血小板抗原抗体检测及其临床应用检验科最全课件.ppt
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- 血小板 抗原 抗体 检测 及其 临床 应用 检验 科最全 课件
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1、血小板抗原抗体检测及其临床应用检血小板抗原抗体检测及其临床应用检验科验科010203目 录/contents血小板抗血小板抗原原血小板抗体与疾血小板抗体与疾病病血小板抗体检测的意义和临床应血小板抗体检测的意义和临床应用用血小板简介血小板简介血小板:血小板:D:2-5umD:2-5um V:V:红细胞红细胞*1/51/5功能:促进止血和加速凝血功能:促进止血和加速凝血正常范围:正常范围:100-300100-30010109 9/L/L骨髓干细胞骨髓干细胞胞质块脱落胞质块脱落来源来源:多功能祖细胞多功能祖细胞巨核祖细胞巨核祖细胞幼巨核细胞幼巨核细胞巨核细胞巨核细胞血小板血小板血小板形态血小板形态
2、静息状态静息状态活化状态活化状态血小板抗原血小板抗原l血小板血小板“非特异性非特异性”抗原抗原l血小板血小板“特异性特异性”抗原抗原 HPAHPA抗原抗原 HLA-HLA-类抗原类抗原 ABHABH抗原抗原l主要存在于血小板膜的主要存在于血小板膜的GPGP分子上,也少量存分子上,也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。胞。l19901990年国际输血协会血小板免疫学工作组提年国际输血协会血小板免疫学工作组提出了出了HPAHPA命名,以发现的时间顺序排列:命名,以发现的时间顺序排列:HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、HPA-3HPA-
3、3等系统。等系统。HPAHPA抗原抗原l已确定了已确定了3333个个HPAHPA,其中,其中12 12 个抗原为双等位基因表个抗原为双等位基因表达(达(HPA-1,-2,-3,-4HPA-1,-2,-3,-4,-5-5和和-15-15)。其中高频率抗原命)。其中高频率抗原命名名a a,低频率抗原命名,低频率抗原命名b b。其余。其余2121个抗原为低频率抗原,个抗原为低频率抗原,尚未发现对偶抗原,命名为尚未发现对偶抗原,命名为bwbw。l单核苷酸多态性(单核苷酸多态性(SNPSNP):33:33个个HPAHPA中均已搞清楚基因中均已搞清楚基因背景,其中背景,其中3232个个HPAHPA的多态性
4、型是由一个氨基酸置换所的多态性型是由一个氨基酸置换所致,而这又是由编码血小板膜糖蛋白(致,而这又是由编码血小板膜糖蛋白(GPGP)基因的一)基因的一个核苷酸的不同所致。个核苷酸的不同所致。lHPA-14bwHPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在生在 AAG1929-31AAG1929-31。HPAHPA抗原抗原HPAHPA抗原抗原HPAHPA抗原抗原血小板抗原定型血小板抗原定型u血清学定型血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点:特异性抗体来源困难缺点:特异性抗体来源困难 -人血清中血小板抗体通
5、常为多特异性人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏,目前国际上仅有单克隆抗体匮乏,目前国际上仅有HPA-1aHPA-1a单抗,单抗,无其它无其它HPAHPA单抗。单抗。u基因定型基因定型限制性片段长度多态性分析(限制性片段长度多态性分析(RFLPRFLP)序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSPPCR-SSP)用途:(1 1)健康人群)健康人群HPAHPA基因分型,建立已知基因分型,建立已知HPAHPA基因型的血小板献血员库。基因型的血小板献血员库。(2 2)
6、检测受者)检测受者HPAHPA基因型,以便从血小板献血员库中寻找与其基因型,以便从血小板献血员库中寻找与其HPAHPA基因型相基因型相 匹配的血小板供者。匹配的血小板供者。(3 3)检测患者)检测患者HPAHPA基因型,辅助临床胎儿基因型,辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输新生儿免疫性血小板减少症、输 血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。(4 4)对特定区域或种族人群)对特定区域或种族人群HPAHPA基因分型,可为人类遗传学研究提供相关基因分型,可为人类遗传学研究提供相关 资料和证资料和证据据。1aa2aa3ab4aa5aa6aa7a
7、a8aa9aa10aa11aa12aa13aa14aa15ab16aa17aa血小板抗原定型血小板抗原定型血小板抗体的产生方式血小板抗体的产生方式 以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应抗原结合,导致血小板被内皮网状系统清除。的相应抗原结合,导致血小板被内皮网状系统清除。怀孕怀孕移植(骨髓、器官)移植(骨髓、器官)药物、自身免疫药物、自身免疫输血小板、红细胞(尤其输血小板、红细胞(尤其是没有滤白的红细胞)是没有滤白的红细胞)血小板抗体与部分相关疾病血小板抗体与部分相关疾病 抗抗 体体分分 类类疾疾 病病HLA/HPA HLA/HPA 抗抗 体体其其
8、它它 抗抗 体体同同 种种抗抗 体体格兰茨曼血小板功能格兰茨曼血小板功能不全病不全病抗抗GPb/aPb/a抗体抗体同同 种种 异异体体 抗抗 体体新生儿同种异体免疫新生儿同种异体免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA1a(78%),HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36血小板输注无效症血小板输注无效症HLA-I抗体抗体5080%,HPA1725%(日本人为日本人为HPA-2b),HPA-15,anti-CD36极少数为极少数为ABO抗体抗体血小板输血后紫癜血小板输血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3
9、b,HPA-15,anti-CD36少数为抗少数为抗GPIa/IIa抗体抗体被动同种异体免疫被动同种异体免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA-1a,HPA-5b移植相关同种异体移植相关同种异体免疫性血小板减少症免疫性血小板减少症HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自自 身身抗抗 体体自发性血小板减少症自发性血小板减少症多数位于多数位于GPb/ab/aGPIb/IX/VIb/IX/V,少数位于,少数位于GPIV/V IV/V 和和 GPIa/IIaGPIa/IIa继发于母体自发性继发于母体自发性血小板减少症血小板减少症同上同上药物依药物依赖性抗赖性抗体体奎宁奎宁/奎尼丁抗体奎尼丁抗体所致疾病
10、所致疾病抗原位于抗原位于GPb/ab/a和和GPIb/IXIb/IX肝素抗体所致疾病肝素抗体所致疾病抗原表位是抗原表位是PF4胎盘屏障胎盘屏障Y YY YY YY Y母体同种异体抗母体同种异体抗体通过胎盘体通过胎盘母体同种异体免疫胎儿血小板减少举例举例NAITNAITNAITl胎母同种异体免疫血小板减少症(胎母同种异体免疫血小板减少症(fetomaternal alloimmune fetomaternal alloimmune thrombocytopeniathrombocytopenia,FMAITFMAIT)致病机理与新生儿溶血病()致病机理与新生儿溶血病(HDNHDN)相似,前者是由
11、胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症,相似,前者是由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症,后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。l由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生IgGIgG型的抗血型的抗血小板抗体,该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原小板抗体,该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原的血小板结合,此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使的血小板结合,此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使得胎儿血小板减少,得胎儿血小板减少,出现瘀点和瘀斑,其严重者会导致神经系出现瘀点和瘀斑,其严重者
12、会导致神经系统损伤(占已报道病例的统损伤(占已报道病例的20%20%)、)、10%10%出现颅内出血出现颅内出血(死亡率近死亡率近100%100%)。)。l因多数病例在出生后才得以诊断,故此病也称作新生儿同种异因多数病例在出生后才得以诊断,故此病也称作新生儿同种异体免疫血小板减少症。体免疫血小板减少症。l初次初次妊娠妇女即可发生妊娠妇女即可发生FMAITFMAIT,其发病率大约为,其发病率大约为1/800-15001/800-1500 。lFMAITFMAIT患儿病情变化较大,具有自限性,常在出生后患儿病情变化较大,具有自限性,常在出生后 2-32-3周恢复。周恢复。l轻度血小板减少患儿有时没
13、有任何临床症状。病情较重患儿轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿 临床表现为皮肤、体内外黏膜出血,出现紫癜、瘀点或瘀斑。临床表现为皮肤、体内外黏膜出血,出现紫癜、瘀点或瘀斑。l严重患儿可能发生颅内出血(严重患儿可能发生颅内出血(intracranial haemorrhageintracranial haemorrhage,ICH ICH),占),占10%10%。l与与FMAITFMAIT相关的相关的ICHICH 80%80%发生在子宫内,其中发生在子宫内,其中14%14%发生在妊娠发生在妊娠20 20 周前,周前,28%28%发生在妊娠发生在妊娠3030周前。周前。NAITN
14、AIT临床表现临床表现l母体血清母体血清抗抗HPAHPA抗体检测抗体检测,然而母体抗体水平到,然而母体抗体水平到预产期时逐渐下降,约有预产期时逐渐下降,约有30%30%的病例抗体阴性。的病例抗体阴性。l父母双亲的父母双亲的HPAHPA基因检测基因检测,在高加索地区采取对,在高加索地区采取对其其HPA-1HPA-1和和HPA-5HPA-5基因检测,而在亚洲地区应考虑进基因检测,而在亚洲地区应考虑进行行HPA-4HPA-4和和HPA-5HPA-5基因检测。基因检测。l父母双亲父母双亲交叉配型实验交叉配型实验,将母体血清与父亲血小,将母体血清与父亲血小板进行交叉配型实验,即使不能确切知道不相合的板进
15、行交叉配型实验,即使不能确切知道不相合的抗原,但这种方法也能发现母体是否存在血小板同抗原,但这种方法也能发现母体是否存在血小板同种异体免疫反应种异体免疫反应。NAITNAIT早期诊断与筛查早期诊断与筛查NAITNAITNAITNAIT血小板抗体检测常用方法血小板抗体检测常用方法功能性功能性试验试验酶标法酶标法荧光法荧光法固相凝集法固相凝集法应用应用范围范围抗体检测抗体检测交叉配型交叉配型性能性能灵敏度灵敏度低低高高极高极高高高特异性特异性不好不好好好一般一般较好较好反应时间反应时间长长2h2h2h2h1h1h所用仪器所用仪器不定不定酶标仪酶标仪荧光显微镜荧光显微镜或流式细胞仪或流式细胞仪全自动
16、设备,半自全自动设备,半自动设备动设备16th16th版版AABBAABB评价评价未提及未提及特异性鉴定特异性鉴定的可靠方法的可靠方法敏感性高敏感性高特异性不足特异性不足血小板交叉配型应血小板交叉配型应用最为广泛的方法用最为广泛的方法方法方法指标指标血小板抗体检测方法血小板抗体检测方法-固相凝集法固相凝集法血小板抗体筛检,血小板抗体筛检,包括包括HLAHLA抗体、抗体、HPAHPA抗体及其它血小板反应抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。患者自身抗体检测患者自身抗体检测,包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。,包括血小板结合抗体和血清
17、中游离抗体。检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后,直检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后,直接加入抗人接加入抗人IgGIgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。用途:用途:血小板抗体检测方法血小板抗体检测方法-固相凝集法固相凝集法 1.1.主要应用科室:检验科,血液病科,妇产科,新生儿科。主要应用科室:检验科,血液病科,妇产科,新生儿科。2.2.检验科:检验科:检验科在常规血型鉴定中加入血小板抗体检测,可对临床输血中出检验科在常规血型鉴定中加入血小板抗体检测,
18、可对临床输血中出现发热、黄疸、急性肺损伤等非溶血性输血反应的风险作出评估。现发热、黄疸、急性肺损伤等非溶血性输血反应的风险作出评估。血小板抗体检测临床意义血小板抗体检测临床意义 3.3.妇产科妇产科:孕前,孕期,产后孕前,孕期,产后1).1).反复流产、不孕不育查因:对于反复和习惯性流产史(尤其是孕早期)和不孕不反复流产、不孕不育查因:对于反复和习惯性流产史(尤其是孕早期)和不孕不育史的患者,检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平,可对其造成流产和不孕不育育史的患者,检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平,可对其造成流产和不孕不育的原因作出辅助诊断。的原因作出辅助诊断。2).2).产检(尤其针对高
19、龄和二胎产妇)产检(尤其针对高龄和二胎产妇)孕早期检测:在孕早期(三个月)产检中常规检测母亲与胎儿的血小板相容性,对于孕早期检测:在孕早期(三个月)产检中常规检测母亲与胎儿的血小板相容性,对于孕早期出现流产和死胎的风险评价具有非常重要的意义孕早期出现流产和死胎的风险评价具有非常重要的意义孕晚期检测:在孕晚期(胎儿出生前)检测母体血清或血浆中血小板抗体水平,对胎孕晚期检测:在孕晚期(胎儿出生前)检测母体血清或血浆中血小板抗体水平,对胎儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病风险评价具有非常重要的意义。儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病风险评价具有非常重要的意义。3).3).妊娠期血小板降低的查
20、因:孕妇在妊娠期血小板减少是一种常见现象,如是生理妊娠期血小板降低的查因:孕妇在妊娠期血小板减少是一种常见现象,如是生理性降低则危害不大,往往生产后会恢复正常。但如果血小板的降低是由于孕妇自身免性降低则危害不大,往往生产后会恢复正常。但如果血小板的降低是由于孕妇自身免疫性疾病引起的则会引起流产、死胎、以及新生儿相关的血小板减少性疾病,危害严疫性疾病引起的则会引起流产、死胎、以及新生儿相关的血小板减少性疾病,危害严重。重。血小板抗体检测临床意义血小板抗体检测临床意义 4.4.血液病科:血液病科:1 1)自身免疫性疾病的辅助诊断:检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特自身免疫性疾病的辅助诊断
21、:检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性,可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综异性,可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。2 2)药物性抗体的检测:某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨)药物性抗体的检测:某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等,选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能,使血小蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等,选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能
22、,使血小板的生成减少,同时应用某种药物后,产生药物相关抗体,药物抗体复合物附着板的生成减少,同时应用某种药物后,产生药物相关抗体,药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合,使血小板聚集破坏,一些药物进入人体后也可直接破坏血小板膜上与补体结合,使血小板聚集破坏,一些药物进入人体后也可直接破坏血小板,造成血小板破坏增多,从而引发血小板减少。血小板,造成血小板破坏增多,从而引发血小板减少。5.5.新生儿科:新生儿血小板同种免疫性疾病的辅助诊断。新生儿科:新生儿血小板同种免疫性疾病的辅助诊断。血小板抗体检测临床意义血小板抗体检测临床意义 l 妇产科领妇产科领域域l 检验科常规血型鉴定检测(门诊检验科常规
23、血型鉴定检测(门诊血血型)型)l自身免疫性疾病的辅助诊自身免疫性疾病的辅助诊断断l药物性抗体检药物性抗体检测测血小板抗体检测临床应用血小板抗体检测临床应用l 曾有反复流产史的育龄妇女,可在怀孕前进行夫妻双曾有反复流产史的育龄妇女,可在怀孕前进行夫妻双方的血小板相关抗体检测,对由于母婴血小板血型不方的血小板相关抗体检测,对由于母婴血小板血型不合而导致的流产或合而导致的流产或 NAITNAIT进行早期的诊断和治疗。进行早期的诊断和治疗。l 青年女性流产率逐年上升青年女性流产率逐年上升l 每一次怀孕、流产都可能造成母体因外来抗原刺激而每一次怀孕、流产都可能造成母体因外来抗原刺激而产生抗体,危及下一次
24、妊娠。产生抗体,危及下一次妊娠。l 如何在孕前如何在孕前/孕期正确地评估因父母血小板血型不合孕期正确地评估因父母血小板血型不合引起的流产、引起的流产、NAITNAIT的风险?的风险?血小板抗体检测在妇产科领域的应用血小板抗体检测在妇产科领域的应用血小板抗体检测在妇产科领域的应用血小板抗体检测在妇产科领域的应用父母血小板血型不合引起新生儿同种免疫性血小板减少父母血小板血型不合引起新生儿同种免疫性血小板减少症的初步研究症的初步研究 邓晶、夏文杰、叶欣、徐秀章、邵媛、陈扬凯、丁浩强、罗广平、王嘉励(广州邓晶、夏文杰、叶欣、徐秀章、邵媛、陈扬凯、丁浩强、罗广平、王嘉励(广州血液中心临床输血研究所)热带
25、医学杂志血液中心临床输血研究所)热带医学杂志 20122012年年1111月第月第1212卷第卷第1111期期l文中观点:文中观点:通过收集通过收集2222例临床上确诊为新生儿免疫性血小板减少症(例临床上确诊为新生儿免疫性血小板减少症(NITNIT)的患儿为研究对象,)的患儿为研究对象,采用采用 ELISA ELISA 方法检测患儿及其父母的血小板相关抗体,应用方法检测患儿及其父母的血小板相关抗体,应用 PCR-SSPPCR-SSP法对患儿及法对患儿及父母进行父母进行 HLAHLA及及HPAHPA基因分型,根据相应的抗原进行抗体特异性分析。结果基因分型,根据相应的抗原进行抗体特异性分析。结果2
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