蛋白电泳在消化系统疾病中的临床应用课件.ppt

1、蛋白电泳在消化疾病中的应用范围1.肝病-肝炎，肝硬化，肝癌2.消化肿瘤-胰腺癌，食管癌2北京康圣安科技发展有限公司1.慢性病毒性肝炎呈全球性分布，我国的感染者已超出0.4亿。人群感染率达3.2%。病毒性肝炎已成为我国严重的社会和公共卫生问题。目前感染者主要以乙肝和丙肝为主3北京康圣安科技发展有限公司实验诊断肝功能检查：血清白蛋白降低，球蛋白升高，及血清蛋白电泳密切相关。4北京康圣安科技发展有限公司电泳图谱-肝脏肝脏是血清蛋白合成的主要器官白蛋白GammaBetaAlpha-2Alpha-1电泳图谱-慢性炎症血清蛋白电泳图谱常见类型图谱类型图谱类型 总蛋白总蛋白Alb 1 2 低蛋白血症 N N

2、 N NN /N 慢性炎症型 弥漫性肝损害N 肝硬化N N N-桥肾病 不定 弥漫宽球蛋白血症型N M蛋白血症型 在2-区出现异常峰高2（）球蛋白血症 妊娠（高型）N N 蛋白质缺陷个别区带出现特征性缺乏 西京医院文献报道8西京医院实验数据病例说明9慢性肝炎及血清蛋白电泳的密切关系 总结乙型肝炎血清蛋白电泳的变化图谱特征，在国内外报道很少，第四军医大学附属西京医院检验科多年前最早开展实验，具体如下：共收集了：乙型肝炎患者：64例，年龄18-36岁；甲型肝炎患者：48例，年龄17-58岁；健康体检者：52例，年龄20-51岁 以上均为临床确诊的患者。10西京医院最后结论西京医院最后结论p乙肝：乙

3、肝：64例结果，血清白蛋白，例结果，血清白蛋白，a1球蛋白低于正常值；特球蛋白低于正常值；特别是白蛋白降低最明显；其它区带均高于正常值。别是白蛋白降低最明显；其它区带均高于正常值。p 表明：乙型肝炎干细胞内质网损害严重，合成白蛋白，表明：乙型肝炎干细胞内质网损害严重，合成白蛋白，a1 球蛋白功能降低。球蛋白功能降低。p甲肝：甲肝：48例结果及正常人组相比，例结果及正常人组相比，Y球蛋白升高，其它差球蛋白升高，其它差异不显著。表明：甲肝肝功能损害较轻，提示预后良好。异不显著。表明：甲肝肝功能损害较轻，提示预后良好。p诊断价值：西京医院认为，血清蛋白电泳图谱分析有助于诊断价值：西京医院认为，血清蛋

4、白电泳图谱分析有助于判断乙型肝炎的肝病转化程度，是临床观察乙型肝炎变化判断乙型肝炎的肝病转化程度，是临床观察乙型肝炎变化的重要指标，对预后判断有重要价值。的重要指标，对预后判断有重要价值。p鉴别诊断价值：乙肝：白蛋白，鉴别诊断价值：乙肝：白蛋白，a1球蛋白下降明显球蛋白下降明显p 甲肝：除甲肝：除Y区，各区带及正常健康人接近区，各区带及正常健康人接近p 结论：血清蛋白电泳还可作为结论：血清蛋白电泳还可作为 甲肝，乙型肝炎诊断及鉴甲肝，乙型肝炎诊断及鉴别诊断的一项客观指标。别诊断的一项客观指标。p 112.肝硬化肝硬化定义：不同病因长期作用于肝脏，引起慢性，进行性，弥漫性肝病的终末阶段。特征：肝

5、脏纤维组织弥漫性增生，形成再生结节和假小叶，导致正常结构和血液供应遭到破坏。发病率统计：在我国为消化系统常见病，也是后果严重的疾病。主要累及20-50岁男性。城市男性50-60岁肝硬化的病死率高达112/10万。按病因分类：1.病毒性肝炎肝硬化2.酒精性肝硬化3.胆汁淤积性肝硬化4.药物或毒物性肝硬化5.血液循环障碍型肝硬化6.代谢性肝硬化7.自身免疫性肝硬化12北京康圣安科技发展有限公司血清蛋白电泳在肝硬化中的重要价值肝脏是合成白蛋白的唯一场所血清蛋白电泳可显示：白蛋白降低，Y球蛋白升高，B球蛋白轻度升高。电泳图谱中会形成特异的B-Y桥截止到目前为止：血清蛋白电泳是肝硬化早期唯一特异性最强的

6、指标。此外：肝硬化中腹水，铜蓝蛋白，转铁蛋白均在血清蛋白电泳中会有所体现。13北京康圣安科技发展有限公司电泳图谱-肝病N P电泳图谱-肝硬化Beta-Gamma 桥 beta 区：多克隆Ig A gamma 区：多克隆IgG 北京解放军302医院报道结论：血清蛋白和免疫固定电泳对肝硬化和肝癌的诊断，鉴别诊断，病情发展的判断，疗效及预后的观察都有着重要的意义。16肝癌和肝硬化的鉴别诊断肝癌血清蛋白电泳图谱特点：白蛋白降低A1,a2,y球蛋白均明显升高肝硬化血清蛋白电泳图谱特点：白蛋白降低，a1球蛋白降低B,Y球蛋白升高，并形成“桥连”现象。17其它医院报道 北京天坛医院北京天坛医院-检验科检验科

7、-康熙雄康熙雄-肝硬化的临床路肝硬化的临床路径：肝损害的筛查要进行血清蛋白电泳和免疫径：肝损害的筛查要进行血清蛋白电泳和免疫固定电泳。固定电泳。北大人民医院北大人民医院-检验科检验科-贾玫贾玫-白蛋白异常的解白蛋白异常的解读：明确指出肝癌及肝硬化早期要用蛋白电泳读：明确指出肝癌及肝硬化早期要用蛋白电泳技术来筛检。技术来筛检。18北京康圣安科技发展有限公司3.酒精肝广义分类：酒精性脂肪肝酒精性肝炎酒精性肝纤维化酒精性肝硬化血清蛋白电泳：主要体现在白蛋白降低，a2，B球蛋白会下降。(附湖南省人民医院检验科文献报道）内科学教材（8年制）：明确提到血清糖缺陷转铁蛋白（CDT）是酒精肝比较特异且敏感的指

8、标。毛细管电泳可以测定。19湖南省人民医院报道20北京康圣安科技发展有限公司具体实验数据21北京康圣安科技发展有限公司结论酒精性肝炎时：血清蛋白电泳中白蛋白明显下降，酒精性肝炎时：血清蛋白电泳中白蛋白明显下降，a2a2，B B球蛋白都较正常显著下降。球蛋白都较正常显著下降。Y Y球蛋白明显上升。球蛋白明显上升。22北京康圣安科技发展有限公司4.脂肪肝脂蛋白电泳：可分为5个脂蛋白电泳条带，对脂肪肝的特异诊断很有帮助。23北京康圣安科技发展有限公司5.食管癌24北京康圣安科技发展有限公司华西医院结论目前业内已证明食管癌患者的免疫功能，尤其以细胞免疫功能为主，但对于体液免疫功能及时相性蛋白关注很少。

9、食管癌患者经过我院44例住院病人的详细实验，具体如下：患者的免疫球蛋白会明显升高，CRP会明显升高，转铁蛋白和前白蛋白会明显下降。（注：负时相反应蛋白，评价营养状况的指标，主要分布在电泳区带的B区域）结论：免疫球蛋白及CRP,TRF,PAB可以对患者的免疫状态，营养状况及应激状况进行综合评价，为医生选择治疗方法做出辅助判断，最终提高患者的生存期及生活质量。25北京康圣安科技发展有限公司食管癌中涉及到的电泳区带Alb12白蛋白白蛋白1抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 触珠蛋白触珠蛋白转铁蛋白转铁蛋白IgG前白蛋白前白蛋白1酸性糖蛋白酸性糖蛋白 铜蓝蛋白铜蓝蛋白C3a、C3bCRP1脂蛋白脂蛋白抗糜蛋白酶抗糜

10、蛋白酶2巨球蛋巨球蛋白白IgA、IgM、IgD、纤维蛋白原、纤维蛋白原、1脂蛋白、血凝素脂蛋白、血凝素正常血清蛋白电泳图谱白蛋白GammaBetaAlpha-2Alpha-1-+胰腺癌北京协和医院：消化内科报道IgG4,pam4等有望成为最特异的胰腺癌诊断指标，但一直在摸索讨论中，待定。28北京康圣安科技发展有限公司消化疾病诊断中涉及到的电泳项目消化疾病诊断中涉及到的电泳项目1.血清蛋白电泳2.免疫固定电泳 蛋白电泳技术的变迁滤纸电泳滤纸电泳醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳凝胶电泳凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳临床临床聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳科研科研毛细管电泳毛细管电泳电

11、泳技术的革命电泳技术的革命琼脂糖电泳技术原理琼脂糖电泳技术原理琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的凝胶电泳，其分析原理及其它支持物电泳的最主凝胶电泳，其分析原理及其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有要区别是：它兼有“分子筛分子筛”和和“电泳电泳”的双重的双重作用。作用。在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅依赖于净电在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大地提高了分辨能力。大大地提高了分辨能力。正常血清蛋白电泳图谱白蛋白GammaBetaAlpha-2Alpha-

12、1-+gba2白蛋白白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,a1抗胰蛋白酶:结合珠蛋白,a2 巨球蛋白,a脂蛋白,铜蓝蛋白:转铁蛋白,血液结合素,C3补体,b脂蛋白:免疫球蛋白内容：血清蛋白电泳包含的区带血清蛋白电泳图谱分析p白蛋白：主要成分为白蛋白白蛋白：主要成分为白蛋白p1-球蛋白：球蛋白：p 主要是主要是1抗胰蛋白酶和抗胰蛋白酶和1酸性糖蛋白。酸性糖蛋白。p 1抗胰蛋白酶是具有蛋白酶抑制作用的一种急抗胰蛋白酶是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白。性时相反应蛋白。p1酸性糖蛋白在急性时相反应时，及酸性糖蛋白在急性时相反应时，及1抗胰蛋抗胰蛋白酶同时增高，在严重肝损害、肾病综合症时白酶同时增高，在

13、严重肝损害、肾病综合症时降低。降低。血清蛋白电泳图谱分析p 2-球蛋白：球蛋白：p主要为结合珠蛋白和主要为结合珠蛋白和2-巨球蛋白。巨球蛋白。p 结合珠蛋白及血红蛋白结合成一稳定的复合结合珠蛋白及血红蛋白结合成一稳定的复合物，以防止血红蛋白从肾小球排出，既贮存了物，以防止血红蛋白从肾小球排出，既贮存了铁，又保护肾小管免受游离血红蛋白损伤。铁，又保护肾小管免受游离血红蛋白损伤。p-球蛋白：球蛋白：p 以以脂蛋白、转铁蛋白和血红素结合蛋白为脂蛋白、转铁蛋白和血红素结合蛋白为主。还包括补体成分。主。还包括补体成分。血清蛋白电泳图谱分析球蛋白：球蛋白：主要为各种类型的免疫球蛋白；主要为各种类型的免疫球

14、蛋白；免疫球蛋白由免疫球蛋白由4 4条肽链组成，条肽链组成，轻链轻链2 2条条,重链重链2 2条，电泳时主要处于条，电泳时主要处于区，区，少数在少数在区，因此免疫球蛋白又称为区，因此免疫球蛋白又称为球蛋白。球蛋白。免疫球蛋白免疫球蛋白 免疫球蛋白是机体的正常生理免疫球蛋白是机体的正常生理成分，机体保持一定水平。当这种正常水成分，机体保持一定水平。当这种正常水平打破时，则属于疾病，增多或减少则意平打破时，则属于疾病，增多或减少则意味着免疫增殖病或免疫缺陷病味着免疫增殖病或免疫缺陷病 电泳图谱-急性炎症P N电泳图谱-慢性炎症血清蛋白电泳图谱常见类型图谱类型图谱类型 总蛋白总蛋白Alb 1 2 低

15、蛋白血症 N N N 急性炎症/急性时相反应 NN /N 慢性炎症型 弥漫性肝损害N 肝硬化N N N-桥肾病 不定 弥漫宽球蛋白血症型N M蛋白血症型 在2-区出现异常峰高2（）球蛋白血症 妊娠（高型）N N 蛋白质缺陷个别区带出现特征性缺乏 M蛋白？蛋白？什么类型？什么类型？G A M kappa lambda免疫固定电泳技术操作免疫固定电泳（免疫固定电泳（IFE）包括琼脂糖凝胶电泳和）包括琼脂糖凝胶电泳和免疫沉淀两个过程，具体操作要点包括：免疫沉淀两个过程，具体操作要点包括：琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳-免疫沉淀免疫沉淀-显色显色 血清免疫固定电泳ELP 泳道泳道:固定液固定液G 泳道：

16、泳道：抗抗 IgG 重链抗血清重链抗血清A 泳道：泳道：抗抗 IgA 重链抗血清重链抗血清M 泳道：泳道：抗抗 IgM 重链抗血清重链抗血清K 泳道：泳道：抗抗 轻链抗血清轻链抗血清L 泳道：泳道：抗抗 轻链抗血清轻链抗血清仪器：仪器：Sebia Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪琼脂糖凝胶电泳仪 试剂：免疫固定电泳试剂试剂：免疫固定电泳试剂灵敏度：灵敏度：125mg/L125mg/L正常血清确认确认IgM IgM 型型M M蛋白蛋白血清蛋白免疫固定电泳应用举例（1）IF在在区区 发现疑似发现疑似M M蛋蛋白白 确认确认IgMIgM+IgM +IgM 型型 双克隆双克隆M M蛋白蛋白在在区发现疑似双克隆区发现疑似双克隆M M蛋白蛋白IF血清蛋白免疫固定电泳应用举例（2）何时进行免疫固定电泳检测