流式细胞术的临床应用课件.ppt
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- 关 键 词:
- 细胞 临床 应用 课件
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1、流式细胞术在临床上的应用流式细胞术在临床上的应用深圳市人民医院临床医学研究中心深圳市人民医院临床医学研究中心 李富荣李富荣流式细胞术的临床应用1 第一部分 流式细胞仪(FCM))工作原理流式细胞术的临床应用2FCMFCM系统结构系统结构流体系统:样本流、鞘液流体系统:样本流、鞘液光学系统:激光光源、分光镜、滤片、光学系统:激光光源、分光镜、滤片、散射光和荧光探测器散射光和荧光探测器分选系统:压电晶体、液流成滴、加电分选系统:压电晶体、液流成滴、加电 系统、偏转系统系统、偏转系统数据处理系统:计算机工作站数据处理系统:计算机工作站流式细胞术的临床应用3FCMFCM工作原理流程:工作原理流程:样本
2、(血液实体组织)单细胞悬液荧光染料特异染色的样本上机细胞单列通过测量区1.散射光信号2.荧光信号分离、收集、分析、光信号细胞理化特性分析图加入荧光染料激光激发流式细胞术的临床应用4流式细胞仪的构造及原理流式细胞仪的构造及原理流式细胞术的临床应用5FCMFCM测量光信号获取与分析测量光信号获取与分析散射光信号前向散射光(FSC)-细胞大小侧向散射光(SSC)-细胞粒度(膜的粒度、核大小与粒度、胞质数量)FSC信号越大,表明细胞体积越大;反之,则越小。SSC信号越大,表明细胞粒度越大;反之,则越小。流式细胞术的临床应用6根据根据FSC-SSCFSC-SSC二维点图,可以容易区分二维点图,可以容易区
3、分Lym(R3)Gran(R1)Lym(R3)Gran(R1)与与Mono(R2)Mono(R2)R1R2Incident Light SourceRight Angle Light Dectector a Cell ComplexityForward Light Detector a Cell Surface AreaR3R2R1根据根据FSC-SSCFSC-SSC二维点图,可以容易的区分出二维点图,可以容易的区分出Lym(R3).Gran(R1)Lym(R3).Gran(R1)与与Mono(R2)Mono(R2)流式细胞术的临床应用7流式细胞术常用染料及检测波长流式细胞术常用染料及检测波长
4、流式细胞术的临床应用8流式细胞术的临床应用9荧光染料的发射不同波长荧光染料的发射不同波长流式细胞术的临床应用10DNA DNA 和和RNARNA荧光探针的理化特性荧光探针的理化特性荧光探针荧光探针 分子量分子量 结合方式结合方式 碱基特异性碱基特异性 激发锋(激发锋(nm)nm)发射锋发射锋(nm)(nm)P1 668 P1 668 嵌入嵌入 无无 493 630 493 630EB 394 EB 394 嵌入嵌入 无无 482 616 482 616MI 1069 MI 1069 非嵌入非嵌入 G-C 320,445 575 G-C 320,445 575 CA3 1183 CA3 1183
5、 非嵌入非嵌入 GC 320,445 575 GC 320,445 575 HO33258 624 HO33258 624 非嵌入非嵌入 AT 343 480 AT 343 480 HO33342 615 HO33342 615 非嵌入非嵌入 AT 343 455 AT 343 455DAPI 350 DAPI 350 非嵌入非嵌入 AT 540 650 AT 540 6507-AAD 1270 7-AAD 1270 嵌入嵌入 GC 540 655 GC 540 655 AO 370 AO 370 嵌入嵌入(双链)双链)无无 492 530 492 530 静电(单链)静电(单链)640 64
6、0PY 303 PY 303 嵌入嵌入(双链)双链)GCAT 549-562 565-574 GCAT 549-562 565-574 静电(单链)静电(单链)流式细胞术的临床应用11细胞周期分析细胞周期分析通过荧光探针对细胞周期进行相对通过荧光探针对细胞周期进行相对DNADNA含量的测定,可分析细含量的测定,可分析细胞周期各时期的百分比,周期动力参数及胞周期各时期的百分比,周期动力参数及DNADNA异倍体异倍体G1SG2GoM流式细胞术的临床应用12分选系统(分选系统(Sorting)Sorting)依据流式细胞术测定的细胞参数可分选所需细胞群体:依据流式细胞术测定的细胞参数可分选所需细胞群
7、体:电荷式分选电荷式分选稳定液流测量区液滴形成液滴充电液滴偏转分选收集逻辑电路流式细胞术的临床应用13电荷式分选电荷式分选流式细胞术的临床应用14通道式分选通道式分选稳定液流测量区逻辑电路捕获管分选收集流式细胞术的临床应用15 第二部分第二部分 流式细胞术在临床医学中的应用流式细胞术在临床医学中的应用流式细胞术的临床应用16流式细胞术的临床应用17流式临床应用流式临床应用淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析Th1/Th2 肿瘤学肿瘤学HLA-B27PNH 四聚体四聚体血小板活化血小板活化 细胞凋亡细胞凋亡 移植免疫移植免疫流式细胞术的临床应用18流式细胞术的临床应用19流式细胞术的临床应用20流式
8、细胞术的临床应用21流式细胞术的临床应用22流式细胞术的临床应用23常常用用淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群报报告告模模式式R流式细胞术的临床应用24深圳深圳市人市人民医民医院流院流式细式细胞术胞术报告报告单模单模式式流式细胞术的临床应用25流式细胞术的临床应用26流式细胞术的临床应用27流式细胞术的临床应用28流式细胞术的临床应用29流式细胞术的临床应用30流式细胞术的临床应用31流式细胞术的临床应用32流式细胞术的临床应用33流式细胞术的临床应用34流式细胞术的临床应用35流式细胞术的临床应用36流式细胞术的临床应用37HLA-B27通过CD3PEvsSSC设门,圈定CD3阳性细胞(T淋巴细胞),
9、检测其B-27的平均荧光强度。如标本的平均荧光强度小于标准微球荧光强度则为阴性,反之为阳性。流式细胞术的临床应用38流式细胞术的临床应用39 Th1/Th2细胞流式细胞术的临床应用40流式细胞术的临床应用41流式细胞术的临床应用42流式细胞术的临床应用43流式细胞术的临床应用44流式细胞术的临床应用45流式细胞术的临床应用46 肿瘤学肿瘤学流式细胞术的临床应用47流式细胞术的临床应用48流式细胞术的临床应用49流式细胞术的临床应用50流式细胞术的临床应用51流式细胞术的临床应用52流式细胞术的临床应用53流式细胞术的临床应用54流式细胞术的临床应用55流式细胞术的临床应用56流式细胞术的临床应
10、用57流式细胞术的临床应用58流式细胞术的临床应用59 细胞凋亡细胞凋亡流式细胞术的临床应用60流式细胞术的临床应用61流式细胞术的临床应用62流式细胞术的临床应用63流式细胞术的临床应用64流式细胞术的临床应用65 移植免疫移植免疫流式细胞术的临床应用66流式细胞术的临床应用67流式细胞术的临床应用68流式细胞术的临床应用69流式细胞术的临床应用70流式细胞术的临床应用71 四聚体四聚体流式细胞术的临床应用72Tetramer-原理原理内源性抗原内源性抗原外源性抗原外源性抗原流式细胞术的临床应用73Tetramer-原理原理MHC Class I-HLA-A2流式细胞术的临床应用74Tetr
11、amer-原理原理流式细胞术的临床应用75Tetramer-原理原理国外医学免疫学分册 2001;24(2):102-105流式细胞术的临床应用76HLA Class I 限定性肿瘤抗原肽限定性肿瘤抗原肽流式细胞术的临床应用77抗原特异性抗原特异性CTL的分析方法的分析方法51Cr释放实验释放实验PCR法法酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法(ELISPOT)扩增特异T淋巴细胞受体Tetramer法法间接法需大量的特异性CTLs作为效应细胞需体外扩增,周期长,敏感性低,费时费力难以广泛应用敏感性高但只能用于已知TCR基因型的特异性CTLs检测直接法敏感性高不受TCR基因型的限制有限稀释法有限稀释法(L
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