自身抗体的实验室检测及临床意义课件.ppt

1、自身抗体的实验室检测及临床意义n 北京友谊医院风湿科 宋淑菊 2020/11/31主要内容n自身抗体的概念n自身抗体的分类n自身抗体的命名n自身抗体的检测方法n常见的自身抗体2020/11/32自身抗体的概念n各种原因造成的机体B细胞产生的针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体（autoantibodies）。n自身抗体可以是生理性的，如针对衰老或死亡的自体细胞，机体产生少量的自身抗体，以便被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬，维持机体内环境的生理稳定；n自身抗体也可以是病理性的，引起自身免疫病。2020/11/33自身抗体的分类n按照自身抗原在体内分布的不同可分为：n器官/组织特异性自身抗

2、体n非器官/组织特异性自身抗体n按照检测自身抗体所用的基质不同可分为：细胞抗体（以游离的细胞为实验基质）o细胞非特异性自身抗体，如抗核抗体o细胞特异性自身抗体，如ANCA、抗血小板抗体、抗红细胞抗体组织抗体（以动物组织切片为实验基质）2020/11/34自身抗体的命名n以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写命名：如抗Sm、抗Ro、抗La抗体n以相关疾病的名字的缩写命名：如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体n以抗原的化学性质进行分类命名：如抗DNA、抗RNP抗体n以抗原的部位进行命名：如抗板层素抗体、抗核膜抗体。2020/11/35自身抗体的检测方法n对流免疫电泳、免疫双扩散n免疫荧光检测

3、法n免疫印记法n酶联免疫吸附检测法（ELISA）n放射性核素法n酶免疫斑点技术n免疫沉淀法2020/11/36抗核抗体(ANA)抗dsDNA抗体抗dsDNA抗体抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SSB抗体间接免疫荧光方法金标法免疫双扩散法ANA(anti-nuclear antibodies)2020/11/37抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SS B抗体抗Scl-70抗体抗Jo-1 抗体抗核糖体抗体免疫印记法 ENA(extractable nuclear antigen)2020/11/38抗核抗体(ANA)抗平滑肌抗体(SMA)抗线粒体抗体(AMA)间接免疫荧光法 自身抗体2020

4、/11/39病人血清(一抗)玻片二抗荧光抗体荧光显微镜下阅片ANAHep-2细胞dsDAN抗体短膜虫SMA大鼠胃组织AMA大鼠肾组织间接免疫荧光法底物2020/11/310病人血清金标记的抗体dsDNA抗原阴性阳性金标法2020/11/311抗原1:41:161:321:64病人血清标准抗体免疫双扩散琼脂板2020/11/312不同分子量的抗原病人血清酶标抗体显色剂判断结果免疫印记法2020/11/313抗Sm抗体13.5,28,29KD抗RNP抗体22,32,70KD抗SSA抗体52KD抗SS B抗体45,47KD抗Scl-70抗体68-70KD抗Jo-1 抗体55KD抗核糖体抗体15,16

5、.5,38KD2020/11/314间接免疫荧光法n细胞核阳性n核仁阳性n细胞浆阳性n分裂期细胞阳性2020/11/315细胞核阳性n细胞核均质型（Homogeneous）：抗dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体n细胞核周边型（Membranous）：板层素抗体n细胞核颗粒型（Speckled）：n粗颗粒：抗Sm、RNP抗体n细颗粒：抗SSA、SSB抗体2020/11/316抗dsDNA抗体荧光模式：绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。2020/11/317抗dsDNA抗体n自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。n临床意义：对系统性红斑狼疮（SLE

6、）特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性，因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。2020/11/318抗RNP/Sm抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。肝组织切片：同上。荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。2020/11/319抗RNP/Sm抗体n自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。n临床意义：高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔组织病（MCTD）的特征，发生率为95100%。也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生率为2040%。2

7、020/11/320抗SSASSB抗体荧光模式Hep-2片：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。肝组织片：细颗粒荧光。2020/11/321抗SSASSB抗体n自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。n临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。2020/11/322核仁阳性(Nucleolar)n核仁荧光增强，核浆均质型-Scl-70抗体。n核仁

8、均质型-PM-Scl及其他抗原抗体。n核仁细颗粒型-原纤维蛋白抗体。n核仁粗颗粒型-RNA多聚酶-1抗体。2020/11/323抗Scl-70抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核几乎均质的荧光，核仁荧光加强而且也为均质型，胞浆无荧光。肝组织片；细胞核颗粒或均质型荧光，常见到细胞核荧光。2020/11/324抗Scl-70抗体n自身抗原：为DNA拓扑异构酶1，分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。n临床意义：2570%的系统性硬化症（PSS）弥漫型患者阳性，局限型硬皮病患者阴性。2020/11/325细胞浆阳性n胞浆均质型-抗核糖体抗体 细颗粒-抗Jo-1抗体 n胞浆颗粒型 粗颗粒

9、-AMA抗体 滴状点状-溶酶体抗体 核周颗粒-高尔基体抗体n胞浆纤维型 细纤维-波形蛋白抗体 环状纤维-原肌球蛋白抗体 针状纤维-肌动蛋白抗体2020/11/326抗核糖体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光。肝组织片：岛状荧光。临床意义：SLE的特异性抗体，与精神症状有关。2020/11/327抗Jo-1抗体荧光模式：Hep-2：胞浆颗粒到细块状荧光。肝组织片：胞浆中弱荧光。自身抗原：组氨酰tRNA合成酶。临床意义：见于PM，发生率2535%。2020/11/328抗线粒体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆内粗的颗粒型荧光。大鼠肾组织切片：肾小管明显荧光，肾小球荧光较弱。

10、2020/11/329抗线粒体抗体n自身抗原：位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原，其中与PBC有关的包括：n（1）丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）n（2）支链2-氧酸脱氢酶复合体（BCOADC）n（3）a-酮戊二酸脱氢酶复合体（OGDC）2020/11/330抗线粒体抗体n临床意义：AMA-M2对PBC具有诊断意义。nAMA亚型与疾病的相关性：nAMA-1：梅毒、干燥综合征nAMA-2：PBCnAMA-3：药物性红斑狼疮nAMA-4：PBC与AIH重叠nAMA-5：SLE、自身免疫性溶血性贫血nAMA-6：异烟肼引起的药物性肝炎nAMA-7：A

11、IHnAMA-8：AIH、闭塞性血栓性血管炎nAMA-9：药物性肝炎nAMA-10：SLE2020/11/331分裂期细胞阳性n染色体阳性-染色体相关抗体，相关疾病？n纺锤体纤维阳性-纺锤体纤维抗体，如燕麦细胞型支气管肺癌n中间体阳性-中间体抗体，相关疾病？n细胞两极阳性-中心粒抗体，相关疾病？n着丝点阳性-抗着丝点抗体2020/11/332抗着丝点抗体(ACA)荧光模式：Hep-2：细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。肝组织片：分布于细胞核的1020个颗粒，荧光弱，易被忽略。2020/11/333抗着丝点抗体n自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A、B

12、、C，主要抗原为着丝点蛋白B。n临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（CREST综合征）有诊断意义。阳性率8095%。还可见于PBC、SS等。2020/11/334器官/组织特异性自身抗体n抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）n抗平滑肌抗体n抗角蛋白抗体n抗肝肾微粒体抗体n抗肝细胞膜抗原抗体n抗可溶性肝抗原抗体n抗肝特异性蛋白抗体2020/11/335抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）cANCAn荧光模式：n猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。甲醛固定的中性粒细胞：胞浆内粗大到细的荧光颗粒。2020/11/336抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）n自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。该靶抗原

13、为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。n临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengeners肉芽肿，约占ANCA阳性率的8095%。cANCA被认为是活动性Wengeners肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。2020/11/337抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）pANCAn荧光模式：n乙醇固定的中性粒细胞：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。n猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。2020/11/338抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）n自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（MPO），其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组

14、织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。n临床意义：见于多种系统性血管炎。可见于Wengeners肉芽肿、微多动脉炎、Churg-Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病（RA、SLE、SS、PM/DM）。2020/11/339抗平滑肌抗体（SMA）荧光模式：大鼠胃组织，呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光。大鼠肾组织，肾小管细胞内原纤维、肾小球膜细胞及血管肌层的荧光。2020/11/340抗平滑肌抗体（SMA）n自身抗原：主要的靶抗原为肌动蛋白，肌动蛋白可以单体（G-肌动蛋白）或聚合体（F-肌动蛋白）形式存在于微丝中，F-肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密切，而G-肌动蛋白

15、自身抗原则与酒精性肝硬化有关。n临床意义：见于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。2020/11/341抗角蛋白抗体（AKA）荧光模式：大鼠食管，仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。2020/11/342抗角蛋白抗体（AKA）n自身抗原：丝聚蛋白（filaggrin）为AKA的靶抗原。n临床意义：见于RA，阳性率3659%，特异性9599%。还是一个潜在的预后标志，高抗体滴度可能预示着较严重的RA类型。2020/11/343抗肝肾微粒体抗体（LKM）有三种荧光模式：LKM-1：肝细胞胞浆明显荧光，呈细颗粒到均质状，肾脏近近端肾小管有荧光。LKM-2：门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强

16、，肾脏近近端肾小管有荧光。LKM-3：肝和肾均为阴性，灵长类睾丸间质细胞荧光明显。2020/11/344抗肝肾微粒体抗体（LKM）n自身抗原：nLKM-1：细胞色素P450 D6，为50KD蛋白。nLKM-2：细胞色素P450同工酶，药物替尼酸的结合部位nLKM-3：UDP葡萄糖醛酸基转移酶，为55KD蛋白。n临床意义：自免肝按血清学分型可分为三型n型：出现ANA、SMA、肝细胞膜抗体（LMA抗体）为特征。n型：以出现LKM抗体为特征。n型：以出现可溶性肝抗原抗体（SLA抗体）为特征。nLKM-1为型自免肝的血清学标志。LKM-3抗体见于1015的慢性丁型肝炎患者。2020/11/345抗肝细

17、胞膜抗原抗体（LMA）荧光模式：肝细胞膜的线性荧光。2020/11/346抗肝细胞膜抗原抗体（LMA）n自身抗原：肝细胞膜抗原，可能为26KD蛋白。n临床意义：为非疾病特异性，最常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎型，在非肝病患者，其发生率较低。2020/11/347抗可溶性肝抗原抗体（SLA）荧光模式：猴肝组织上，肝细胞明显荧光，呈细颗粒到均质溶解状。大鼠肾组织为阴性。2020/11/348抗可溶性肝抗原抗体（SLA）n自身抗原：主要的靶抗原为肝细胞角蛋白。n临床意义：型自免肝的血清学标志。2020/11/349抗肝特异性蛋白抗体（LSP）荧光模式：猴肝细胞明显的颗粒状荧光。2020/11/350抗肝特异性蛋白抗体（LSP）n自身抗原：肝特异性膜脂蛋白，为43KD蛋白。n临床意义：常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎型，在非肝病患者，其发生率较低。2020/11/351