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长以及克隆全长cDNAcDNA的问题。的问题。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）上述三方

37、面的研究均取得了不同程度的研究结上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。明与白内障相关的基因及其功能。寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内障的皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。发病机理。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（subtractive hybridization,SHsubtractive h

38、ybridization,SH），它是），它是，但，但是实验操作复杂。是实验操作复杂。经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交（suppression suppression subtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSH是是DiatchenkoDiatchenko等等19961996年建立的方法）年建立的方法）简化了实验操作，但仍然问简化了实验操作，但仍然问题很多。题很多。我校生化教研室我校生化教研室建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术1919，2020，其其特点是：特点是：简便易行，能够获得目的细胞特

39、异表达的全简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。长基因，对低丰度基因也能有效分离。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中特异表达的基因，其中5 5个为新基因。同理，利用此个为新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全正常晶状体上皮细胞间差异

40、表达的基因，并克隆到全长长cDNAcDNA，为进一步的结构和功能研究打下基础。，为进一步的结构和功能研究打下基础。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知未知DNADNA分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。基基因芯片是在因芯片是在19961996年被提出并开始研制的，该年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的技术是将成千上万的DNADNA探针集中到探针集中到1 1厘米见厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，方的基片上，利用碱基互补原理，DNADNA探针探针中的已知碱基序列与被测定的未知

41、中的已知碱基序列与被测定的未知DNADNA分子分子杂交后由标记分子标记杂交体，经自动阅读设杂交后由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，备分析杂交结果，从而对检测基因进行定性、从而对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知定量和结构分析，确定未知DNADNA分子。分子。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建立有基因建立cDNAcDNA文库，再利用基因芯片技术文库，再利用基因芯片技术制备制备成基因

42、芯片，成基因芯片，以此以此检测多个样本中白内障晶状体上检测多个样本中白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，从中从中进一步筛选出白内障特异的基因，进一步筛选出白内障特异的基因，它们中可能它们中可能有已知基因，也可能有未知基因。通过以上两种技有已知基因，也可能有未知基因。通过以上两种技术的有机结合，我们能更快捷、有效、准确地得到术的有机结合，我们能更快捷、有效、准确地得到白内障相关基因白内障相关基因国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）n综上所述，分子生物学技术的发展为研究白综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障发生过程中的

43、功能基因及特异调控基因内障发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武器。提供了有利武器。本项目从晶状体上皮细胞本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减杂交技术和基因芯片入手，利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基因，并采用技术系统研究与白内障相关的基因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的基对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障形成中的作用，可望阐明白内障晶状白内障形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化的分子生物学机制，为防治体上皮细胞变化的分子生物学机制，为防治白内障提

44、供新的思路和理论依据。白内障提供新的思路和理论依据。国内外现状分析（综述）国内外现状分析（综述）报告正文报告正文五、五、项目的研究内容、研究目标项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题以及拟解决的关键科学问题1、研究目标、研究目标 即通过研究要达到的具体目的，是项目申请的精即通过研究要达到的具体目的，是项目申请的精髓。这段内容主要是阐述通过本课题研究将达到什么目标，其髓。这段内容主要是阐述通过本课题研究将达到什么目标，其理论意义，学术价值，直接或潜在的应价值以及可能产生的社理论意义，学术价值，直接或潜在的应价值以及可能产生的社会和经济效益。会和经济效益。注意事项：注意事项：目标要具体

45、，不要太大、太空。目标要具体，不要太大、太空。有些与成果混淆，如获什么奖，发多少论文等。有些与成果混淆，如获什么奖，发多少论文等。目标不宜太多，目标不宜太多，24个足矣。个足矣。报告正文报告正文五、五、项目的研究内容、研究目标项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题以及拟解决的关键科学问题 2 2、研究内容、研究内容 包括课题研究的范围、内容和可供考核的指标等。要包括课题研究的范围、内容和可供考核的指标等。要求内容具体、完整、紧扣主题，使评审者了解拟做哪些工作，是否求内容具体、完整、紧扣主题，使评审者了解拟做哪些工作，是否值得做，这样做是否能达到申请者提出的目标。值得做，这样做是否能

46、达到申请者提出的目标。注意事项：注意事项：你准备从哪几个方面的研究来论证你提出的问题，即本课题由哪些你准备从哪几个方面的研究来论证你提出的问题，即本课题由哪些分题深入扩展。分题深入扩展。明确从哪个角度、哪些范围、哪个水平进行研究。明确从哪个角度、哪些范围、哪个水平进行研究。每个方面或分题计划选择什么样的可供考核的技术或经济指标。每个方面或分题计划选择什么样的可供考核的技术或经济指标。不要写成方法。不要写成方法。报告正文报告正文3 3、拟解决的关键科学问题、拟解决的关键科学问题 即整个研究要解决的主要科学问即整个研究要解决的主要科学问题，而这个问题是值得研究解决的。题，而这个问题是值得研究解决的

47、。注意事项：注意事项：要提炼出科学问题来。要提炼出科学问题来。关键科学问题和关键技术不能等同起来。关键科学问题和关键技术不能等同起来。列出的关键科学问题要能通过本研究得以解决。列出的关键科学问题要能通过本研究得以解决。五、五、项目的研究内容、研究目标项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题以及拟解决的关键科学问题报告正文报告正文六、拟采取的研究方案及可行性分析六、拟采取的研究方案及可行性分析 1 1、实验方法、实验方法 根据实验内容分段说明：实验名称、所用仪器根据实验内容分段说明：实验名称、所用仪器名称，具体实验方法的依据、制剂名称、剂量，明确处理因名称，具体实验方法的依据、制剂名称

48、、剂量，明确处理因素的数目、水平和强度，并探讨因素素的数目、水平和强度，并探讨因素“相互关系相互关系”，实验条，实验条件、操作程序和步骤、中间质控标准、实验数据的处理。件、操作程序和步骤、中间质控标准、实验数据的处理。注意事项：注意事项：要适度的详细，尤其不是通用方法。要适度的详细，尤其不是通用方法。要与技术路线一致，分步进行。要与技术路线一致，分步进行。尽可能地应用先进技术手段和方法。尽可能地应用先进技术手段和方法。报告正文报告正文六、拟采取的研究方案及可行性分析六、拟采取的研究方案及可行性分析 2 2、技术路线、技术路线 指具体实验中的技术路线及进行实验的程序指具体实验中的技术路线及进行实

49、验的程序和操作步骤。按实验过程依次摘要叙述，每一步骤关键点和操作步骤。按实验过程依次摘要叙述，每一步骤关键点要讲清楚，要具有可操作性。医药制剂和药物的合成等要要讲清楚，要具有可操作性。医药制剂和药物的合成等要注明主要工艺流程路线和框图。对于步骤明确、连贯，相注明主要工艺流程路线和框图。对于步骤明确、连贯，相互关系紧密的技术路线的书写也可采用流程图或示意图，互关系紧密的技术路线的书写也可采用流程图或示意图，其中要说明可能遇到的问题和解决办法。其中要说明可能遇到的问题和解决办法。注意事项：注意事项：技术路线要清晰，简练。技术路线要清晰，简练。要与研究内容一致，把内容串起来。要与研究内容一致，把内容

50、串起来。“按一般人的了解，此技术路线是行不通的按一般人的了解，此技术路线是行不通的”或或“前人曾前人曾经经使用并遇到挫折而放弃的使用并遇到挫折而放弃的”部分，却是申请者的独到之处时，部分，却是申请者的独到之处时，申请者必须表明自己的学术思想，提出处理和解决的措施。申请者必须表明自己的学术思想，提出处理和解决的措施。胶质瘤胶质瘤U251细胞及其干细胞培养细胞及其干细胞培养过表达细胞模型过表达细胞模型自然表达细胞模型自然表达细胞模型不表达细胞模型不表达细胞模型livin慢病毒载体感染化疗药物干预化疗药物不干预基因水平测定基因水平测定细胞毒性测定细胞毒性测定细胞周期变化细胞周期变化过表达动物模型过表