分子病理学课件-2.ppt

1、 分子病理学常用研究方法分子病理学常用研究方法 (一一)基因变异的诊断基因变异的诊断 Southern blot,PCR,RT-PCR,Real-Time RT-PCR,FISH分子遗传学异常检测方法分子遗传学异常检测方法检测基因的丢失和扩增检测基因的丢失和扩增 比较基因组杂交比较基因组杂交 Comparative Genomic Hybridization,CGH 分子生物学技术与细胞遗传学方法相结合分子生物学技术与细胞遗传学方法相结合 优点：优点：1.新鲜材料和福尔马林固定石蜡包埋材料均可新鲜材料和福尔马林固定石蜡包埋材料均可 进行进行CGH研究研究 2.被测样品只需数被测样品只需数m m

2、g甚至不到甚至不到1 m mg的的DNACGH的应用：的应用：1.为搜寻肿瘤的癌基因或抑癌基因确定范围为搜寻肿瘤的癌基因或抑癌基因确定范围2.肿瘤细胞染色体某一位置上肿瘤细胞染色体某一位置上DNA序列拷贝数增序列拷贝数增加，往往提示该位置可能包含已知或未知的癌加，往往提示该位置可能包含已知或未知的癌基因有扩增基因有扩增3.肿瘤细胞染色体某一位置上肿瘤细胞染色体某一位置上DNA序列拷贝数减序列拷贝数减少或缺失，提示该位置可能包含已知或未知的少或缺失，提示该位置可能包含已知或未知的抑癌基因丢失抑癌基因丢失 CGH发现发现MYCN，MET与胃癌相关与胃癌相关2.区分良恶性病变，临床上估计预后区分良恶

3、性病变，临床上估计预后3.4.16例前列腺癌例前列腺癌CGH显示染色体异常占显示染色体异常占81%5.5例良性前列腺增生全部阴性例良性前列腺增生全部阴性 67肝细胞癌肝细胞癌CGH显示显示:1q,8q,20q,17q 4q,8p,13q,16q 12例癌周肝硬化组织：阴性例癌周肝硬化组织：阴性 53例淋巴结阴性乳腺癌：例淋巴结阴性乳腺癌：8q,11q13,17q,20q异常，预后差异常，预后差 蛋白组学及生物芯片蛋白组学及生物芯片生物芯片（生物芯片（biochip)是指采用光导原位合成或微量点样等方法将大量是指采用光导原位合成或微量点样等方法将大量核酸片段（寡核苷酸、核酸片段（寡核苷酸、cDN

4、A、基因组、基因组DNA、RNA）或多肽分子甚至细胞等生物样品有序地）或多肽分子甚至细胞等生物样品有序地固定于支持物（玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、固定于支持物（玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集的二维分子排尼龙膜等载体）的表面，组成密集的二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄通过特定的仪器如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子并行、高效地检测分析，从而判断样品中

5、靶分子的数量改变。的数量改变。生物芯片：生物芯片：基因芯片基因芯片 蛋白质芯片蛋白质芯片 细胞芯片细胞芯片 组织芯片组织芯片基因芯片基因芯片(Affymetrix 专利）专利）寡核苷酸芯片，寡核苷酸芯片，cDNA芯片，基因组芯片芯片，基因组芯片 DNA microarray:阵密度很高的玻片基质或胶膜基质阵密度很高的玻片基质或胶膜基质 的的DNA微阵列微阵列 DNA macroarray:阵密度较低的尼龙膜阵密度较低的尼龙膜DNA微阵列微阵列 杂交组织化学原理杂交组织化学原理标记探针杂交变性 标记探针 互补核酸顺序 DNA/cDNA DNA DNA/cDNA RNA RNA RNA 线性质粒

6、提取质粒扩增 探针重组质粒 质粒酶切插入 转染 探针缺口翻译/平移法5 3 3 3 3 3 3 5 5 5 5 5 随机引物法5 5 5 5 5 5 5 5 3 3 3 3 3 3 3 3 1.于于Eppendorf离心管中依次加入离心管中依次加入 15l ddH2O 1g DNA(10ng-3g)100 10(变性变性)干冰聚冷干冰聚冷30秒钟秒钟 2.加入加入10六核苷酸混合物六核苷酸混合物 2l 10dTNP标记混合液标记混合液 2l 含含 1mM dATP，1mM dCTP，1mM dGTP，0.65mM dTTP，0.35mM DIG-dUTP Klenow酶酶(2U/l)1l 3.

7、混合后混合后37保温保温1-2h(可达可达20h)4.加入加入2l pH8.0 200mM EDTA终止反应终止反应 5.加入加入2l糖原糖原(10mg/ml)6.加加2.5l 4M LiCl或或3M NaAc(pH 5.5)7.加加75l无水乙醇无水乙醇(-20预冷预冷)8.混合后混合后-70 30 9.13000g 4离心离心15，弃上清，弃上清 10.加加100l 70%乙醇乙醇(预冷预冷)洗，离心弃上清洗，离心弃上清 11.真空干燥，加真空干燥，加50l TE(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0)溶解，溶解，-20保存保存 PCR扩增标记法5 5 5 5 5 5

8、5 5 3 3 3 3 3 3 3 3 1.于于Eppendorf离心管中加入离心管中加入 10PCR缓冲液缓冲液 5l(1)MgCl2 210l(15mM)引物引物 适量适量(0.11M)标记标记/非标记非标记dNTP 5l (200M，dTTP:Dig-dUTP=3:1)ddH2O 加到加到50l 模板模板DNA 1100ng Tag DNA多聚酶多聚酶 0.21l(15units)反应组反应组 对照组对照组1 对照组对照组2 DNA模板模板 +-Dig-dUTP +-2混合后混合后PCR仪扩增仪扩增 循环循环 温度温度 时间时间 1 94C 5 94C 45 231 550.2C 45

9、72C 90 32 72C 5 33 4C Hold 3.纯化和鉴定纯化和鉴定 乙醇沉淀法：乙醇沉淀法：100l PCR产物加产物加10l 4M LiCl和300l预冷的预冷的100%乙醇乙醇，-20C，2小时，离心小时，离心4C 13000g，5分钟分钟 Agarose凝胶电泳凝胶电泳 RNA体外合成/标记法 pGEM1.于于Eppendorf离心管中加入离心管中加入 DNA模板模板(酶切成线性酶切成线性)1g 含噬菌体启动子的质粒含噬菌体启动子的质粒 NTP标记混合物标记混合物 2l 含含10mM ATP，10mM CTP 10mM GTP，6.5mM UTP 3.5mM DIG-11-U

10、TP 10反应缓冲液反应缓冲液 2l DEPC处理的处理的H2O 加至加至 17l 2.混合后加：混合后加：RNase抑制剂抑制剂 1l RNA多聚酶多聚酶(SP6/T7)2l 3.柔和混合后柔和混合后37保温保温2h 4.加入加入DNase 2l，3715(去除模板去除模板DNA)5.加入加入2l 200mM pH8.0 EDTA 6.加入加入2.5l 4M LiCl和和75l预冷乙醇预冷乙醇 7.混合后置混合后置-70，30或或-20过夜过夜 8.413000g离心离心15，弃上清，弃上清 9.加加100l 70%乙醇乙醇(预冷预冷)洗，离心弃上清洗，离心弃上清10.真空干燥，加真空干燥，

11、加100l DEPC-H2O溶解，溶解，-20保存保存不同浓度（不同浓度（10倍梯度稀释）的标记探针点尼龙膜倍梯度稀释）的标记探针点尼龙膜 DNARNA探针：探针：0.01pg1ngul 寡核苷酸探针：寡核苷酸探针：0.08FM50fM/ul 紫外照光或加热紫外照光或加热12030固膜固膜 缓冲液缓冲液1洗膜（洗膜（100mM马来酸，马来酸，150mM NaC1，pH7.5）缓冲液缓冲液2（1%阻断剂，缓冲液阻断剂，缓冲液1配）配）30 抗抗DIG一碱性磷酸酶一碱性磷酸酶1：5000，孵育，孵育30 缓冲液缓冲液1洗膜洗膜 缓冲液缓冲液3浸浸2(100mM Tris-HC1100mM NaC1

12、，50mM MgC12，pH9.5）显色液（显色液（NBT：BCIP，9:7），作用），作用0.516h 缓冲液缓冲液3洗膜洗膜原位PCR显示肝炎肝细胞内 HCV阳性宫颈癌癌细胞内p53的表达3.mRNA检测检测 (敏感性较敏感性较Northern blot低，可精确到细胞水平低，可精确到细胞水平)原位杂交显原位杂交显示肾小球系示肾小球系膜细胞及肾膜细胞及肾小管上皮细小管上皮细胞胞TIMP-2阳性阳性荧光原位杂交荧光原位杂交-Fluorescence In Situ Hybridization原理原理采用荧光标记的DNA探针，利用探针与被检测样本DNA碱基对的互补性，在探针与样本的DNA 杂交

13、后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞，组织样本中的染色体异常。“钓鱼钓鱼”技术技术 探针是一段探针是一段荧光标记的核酸荧光标记的核酸（DNA）片段，被用作寻找）片段，被用作寻找另一互补另一互补DNA(靶标）的指示。靶标）的指示。DNA靶标可能是一个特异性靶标可能是一个特异性 条带、一个基因、一个染条带、一个基因、一个染色体片段或一个完整染色体色体片段或一个完整染色体探针（探针（probe)及靶标（及靶标（target)适用于间期适用于间期FISH的标本的标本 石蜡切片石蜡切片 分离细胞核分离细胞核 肿瘤组织的印片肿瘤组织的印片 细胞离心涂片细胞离心涂片 血液或骨髓涂片血液或骨

14、髓涂片 细胞爬片或切片细胞爬片或切片FISHFISH探针的类型探针的类型 全染色体涂抹探针全染色体涂抹探针 （WCPWCP）染色体计数（着丝粒）探针（染色体计数（着丝粒）探针（CEPCEP）位点特异性探针（位点特异性探针（LSILSI）双色分离重排探针双色分离重排探针 双色双融合易位探针双色双融合易位探针 xyxx子宫颈癌研究最新进展子宫颈癌研究最新进展中国医学论坛报中国医学论坛报/2008年年/12月月/4日日/第第B03版版IGCS2008会议报道会议报道hTERC扩增诊断宫颈癌及癌前病变扩增诊断宫颈癌及癌前病变 目前宫颈癌筛查主要通过宫颈细胞学检查及人乳头状瘤病毒（目前宫颈癌筛查主要通过

15、宫颈细胞学检查及人乳头状瘤病毒（HPVHPV）检测，）检测，但这些方法的临床应用均有一定局限性。今年的研究致力于寻找新的指标来协但这些方法的临床应用均有一定局限性。今年的研究致力于寻找新的指标来协助诊断宫颈癌前病变，尤其是鉴别出高度病变，以提高筛查的准确性和可预测助诊断宫颈癌前病变，尤其是鉴别出高度病变，以提高筛查的准确性和可预测性。人端粒酶性。人端粒酶RNARNA（hTERChTERC）是人端粒酶组分之一，有研究证实，端粒酶激活是）是人端粒酶组分之一，有研究证实，端粒酶激活是HPVHPV整合入宫颈细胞后，上皮内瘤样病变（整合入宫颈细胞后，上皮内瘤样病变（CINCIN）向宫颈癌转化的关键步骤。

16、此）向宫颈癌转化的关键步骤。此次大会口头报告中北京大学人民医院魏丽惠等提交的一项研究颇为引人注目，次大会口头报告中北京大学人民医院魏丽惠等提交的一项研究颇为引人注目，该研究发现，通过荧光原位杂交（该研究发现，通过荧光原位杂交（FISHFISH）检测宫颈细胞学涂片中）检测宫颈细胞学涂片中hTERChTERC基因扩增基因扩增情况，在宫颈癌和癌前病变诊断中具有重要价值。情况，在宫颈癌和癌前病变诊断中具有重要价值。TERC与子宫颈癌级别与子宫颈癌级别国内国内10001000多多例临床实验例临床实验结果结果TERC在临床中的意义在临床中的意义-风险预测风险预测针对针对HPVHPV高危的宫颈癌易感人群高危

17、的宫颈癌易感人群,在常规在常规TCTTCT筛查的基础上筛查的基础上,加做加做TERCTERC基因检测基因检测,可帮助医生判断病人疾病风险可帮助医生判断病人疾病风险 改进的子宫颈癌筛查与诊断手段改进的子宫颈癌筛查与诊断手段对于对于30岁以前岁以前HPV阳性的病人阳性的病人，大多是一过性感染，可用，大多是一过性感染，可用TERC探针进行鉴别诊断。探针进行鉴别诊断。TERC（-）：一过性感染）：一过性感染TERC（+）：有癌变风险，采取治疗措施）：有癌变风险，采取治疗措施对于怀孕期的妇女对于怀孕期的妇女，雌激素可使移行带区的基底细胞出现不典型雌激素可使移行带区的基底细胞出现不典型增生甚至类似原位癌的

18、改变，与宫颈原位癌鉴别困难。但前者在产增生甚至类似原位癌的改变，与宫颈原位癌鉴别困难。但前者在产后能恢复正常。后能恢复正常。TERC（-）：雌激素引起，无需治疗，产后自然恢复正常）：雌激素引起，无需治疗，产后自然恢复正常TERC（+）：高度怀疑原位癌，密切随诊，产后六周进行相应治）：高度怀疑原位癌，密切随诊，产后六周进行相应治疗疗案治疗案治疗原位癌原位癌术后复查术后复查FISHFISH检测检测TERCTERC基因的结果判读：基因的结果判读：标本为新鲜宫颈细胞制片：标本为新鲜宫颈细胞制片：阈值建立阈值建立采集采集2020例正常人宫颈细胞。例正常人宫颈细胞。阈值测定：每例分析至少阈值测定：每例分析

19、至少100100个细胞，统计出现个细胞，统计出现2 2个以上个以上TERCTERC信号细胞信号细胞数目的百分比。数目的百分比。阈值阈值=平均数（平均数（M M）+3X+3X标准差（标准差（SDSD）结果判断结果判断每例样本随机计数细胞（至少每例样本随机计数细胞（至少100100个），如果检测值大于阈值，判定为个），如果检测值大于阈值，判定为阳性结果；如果检测值小于阈值，判定为阴性结果；如果检测值等于阳性结果；如果检测值小于阈值，判定为阴性结果；如果检测值等于阈值，加大观测样本细胞数目。阈值，加大观测样本细胞数目。标本为组织石蜡切片：标本为组织石蜡切片：连续连续3 3个细胞出现个细胞出现2 2个

20、以上个以上TERCTERC信号，即判为阳性。信号，即判为阳性。FISHFISH检测检测Her-2Her-2基因扩增基因扩增Her-2基因扩增模式基因扩增模式随访终点指标随访终点指标淋巴瘤的诊断和治疗淋巴瘤的诊断和治疗 对病理医生和临床医生的挑战对病理医生和临床医生的挑战l 淋巴瘤的分类复杂（淋巴瘤的分类复杂（20082008年年WHOWHO分类）分类）l 不同类型的淋巴瘤有着不同的预后，需要不同的治疗；不同类型的淋巴瘤有着不同的预后，需要不同的治疗；l 即使是相同类型的肿瘤，由于携带不同的分子遗传学异即使是相同类型的肿瘤，由于携带不同的分子遗传学异 常，对治疗的反应也可能不同常，对治疗的反应也

21、可能不同;l 多数淋巴瘤综合临床特征、组织形态学、免疫表型特征多数淋巴瘤综合临床特征、组织形态学、免疫表型特征 可得到正确诊断可得到正确诊断;l 分子遗传学的检测可以提供更多普通病理学检查所不能分子遗传学的检测可以提供更多普通病理学检查所不能 提供的信息。提供的信息。临床特征临床特征形态学形态学免疫表型免疫表型分子遗传学分子遗传学 淋巴瘤诊断淋巴瘤诊断 临床特征、临床特征、形态学、免疫表型及分子遗传学相结合形态学、免疫表型及分子遗传学相结合淋巴瘤常见的染色体易位及所累及基因淋巴瘤常见的染色体易位及所累及基因FISH检测淋巴瘤分子遗传学异常的常用探针检测淋巴瘤分子遗传学异常的常用探针双色分离重排

22、探针双色分离重排探针（Dual Color Break Apart Rearrangement ProbeDual Color Break Apart Rearrangement Probe）双色双融合易位探针双色双融合易位探针（Dual ColorDual Color，Dual Fusion Translocation Probe Dual Fusion Translocation Probe）染色体计数探针染色体计数探针（Chromosome enumeration probe,CEPChromosome enumeration probe,CEP）切片准备：选择切片准备：选择杂交区域，杂

23、交区域，脱蜡水化、酶消化、脱蜡水化、酶消化、脱水干燥脱水干燥 变性、杂交变性、杂交洗涤、封片洗涤、封片观察：荧光显微镜。观察：荧光显微镜。间期间期FISHFISH方法方法双色分离重排探针双色分离重排探针（BCL2）正正常常分分离离基因拷贝数增加基因拷贝数增加正正常常融融合合基因拷贝数增加基因拷贝数增加双色融合易位探针双色融合易位探针(IGH/BCL2）正常正常染色体数目增加染色体数目增加染色体着丝粒探针染色体着丝粒探针（2 2号染色体，橙色）号染色体，橙色）l有助于诊断、分类有助于诊断、分类 通过特异性遗传学异常来确定淋巴瘤的类通过特异性遗传学异常来确定淋巴瘤的类型型l判定预后、指导治疗判定预

24、后、指导治疗 FISH检测淋巴瘤分子遗传学异常的意义检测淋巴瘤分子遗传学异常的意义间期间期FISHFISH在在淋巴瘤中的应用举例淋巴瘤中的应用举例 侵袭性成熟侵袭性成熟B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 小细胞性小细胞性B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 外周外周T T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 B B淋巴母细胞性淋巴瘤淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病白血病l Burkitt Burkitt淋巴瘤淋巴瘤(BL)(BL)t(8q24)/t(8q24)/IG-cMYCIG-cMYCl 具有介于弥漫大具有介于弥漫大B B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之间特征的不能分细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之间特征的不能分 类的类的B B细胞淋巴瘤细

25、胞淋巴瘤(Intermediate BL/DLBCL)(Intermediate BL/DLBCL)（Double-hit）t(8 q24)/nont(8 q24)/nonIG-IG-c cMYCMYC（35-50%35-50%）t(14;18)(q32;q21)/t(14;18)(q32;q21)/IGH-BCL2IGH-BCL2 （15%15%）t(3 q27)/t(3 q27)/BCL6-IGHBCL6-IGH （少）（少）l 弥漫性大弥漫性大B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤(DLBCL)(DLBCL)（Double-hit）t(8q24)/t(8q24)/IGIG(nonIGnonIG)-c

26、MYC cMYC（10%10%）t(3q27)/BCL6 t(3q27)/BCL6（30%30%）t(14;18)(q32;q21)/t(14;18)(q32;q21)/IGH-BCL2IGH-BCL2 （20-30%20-30%）t(3;14)(p14;q32)/t(3;14)(p14;q32)/FOXP1-IGHFOXP1-IGH（3%3%）侵袭性成熟侵袭性成熟B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤利用利用FISH检测以上检测以上三个类型三个类型淋巴瘤的分子遗传学淋巴瘤的分子遗传学异常，通常使用以下探针：异常，通常使用以下探针：双色分离重排探针：双色分离重排探针：IGHIGH、C-MYCC-MYC、BCL

27、2BCL2、BCL6BCL6 双色双融合易位探针：双色双融合易位探针：IGH/C-MYCIGH/C-MYC 侵袭性成熟侵袭性成熟B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤IGH/C-MYCC-MYCIGHBCL2BCL6IGH多拷贝、断多拷贝、断裂、部分丢失裂、部分丢失DLBCLDLBCL复杂的分子遗传学改变复杂的分子遗传学改变MALT1扩增扩增BCL2BCL2MALTMALT淋巴瘤淋巴瘤常见分子遗传学异常常见分子遗传学异常 t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1 t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1*t(1;14)(p22;q32)/IGH-BCL10 t(1;14)(

28、p22;q32)/IGH-BCL10 t(14;18)(q32;q21)/IGH-MALT1 t(14;18)(q32;q21)/IGH-MALT1滤泡性淋巴瘤滤泡性淋巴瘤常见分子遗传学异常常见分子遗传学异常 t(14;18)(q32;q21)/IGH-BCL2 t(14;18)(q32;q21)/IGH-BCL2套细胞淋巴瘤套细胞淋巴瘤常见分子遗传学异常常见分子遗传学异常 t(11;14)(q13;q32)/IGH-CCND1 t(11;14)(q13;q32)/IGH-CCND1小细胞性小细胞性B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 利用利用FISH检测以上检测以上小细胞性淋巴瘤小细胞性淋巴瘤的分子遗

29、传学异的分子遗传学异常，通常使用以下探针：常，通常使用以下探针：l双色分离重排探针双色分离重排探针 MALT1 MALT1、IGHIGH、CCND1CCND1、BCL2BCL2、BCL10 BCL10；l双色双融合易位探针双色双融合易位探针:IGH/CCND1 IGH/CCND1、IGH/BCL2IGH/BCL2、MALT1/API2 MALT1/API2、IGH/BCL10IGH/BCL10l染色体计数探针染色体计数探针 CEP3 CEP3、CEP18CEP18。小细胞性小细胞性B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 MALTMALT淋巴瘤淋巴瘤t(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1t

30、(11;18)(q21;q21)/API2-MALT1API2/MALT1MALT1BCL2IGH/BCL2IGHIGHCCND1IGH/CCND1具有特征性分子遗传学异常的具有特征性分子遗传学异常的成熟成熟T T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤：lALK+ALK+间变性大细胞淋巴瘤间变性大细胞淋巴瘤 t(2p23)/t(2p23)/ALK-NPM(X)ALK-NPM(X)l外周外周T T细胞淋巴瘤非特殊型细胞淋巴瘤非特殊型 t(5;9)(q33;q22)/ITK-SYK t(5;9)(q33;q22)/ITK-SYK 成熟成熟T T细胞淋巴细胞淋巴瘤瘤利用利用FISHFISH检测以上两个类型淋巴瘤的分子

31、检测以上两个类型淋巴瘤的分子遗传学异常，通常使用以下探针：遗传学异常，通常使用以下探针：l 双色分离重排探针双色分离重排探针 ALK ALKl 染色体计数探针染色体计数探针 CEP2 CEP2、CEP10CEP10l 双色双融合易位探针双色双融合易位探针 ITK-SYK ITK-SYK 成熟成熟T T细胞淋巴细胞淋巴瘤瘤B B淋巴母细胞性淋巴瘤淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病白血病1 1、B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤，非特殊类型淋巴瘤，非特殊类型2 2、B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤伴重现性遗传学异常淋巴瘤伴重现性遗传学异常B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋

32、巴瘤伴淋巴瘤伴t(9;22)(q34;q11.2);BCR-ABL1t(9;22)(q34;q11.2);BCR-ABL1B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤淋巴瘤伴伴t(v;11q23);MLLt(v;11q23);MLL重排重排B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤淋巴瘤伴伴t(12;21)(p13;q22);TEL-AML1(ETV6-RUNX1)t(12;21)(p13;q22);TEL-AML1(ETV6-RUNX1)B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤伴超二倍体淋巴瘤伴超二倍体B B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤伴亚二倍体淋巴瘤伴亚二倍体B B

33、淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤伴淋巴瘤伴t(5;14)(q31;q32);IL3-IGHt(5;14)(q31;q32);IL3-IGHB B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤伴淋巴瘤伴t(1;19)(q23;p13.3);E2A-PBX1(TCF3-PBX1)t(1;19)(q23;p13.3);E2A-PBX1(TCF3-PBX1)预后因素预后因素 预后好者预后好者 超二倍体（超二倍体（+4,+10,and+17+4,+10,and+17）及及t(12;21)t(12;21)/TEL-AML1 TEL-AML1 预后差者预后差者 11q23(MLL)11q23(MLL)重排

34、重排 预后极差者预后极差者 亚二倍体亚二倍体 (45 chromosomes)或或 t(9;22)(BCR/ABL)其它其它B B淋巴母细胞性淋巴瘤淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病白血病利用利用FISHFISH检测检测以上类型淋巴瘤的分子遗传以上类型淋巴瘤的分子遗传学异常，通常使用以下探针：学异常，通常使用以下探针：染色体计数探针：染色体计数探针：CEP4;CEP10;CEP17 CEP4;CEP10;CEP17双色分离重排探针：双色分离重排探针：MLL MLL双色双融合易位探针：双色双融合易位探针：BCR/ABL;TEL/AML1;BCR/ABL;TEL/AML1;B B淋巴母细胞性淋巴瘤淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病白血病1 1）简单易行，简单易行，可以与形态学对照。可以与形态学对照。2 2）敏感性高、特异性强敏感性高、特异性强；3 3）材料易于获得）材料易于获得,且节约标本；且节约标本；4 4）节约时间（）节约时间（2323天）。天）。5 5）好的探针是保证。每个探针都要建立）好的探针是保证。每个探针都要建立cut-off cut-off 值。值。间期间期FISHFISH的特点的特点