临床常用免疫学检查.ppt

1、第一页，共89页。掌握：免疫球蛋白、补体的临床意义 病毒性肝炎血清标记物的检测 肿瘤标记物的检测熟悉：感染免疫检查 自身抗体的检测第二页，共89页。第三页，共89页。免疫球蛋白是指由浆细胞所产生的,具有抗体活性和(或)抗体样构造的球蛋白.主要分为:IgG,IgA,IgM,IgE和IgD五类.第四页，共89页。IgG:IgG:含量最多或最主要的含量最多或最主要的IgIg75%75%，唯一可以通过胎盘的唯一可以通过胎盘的IgIg IgA:IgA:约占约占10%10%，分为分泌型和血清型，分为分泌型和血清型，在部分免疫中起重要作用在部分免疫中起重要作用 IgMIgM：分子量最大，是抗原刺激后最：分子

2、量最大，是抗原刺激后最早出现的抗体早出现的抗体第五页，共89页。第六页，共89页。检测方法检测方法：免疫比浊法免疫比浊法 参考值参考值：成人成人 IgGIgG：g/L g/L IgA IgA：g/L g/L IgM IgM：2.8 2.8 g/Lg/L第七页，共89页。第八页，共89页。免疫球蛋白增高免疫球蛋白增高l多克隆增高多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝常见于各种慢性感染、慢性肝病病 肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，如如SLESLE、类风湿关节炎等、类风湿关节炎等l单克隆增高单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如主要见于免疫增殖性疾病，如多发性

3、骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等第九页，共89页。免疫球蛋白降低免疫球蛋白降低 常见于各类先天性免疫缺陷病、重链常见于各类先天性免疫缺陷病、重链病、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病病、轻链病、获得性免疫缺陷病、肾病综合征、结合免疫缺陷病及长期使用免综合征、结合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。疫抑制剂的病人。IgG下降：细菌感染下降：细菌感染 IgA下降：反复呼吸道感染下降：反复呼吸道感染 IgM下降：败血症下降：败血症第十页，共89页。M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖产生的，具有一样构造和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片断，一般不

4、具有抗体活性 第十一页，共89页。参考值 阴性 临床意义见于单克隆免疫球蛋白增殖病：MM 巨球蛋白血症 重链病(、重链)轻链病(、轻链)半分子病：IgA、IgG型 恶性淋巴瘤 良性M蛋白血症第十二页，共89页。第十三页，共89页。补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白,共有20余种组分,具有溶细胞、调理作用、中和与溶解病毒和炎症介质、去除免疫复合物等作用。是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体。按功能分为经典途径、旁路激活途径、膜攻击组分和调节分子4种。第十四页，共89页。抗原:绵羊红细胞 +抗体:兔抗羊红细胞抗体(溶血素)+补体 溶血100806040201234

5、 血清(ml)溶血%溶血程度与补体含量的关系第十五页，共89页。参考值试管法:50-100u/ml临床意义主要反映补体传统途径活化的活性程度.CH50增高:见于急性炎症、组织损伤风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、多发性关节炎、伤寒和某些肿瘤。第十六页，共89页。lCH50降低：更有意义。见于肾小球肾炎、自身免疫性疾病SLE、RA、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病和遗传性血管神经水肿。第十七页，共89页。在患SLE、RA等自身免疫病时，血清补体程度随病情发生变化。细菌感染，特别是革兰阴性细菌感染时，常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体程度降低。心肌堵塞、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、

6、妊娠等情况下血清补体程度常升高。第十八页，共89页。C3是补体系统中含量最多的物质，主要由巨噬细胞和肝脏合成，在C3转化酶的作用下，裂解成C3a与C3b,在传统途径和旁路途经中发挥重要作用。第十九页，共89页。参考值 成人临床意义 增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排斥反响。降低：消耗增多：肾炎、活动性SLE、RA。合成缺乏：肝病。大量丧失：肾病综合症、大面积烧伤等。第二十页，共89页。C4由肝脏、巨噬细胞合成，为C1s底物，参与经典激活途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。第二十一页，共89页。参考值 成人：临床意义 增高:组织损伤性疾病.降低:狼疮性肾炎、

7、SLE、自身免疫 性肝炎、型糖尿病、胰腺癌、多发 性硬化症、RA、IgA型肾炎、遗传性 IgA缺乏症。第二十二页，共89页。人的淋巴细胞可分为：T、B、NK等细胞群他们有不同的外表标志和功能。T、B细胞还分为不同的亚型。第二十三页，共89页。lE E玫瑰花形成试验玫瑰花形成试验 ：l T T细胞外表有绵羊红细胞外表有绵羊红l 细胞受体，与细胞受体，与SRBCSRBCl 结合形成花结样的结合形成花结样的l 细胞，可用于细胞，可用于T T淋巴细胞计数。淋巴细胞计数。l分化抗原测定：荧光标记的抗体与分化抗原测定：荧光标记的抗体与T T细胞细胞反响，用荧光显微镜或流式细胞仪计数。反响，用荧光显微镜或流

8、式细胞仪计数。第二十四页，共89页。l降低降低：见于免疫缺陷疾病，如恶性肿瘤、：见于免疫缺陷疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖疾病。伤、多发性神经炎、淋巴增殖疾病。l升高升高：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动肝炎等。力、慢性活动肝炎等。第二十五页，共89页。CD3CD3代表总代表总T T淋巴细胞淋巴细胞CD4CD4是辅助、诱导是辅助、诱导T T细胞细胞的标志的标志CD8CD8是抑制、杀伤性是抑制、杀伤性T T细胞的细胞的标志标志应用单抗和荧光标应用单抗和荧光标记二抗反响在荧光显记

9、二抗反响在荧光显微镜下或流式细胞仪微镜下或流式细胞仪中计数中计数CDCD的百分率。的百分率。CD3CD8CD3CD4第二十六页，共89页。参考值参考值 免疫荧光法免疫荧光法IFAIFA：CD3 CD3为为63.1%63.1%10.8%10.8%；CD4 CD4 为为42.8%42.8%9.5%9.5%；CD8 CD8 为为19.6%19.6%5.9%5.9%；CD4/CD8 CD4/CD8为为/1/1。第二十七页，共89页。流式细胞术：流式细胞术：CDCD3 3 61%61%85%85%；CDCD4 4 28%28%58%58%；CDCD8 8 19%19%48%48%；CDCD4 4/CD/

10、CD8 8第二十八页，共89页。CD3下降:自身免疫性疾病、免疫缺陷病、放疗、化疗后、肾上腺素治疗后 CD4下降:恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫抑制剂的使用、病毒感染、严重创伤、大手术 CD8下降：自身免疫性疾病、变态反响疾病第二十九页，共89页。CD4/CD8增高：自身免疫性疾病、恶性肿瘤、病毒感染、变态反响CD4/CD8下降：HIV0.5)、传单、巨细胞病毒感染等器官移植排斥反响的监测:升高预示可能发生排斥发应;持续下降提示感染发生必须停顿使用免疫抑制剂。第三十页，共89页。膜外表免疫球蛋白(SmIg)测定：升高与淋巴细胞恶性增殖有关，降低与体液免疫缺陷有关 分化抗原的测定：CD19为最重要的

11、B淋巴细胞标记分子，升高主要见于淋巴系统的恶性肿瘤 第三十一页，共89页。T T细胞转化试验细胞转化试验 原理：原理：在体外培养时，在体外培养时，T T细胞在刺细胞在刺激物的作用下，转化为淋巴母细胞，激物的作用下，转化为淋巴母细胞，部分发生有丝分裂，计数淋巴细胞及部分发生有丝分裂，计数淋巴细胞及转化的母细胞数，求出转换百分数。转化的母细胞数，求出转换百分数。意义：判断机体细胞免疫功能程度、意义：判断机体细胞免疫功能程度、估计疾病的疗效和预后。估计疾病的疗效和预后。第三十二页，共89页。1.形态法形态法掺入法掺入法法法第三十三页，共89页。混合淋巴细胞反响 原理：两个无关个体的淋巴细胞混合培养时

12、，双方淋巴细胞会以对方为抗原发生反响，T淋巴细胞发生转化 意义：反响机体整体的细胞免疫功能程度、用于HLA的细胞学分型第三十四页，共89页。NKNK细胞活性测定细胞活性测定 能直接杀伤效应细胞，具有抗肿能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功能，亦瘤、抗感染和免疫调节等功能，亦参与移植物排斥反响、自身免疫病参与移植物排斥反响、自身免疫病和超敏反响的发生和超敏反响的发生第三十五页，共89页。方法：乳酸脱氢酶释放法、51Cr释放法、流式细胞术意义：肿瘤疗效观察与预后、免疫调节功能第三十六页，共89页。第三十七页，共89页。第三十八页，共89页。第三十九页，共89页。甲型肝炎病毒抗原和R

13、NA检测 参考值均阴性 临床意义HAVAg阳性:HAVAg在发病前两周可从粪便中排出.HAV-RNA阳性:早期诊断及特异性诊断。在病人粪便中检出说明病人急性感染,且病人及其排泄物皆为传染原。第四十页，共89页。甲型肝炎病毒抗体检测 机体可产生IgM,IgG,IgA,HAV-IgM是病毒衣蛋白抗体,HAV-IgA是肠道粘膜分泌的部分抗体,HAV-IgG可长期存在.参考值均为阴性.第四十一页，共89页。抗HAV-IgM阳性:是机体早期诊断指标,说明机体正处于感染期,是感染的特异性指标。抗HAV-IgA阳性:早期和急性期在粪便中测得,是早期诊断指标之一。抗HAV-IgG阳性:阳性提示既往感染,可作为

14、流行病学调查指标。第四十二页，共89页。The infectious virion is called the DANE particle.第四十三页，共89页。第四十四页，共89页。HBsAg:具有抗原性,无传染性 参考值阴性 临床意义 1.HBsAg为乙肝患者首先出现的病毒标志物,可作为乙肝的早期诊断和普查工程。在急性肝炎埋伏期即可阳性,而临床表现及肝功异常要在4周后才出现,乙肝发病时HBsAg达顶峰。是诊断乙肝最常用的指标。第四十五页，共89页。个月后不转阴,变为慢性:慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌。3.慢性HBsAg携带者。第四十六页，共89页。HBsAb:针对HBsAg

15、产生,有一定的中和作用,阳性说明机体有一定免疫力。参考值阴性 临床意义阳性提示急性感染后康复,在发病后转阳或效价升高有意义.一般3-6月后出现,可持续多年。判断疫苗的质量最主要的指标。承受HBsAb阳性血的受血者,可出现短暂阳性。第四十七页，共89页。HBeAg:核心颗粒的可溶性蛋白,具有抗原性。参考值阴性 临床意义 HBeAg阳性是乙肝传染性的标志物,具有传染性,病人处于活动期.HBeAg与DNA复制成正比,也和肝损成正比。母婴传播。判断急性乙肝的预后。第四十八页，共89页。HBeAb:比HBsAb转阳要早.参考值阴性 临场意义 急性肝炎患者HBeAg转阴,HBeAb出现,认为病情好转,预后

16、良好,病毒复制程度下降,传染性降低,但并非无传染性。潜在HBeAb阳性可能是慢性迁延和恶性变信号。第四十九页，共89页。HBcAg:存在于Dane颗粒核心,是一种核心蛋白,被HBsAg包裹,一般测不出来。参考值阴性 临床意义乙肝传染性活动性病变的标志:HBsAg、HBeAg和HBcAb等指标是体内存在乙肝病毒的间接标志，而HBcAg是直接标志，与HBVDNA呈正相关，可反映HBV活动性复制程度。第五十页，共89页。HBcAb:有IgG、IgM、IgA三种。参考值阴性 临床意义 1 HBcAb总抗体：主要反映IgG。HBV感染的指标 乙肝急性期的辅助诊断：“窗口期 流行病学调查的指标 献血员的挑

17、选 观察疫苗的平安性第五十一页，共89页。2 HBcAb-IgM 急性乙肝的诊断:感染早期HBcAb-IgM上升,数月后不管HBsAg是否消失,HBcAb-IgM都稳定。HBsAg阴性急性感染者HBcAb-IgM阳性且高滴度,也可诊断。第五十二页，共89页。判断病毒复制的指标:有助于区别慢活肝或非活动性肝炎,慢活肝HBcAb-IgM阳性，低度低。有助于鉴别近期感染或即往感染第五十三页，共89页。3 HBcAb-IgG 流行病学调查 有助于区别慢活肝或非活动性肝炎:特别是急性乙肝和乙肝携带者急性发作第五十四页，共89页。Brag HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb Diagnosis

18、1 +-+-early HBV infection 2 +-+-+acute HBV infection (high infectivity)3 +-+HBV infection e-antibody-conversion(low infectivity)4 -+convalescent window stage 5 -+-+early convalescent stage6 -+acute or chronic HBV infection7 -+-vaccination 第五十五页，共89页。HBV-DNA:参考值阴性 临床意义 乙肝的直接诊断根据 母婴垂直传播第五十六页，共89页。HCV-

19、RNA 参考值阴性临床意义 早期病原学诊断判断预后第五十七页，共89页。HCV-IgM 参考值阴性 临床意义急性丙肝患者4周后阳性,6个月内治愈转阴,否那么转变为慢性。第五十八页，共89页。HCV-IgG:出现慢,2-6月后阳性 参考值阴性 临床意义 抗HCV-IgG阳性说明已有HCV 献血员挑选 第五十九页，共89页。第六十页，共89页。抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素o测定测定(ASO)参考值乳胶凝集法500U 临床意义 增高：A族溶血性链球菌感染所引起的疾病：风湿热(风湿性关节炎、风湿性心肌炎)，急性上呼吸道感染(扁桃体炎)，急性肾小球肾炎等。第六十一页，共89页。第六十二页，共89页。伤寒

20、和副伤寒沙门氏菌的检测 肥达氏反响(Widal)参考值 o凝集效价1:80 伤寒H凝集效价1:160,副伤寒A,B,C凝集效价1:80,H1:1602副伤寒甲:O1:80,A1:160 乙:O1:80,B1:160 丙:O1:80,C1:1603单O升高:感染早期或其他沙门氏菌与O抗原穿插反响4单H升高:预防接种或非特异性反响第六十四页，共89页。C反响蛋白测定(C-reactive protein,CRP)参考值免疫比浊法:10mg/L 临床意义 1组织损伤:大手术,严重创伤,烧伤,心梗 2细菌感染,病毒感染升高不明显 3风湿热活动期 4恶性肿瘤,器官移植后排斥反响第六十五页，共89页。TO

21、：toxoplasma gondii,弓形虫 R：rubella virus,风疹病毒 C：cytomegalovirus,巨细胞病毒 H：herpes simplex virus,单纯疱疹病毒 孕妇感染后可通过胎盘传染给胎儿，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍，已被作为孕期检查常规工程。第六十六页，共89页。肿瘤标志物(tumor marker):肿瘤在发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或机体对肿瘤反响而产生的一种物质。反映细胞恶变各阶段表型及基因特征性。第六十七页，共89页。甲种胎儿蛋白AFP：早期胎儿肝脏合成，出生后受抑制。当肝脏细胞或生殖腺胚胎组织恶变时显著增高。参考值定

22、性:阴性，定量:300ug/L生殖腺胚胎癌中的运用:在睾丸癌、卵巢癌、畸胎癌的诊断、疗效观察和预后判断中均有意义。其他：鉴别妊娠和绒毛癌；在胎盘堵塞、剥离、羊水栓塞、胎儿先天性开放性神经管畸形，病毒性肝炎、肝硬化。第六十九页，共89页。癌胚抗原CEA：胎儿早期的消化管和某些组织均可合成，孕6个月后下降，出生后极低。参考值15ug/l 临床意义 由内胚层分化来的恶性肿瘤：尤其是消化道腺体的肿瘤检出率较高，特别是结肠癌；某些良性肿瘤:直肠息肉轻度一过性增高,结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿、支气管哮喘；其他体液：良性胸腹水CEA血清 胃液CEA增高，且先于血清对诊断胃癌有一定价值。第七十页，共89

23、页。癌抗原125CA-125)属于糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞。临床意义 卵巢癌的诊断、疗效观察、判断复发、有重要意义。妇科恶性肿瘤：卵巢上皮细胞肿瘤、透明细胞癌、生殖细胞肿瘤、宫颈癌中均升高。其他：肝癌、胃癌、结肠直肠癌、肺癌、均可增高，良性卵巢肿瘤、子宫肌瘤也可增高。第七十一页，共89页。前列腺特异性抗原PSA):存在于前列腺导管上皮细胞中。可分为复合PSAC-PSA和游离PSAF-PSA 参考值T-PSA40ug/l，临床意义有器官特异性，无肿瘤特异性 前列腺癌的挑选：T-PSA增高,F-PSA/T-PSA25%8%50%0%第七十三页，共89页。第七十四页，共89页。

24、自身免疫性疾病自身免疫性疾病AIDAID：某些原因削弱或：某些原因削弱或破坏安康人的自身免疫耐受，免疫系统对自破坏安康人的自身免疫耐受，免疫系统对自身组织或成分产生免疫应答，称自身免疫。身组织或成分产生免疫应答，称自身免疫。由于自身免疫而产生的疾病称自身免疫病。由于自身免疫而产生的疾病称自身免疫病。第七十五页，共89页。类风湿因子类风湿因子RFRF：靶抗原为变性：靶抗原为变性IgGIgG的的FcFc部分，有部分，有IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、IgDIgD、IgEIgE五种类五种类型。型。90%RA 90%RA患者呈阳性，患者呈阳性，IgA-RFIgA-RF与骨质破坏有与骨质破坏有

25、关，早期升高提示病情严重，预后不良。关，早期升高提示病情严重，预后不良。IgE-RFIgE-RF升高时已属病情晚期。升高时已属病情晚期。RF RF无严格特异性，不是无严格特异性，不是RARA的诊断惟一标的诊断惟一标准准第七十六页，共89页。不同疾病时不同疾病时RFRF的检出率的检出率 疾病疾病 阳性率阳性率%类风湿性关节炎类风湿性关节炎 79 79 枯燥综合征枯燥综合征 95 95 SLE 30 SLE 30 硬皮病硬皮病 80 80 皮肌炎皮肌炎 80 80 混合结缔组织病混合结缔组织病 20 20 第七十七页，共89页。抗核抗体抗核抗体ANAANA：ANAANA是以自身真核细胞是以自身真核

26、细胞的各种细胞核成分作靶抗原的一组自身抗的各种细胞核成分作靶抗原的一组自身抗体的总称，体的总称，ANAANA的性质主要是的性质主要是IgG,ANAIgG,ANA无种无种属和器官特异性可与所有动物细胞核发生属和器官特异性可与所有动物细胞核发生反响。反响。第七十八页，共89页。第七十九页，共89页。可提取性核抗原性多肽抗体谱测定可提取性核抗原性多肽抗体谱测定ENAENA：包括包括SmSm、RNPRNP、Jo-1Jo-1、Scl-70Scl-70、SSA/RoSSA/Ro、SSB/LaSSB/La等等 抗抗DNADNA抗体抗体 ：抗：抗ds-DNAds-DNA抗体抗体第八十页，共89页。种类意义AN

27、A最多见于SLEsDSLE诊断指标之一抗抗体为SLE所特有抗组蛋白抗体的SLE及以上药物引导性狼疮抗U1RNP与混合性结缔组织病MCTD有关抗SSB/SSA见于干燥综合症抗Jo-1多见于多发性肌炎-硬皮病抗Scl-70出现于进行性系统硬化症第八十一页，共89页。SLE：ANA、抗、抗ds-DNA、抗抗Sm、抗、抗SSA、抗组蛋白、抗组蛋白 pSS：抗：抗SSA、抗、抗SSB DM/PM：抗合成酶：抗合成酶jo-1，PL-7，PL-12)抗抗SRP、抗、抗Mi-2 SSc:ACA抗着丝点、抗抗着丝点、抗Scl-70、抗核、抗核仁抗体仁抗体 MCTD：ANA、抗、抗RNP第八十二页，共89页。第八

28、十三页，共89页。人类白细胞抗原:位于第6对染色体的短臂上,共有6个座位,分为HLA-A,HLA-B,HLA-C,HLA-DR,HLA-DQ,HLA-DP。分为类抗原HLA-A,HLA-B,HLA-C座位根底上的基因编码的抗原和类抗原HLA-DR,HLA-DQ,HLA-DP座位基因多编码的抗原第八十四页，共89页。方法：PCR，琼脂糖电泳等 临床意义：供体和受体HLA位点及碱基顺序是否一致，决定着顺序不同可导致慢性排斥反响或畸形排斥反响。第八十五页，共89页。l可以用血清学分型技术的抗原：HLA-A、B、C、DR、DQl方法 l 微量细胞毒试验l 特定细胞群反响抗体测定l 淋巴细胞毒穿插配型实验l 第八十六页，共89页。主要用于 HLA-D和HLA-DP抗原的测定 临床意义：选择一样的HLA-D和HLA-DP抗原的供受体，是器官移植成功的前提。第八十七页，共89页。器官移植前，要做的配型有：血型相配配型3.有条件做DNA分型4.不同的器官移植，对HLA相容性要求也不同。骨髓、肾移植要求严，心肝那么不然。第八十八页，共89页。谢谢欣赏！2020/11/589第八十九页，共89页。