艾滋病梅毒丙肝的检测及解释学习课件.ppt

1、艾滋病梅毒丙肝的检验及意义 1实验室检测实验室检测2 检测样本检测样本 抗体抗体 酶免血清酶免血清/血浆，尿液血浆，尿液 快速检测血清快速检测血清/血浆血浆/全血，唾液全血，唾液 4 4：抗凝全血：抗凝全血 病载、基因型、耐药：血浆病载、基因型、耐药：血浆 3样本保存样本保存 抗体检测：短期（抗体检测：短期（1 1周）内进行检测的可存放于周）内进行检测的可存放于2 288，一周以上应存放于一周以上应存放于-20-20以下。以下。筛查阴性样品，建议至少保存筛查阴性样品，建议至少保存1 12 2个月；个月；筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩余的样品保存

2、至少余的样品保存至少1010年年 核酸检测：血浆核酸检测：血浆4 4天内进行检测的可存放于天内进行检测的可存放于44，3 3个月以内应存放于个月以内应存放于-20-20以下，以下，3 3个月以上应置于个月以上应置于-7070以下。以下。4 4：室温（：室温（18182525）保存和运输。要求）保存和运输。要求4848小时内小时内染色，染色后染色，染色后6 6小时内分析；如采血后小时内分析；如采血后2424小时内染小时内染色，可在染色后色，可在染色后2424小时内分析。小时内分析。4抗体检测抗体检测 筛查试验筛查试验 酶联免疫吸附试验（）酶联免疫吸附试验（）化学发光或免疫荧光试验化学发光或免疫荧

3、光试验 快速检测（）快速检测（）确证试验确证试验 免疫印迹试验（）免疫印迹试验（）条带免疫试验条带免疫试验 放射免疫沉淀试验（）放射免疫沉淀试验（）免疫荧光试验（）免疫荧光试验（）5初筛和复检流程初筛和复检流程 样品样品初筛试验初筛试验筛查试剂筛查试剂阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应复检试验复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验确证试验报告阴性图图1 1 HIVHIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程6确证流程确证流程 7 质量控制质量控制 试剂盒内部对照试剂盒内部对照 ：按照试剂盒要求设置：按照试剂盒要求设置 使用室内质

4、控品：外购、阳性对照使用室内质控品：外购、阳性对照/样本稀释样本稀释 检测检测 20 20次内次内即刻法质控即刻法质控 20 20次后，次后，质控图质控图 更换试剂厂家必须重新制作质控图，更换试剂厂家必须重新制作质控图，同种试剂不同批号可继续使用（注明批号）同种试剂不同批号可继续使用（注明批号）发现失控、位移及时查找原因，必要时重新开始质控发现失控、位移及时查找原因，必要时重新开始质控 快速检测快速检测 更换批号进行质量验证更换批号进行质量验证 注意反应时间、温度、数量控制注意反应时间、温度、数量控制8设备检定、维护设备检定、维护 强检设备强检设备 酶标仪、移液器、高压锅、温度计（可自行比酶标

5、仪、移液器、高压锅、温度计（可自行比对）对）自行维护自行维护 生物安全柜、洗板机、洗眼器、水平（梅毒）生物安全柜、洗板机、洗眼器、水平（梅毒）旋转仪旋转仪 温度控制温度控制 冰箱、温箱冰箱、温箱/水浴箱内放置经检定（比对）的温水浴箱内放置经检定（比对）的温度计度计 高压灭菌放置指示卡高压灭菌放置指示卡 洗眼器定期进行维护洗眼器定期进行维护9文件文件（1 1）样品的接收、登记、处理、保存和运输；）样品的接收、登记、处理、保存和运输；（2 2）检测方法和步骤；）检测方法和步骤；（3 3）试剂使用和保存；）试剂使用和保存；（4 4）仪器的使用维护和校准；）仪器的使用维护和校准；（5 5）质量控制要求

6、及程序；）质量控制要求及程序；（6 6）结果解释与报告；）结果解释与报告；（7 7）保密程序；）保密程序；（8 8）实验室数据、相关文件记录与保存；）实验室数据、相关文件记录与保存；（9 9）不确定样品追踪和处理；）不确定样品追踪和处理；（1010）实验室安全防护及实验室的清理和消毒。）实验室安全防护及实验室的清理和消毒。10实验室记录实验室记录 检测登记表检测登记表 试验原始记录（试验原始记录（、快速、快速、）报告单报告单/化验单化验单 复检化验单复检化验单筛查阳性填写，信息收集完整筛查阳性填写，信息收集完整 仪器使用、维护保养记录仪器使用、维护保养记录 质控资料质控资料 消毒记录消毒记录

7、废弃物处理登记废弃物处理登记 冰箱温度记录冰箱温度记录 人员健康档案（体检、疫苗接种记录，化验单、体检报告）人员健康档案（体检、疫苗接种记录，化验单、体检报告）11实验室生物安全实验室生物安全 实验室：实验室：级生物安全实验室（级生物安全实验室（2 2）建立安全制度：、意外事故处理预案、信建立安全制度：、意外事故处理预案、信息安全及保密制度息安全及保密制度 培训和管理：全员培训、标准防护原则培训和管理：全员培训、标准防护原则 个人防护：防护用品与设施、健康监护个人防护：防护用品与设施、健康监护 安全操作：样品采集与管理、仪器设备使安全操作：样品采集与管理、仪器设备使用、利器使用用、利器使用 消

8、费与污物处理消费与污物处理 12梅毒实验室检测技术梅毒实验室检测技术13梅毒螺旋体梅毒的病原梅毒螺旋体梅毒的病原体体分类：分类：螺旋体目（）螺旋体科（）密螺旋体属（）苍白螺旋体种（）分几个亚种14梅毒螺旋体（）梅毒螺旋体（）小而纤细的螺旋状微生物 长520m，粗细44年虽已无性传播，年虽已无性传播，但妊娠时仍可传染给胎儿但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性病期越长，传染性越小越小;21常用梅毒实验室检测方法 病原学检测病原学检测 血清学检测血清学检测22病原学检查原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边

9、缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：（1）暗视显微镜检查 （2）镀银染色法 （3）核酸检测（血液标本？）注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。23病原学检查的临床意义螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。24梅毒血清学检测方法(1)(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2)(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。问题：为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检

10、测方法？25非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）。未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。问题：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么需要做定性和定量两种检测方法？26非梅毒螺旋体抗原血清学原理方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验()（2）甲苯胺红不加热血清试验（）（3）性病研究实验室试验()等。基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似27非梅毒螺旋体抗原血

11、清学试验原理示意图28非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪，转速？转、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？幅？2、定性试验加样：吸取0.05血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29），亮光下观察结果？滴，1滴=？29非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪，转速、转、仪器：水平旋转仪，转速、转幅幅 2、定性试验加样：吸取0.05血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 -29），亮光下观察结

12、果60滴，1滴=17100约1830非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开加样：吸取50血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。下同定性试验。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:51231非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点3、定量试验稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开加样：吸取50血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。下同定性试验。1:11:21:41:81:161:321:641:2561:1281:51232 1

13、:16非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断 1:2561:11:21:41:81:161:11:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:321:641:1281:2561:51233非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。34非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征

14、。35非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点假阳性反应技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可排除。生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应采用梅毒螺旋体抗原血清学试验如等进行排除。假阴性反应：前带现象、后带现象血清固定：临床问题36梅毒螺旋体抗原血清学试验原理抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。问题：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？37梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验()梅毒螺旋体血球凝集试验()梅毒酶联

15、免疫吸附试验（）化学发光免疫分析法（）梅毒免疫层析法-梅毒快速检测()荧光螺旋体抗体吸收试验（）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（）38试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。是目前公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。39+明胶颗粒明胶颗粒梅毒抗原梅毒抗原+抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒抗原致敏颗粒血液中抗体血液中抗体抗原抗体凝集抗原抗体凝集试验原理示意图40414+：粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 3+：粒子光滑覆盖大部分底 2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 1+：粒子光滑集聚覆

16、概孔底，周围有一明显细胞环 ：粒子沉集孔底，中央形成一小点 ：粒子紧密沉积孔底中央 试验结果判读a:均为阳性标本41 试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。试验阳性反应。本法可用于大样本血清检测。本法可用于大样本血清检测。化学发光法的临床应用意义基本同化学发光法的临床应用意义基本同化学发光法的敏感性？化学发光法的敏感性？42梅毒免疫层析快速检测方法（全血法）43梅毒免疫层析

17、快速检测方法（血清、血浆法）44梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如等)初筛阳性标本的确证试验，排除 假阳性。不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。不能作为疗效观察的指标。45梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）问题：此结果解释适用于先天（胎传）梅毒吗？问题：此结果解释适用于先天（胎传）梅毒吗？46先天（胎传）梅毒的实验室诊断预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案47梅毒暴露婴儿的评估梅毒暴露婴儿：婴儿检测不能使用脐带血，因其易被母体血液污染，从而出现假阳性结果检查先天梅毒临床表现：非免疫性水肿、黄疸、肝脾大、鼻炎、皮疹

18、、末端肢体假性麻痹对可疑病灶或体液进行暗视野显微镜检查48先天梅毒的实验室检测梅毒暴露婴儿：暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性梅毒螺旋体抗体阳性*检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上监测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升满18月龄后，检测阳性（哪一类抗体？）*抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒49梅毒抗体（）抗体的产生是感染后的早期体液免疫应答反应。分子比较大，所以抗体不能通过胎盘屏障。而母亲的抗体可以通过胎盘屏障传给胎儿。因此若在新生儿血中检测到抗体不能作为先天梅毒的诊断依据，而抗体可为先天梅毒的诊断依据。抗体检测其特异性较高，抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒。但敏感

19、性较低，因此，抗体检测阴性，不能排除先天梅毒感染。50先天梅毒检测流程 婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测梅毒暴露婴儿母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测组织或分泌物暗视野显微镜检，有条件进行IgM抗体检测报告母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平报告婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平报告暗视野显微镜检或IgM抗体检测结果阳性阴性或没有梅毒感染的症状有梅毒感染的症状 51梅毒实验室检测策略思考方法选择依据敏感性、特异性（试剂评估）操作流程（可及性）试剂的价格、结果时间（可接收性）根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。？初筛目

20、的和方法选择？初筛目的和方法选择525354阳性 梅毒螺旋体血清试验（ELISA）阴性 报告：ELISA 阴性阴性 阳性 RPR 定性/定量试验 阴性 推荐 TPPA 复检 阳性 报告：ELISA 阳性 RPR 阳性及滴度 果 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阳性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 TPPA 阴性 RPR 阴性 报告：ELISA 阳性 RPR 阴性 果 54血清学检测试剂的种类55的检测及意义56 丙型病毒性肝炎为法定传染性疾病。57,J 1999;31:17-24,2002;36:S35-46 ,J 2004;10:2867-2869感染后感染后2020年年HCV

21、HCV感染感染患者比例患者比例100%100%慢性丙肝慢性丙肝患者比例患者比例 85%85%肝硬化肝硬化患者比例患者比例 10-50%10-50%肝癌肝癌患者比例患者比例 1-23%1-23%丙肝相关丙肝相关死亡率死亡率患者比例患者比例 4-15%4-15%u在全球，丙肝是死亡率第十的传染性疾病在全球，丙肝是死亡率第十的传染性疾病u在中国，丙肝是死亡率第五的传染性疾病在中国，丙肝是死亡率第五的传染性疾病丙肝：丙肝：高危害高危害通常为沉默感染，人体感染通常为沉默感染，人体感染20年、或更长时间无任何症状表现。年、或更长时间无任何症状表现。58丙肝：无预防性疫苗，但可治愈丙肝疾病将是中国的沉重经济

22、负担:1170-2160亿元/年乙型肝炎疫苗的推广，新感染病例显著下降；由于丙型肝炎缺乏有效的预防性疫苗，有可能成为影响人民健康的主要肝脏疾病我国首部丙肝防治指南所指出的，通过聚乙二醇干扰素+利巴韦林，使用足够剂量治疗一年，丙肝的治愈率可以达到七、八成左右，这也是目前国际上丙肝治疗的最佳方案。M,.2009;49:1335745960中国丙肝临床早期筛查亟待加强中国疾病预防控制中心公共卫生监测与信息服务中心，施小明,等.疾病监测 2006;21:493.185/358465/1826100/432数据源自国内30个省(自治区、直辖市)共250家医疗机构，采样15501例，有效样本13714例丙

23、肝是中国漏报率最高的法定传染病丙肝是中国漏报率最高的法定传染病61假阴性和假阳性是困惑抗检测的主要问题间接法自身的缺陷可能出现假阳性和的漏检。采用第2代()和第3代()试剂，假阳性率可达30%抗原位点的选择以及抗原的纯化是影响检测灵敏度和特异性的重要因素；,，某些感染性疾病等引起高浓度的免疫球蛋白造成假阳性（的干扰；高浓度非特异性可吸附到固相载体上或包被的抗原上）超氧化歧化酶干扰厂家之间的灵敏度和特异性存在着一定差异，从而导致抗检测结果不一致；同一厂家的不同批试剂间亦会有较大差异。62 采用间接法检测抗体是评估感染的初筛手段 特异性抗体阳性反映了患者体内病毒存在，一旦抗阳性，终生难以转阴。抗体

24、检测的双抗原夹心法 抗原检测方法的建立 的和抗原在患者体内呈间歇阳性；病毒基因型复杂易变异，基因水平的检测质量不够稳定；重组免疫印迹实验（）被认为是监测的金标准。必须规范实验检测评估和报告体系必须规范实验检测评估和报告体系63公司推出了相应的确认实验重组免疫印迹实验（）。被认为是抗体检测的“金标准”。抗体检测结果不一致的标本，使用确认试剂检测。至少2条特异性条带且为1+的条带反应模式判读为阳性结果。阴性为无特异性反应条带。()2.0(),(),(),(),()3.0()被认为是抗体检测的被认为是抗体检测的“金标准金标准”。64 3.0（，丽珠）（18/36T）3+质控带 (血清加样）核抗原带N

25、S3-1NS3-2NS4NS5 1+质控带(试剂加样)质控带注：1，2，3为阳性样本4为阴性样本万泰 试剂（24T）65 几个月前报告“阳性”，目前报告“阴性”？临界值标本、弱阳性标本，如何处理？产妇发现抗阳性，可以哺乳吗？无输血及血制品史 偶尔在外治疗牙病 三家医院结果为什么不一致？A院“3.5”，B院“弱阳”，C院“阴性”老人内镜术后检查抗阳性，惹上麻烦？问题举例66结果结果“时（时（-）时（）时（+）”（+）、胶体金（）、胶体金（-）”67医院检测（医院检测（-）、而血站检测（）、而血站检测（+）”婴幼儿结果婴幼儿结果“（弱（弱+）”68某方法孕妇多次出现某方法孕妇多次出现“（假（假+）

26、”并非仅仅是孕妇出现并非仅仅是孕妇出现“（假（假+）”69对于不是很强的对于不是很强的“（+）”结果的处结果的处理理出现出现“（+）”结果时的处理方式结果时的处理方式70遇见这样的事情，您不困惑？遇见这样的事情，您不困惑？71二、丙型肝炎病毒实验室检测中的策二、丙型肝炎病毒实验室检测中的策略略72丙型肝炎病毒实验室检测技术规范丙型肝炎病毒实验室检测技术规范2011年年9月月20日颁布实施日颁布实施起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心使用范围：全国所有的丙型肝炎病毒检测实验室解释权：中国疾病预防控制中心实施：卫生部授权，中国疾病预防控制中心发布实施73 在临床诊断中规定了抗体筛查

27、阳性反应后必须进行补充实验（免疫印迹或核酸检测）在临床诊断中引入比值的使用 明确了丙肝检测实验室质量控制74基本原则基本原则1.对于筛查试验阴性样品，不需要做进一步检测，可报告“抗阴性”2.对于筛查试验阳性样品，可选择比值进行补充试验，或非比值的补充试验 a.高比值，可报告“抗阳性”，不需要做补充试验；低比值，应做.此方案适合特定的筛查试剂（已证实高比值，95%补充试验阳性）。b.所有筛查试验阳性标本，均进行；或先作 检测，阴性标本再测75补充实验：免疫印迹试验 检测抗体的检测方法筛查试验 酶联免疫吸附试验 胶体金快速试验 化学发光试验 免疫荧光试验76 临床诊断相关的监测策略和结果报告 1.

28、筛查试验 初筛试验呈阳性反应，不能出具阳性报告，必须进入复检程序，用原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂进行复检77筛查试剂样品阴性反应初筛试验初筛试验阳性反应复检试验复检试验均阴性反应一阴一阳均阳性反应补充试验补充试验原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂报告阴性HCV临床诊断筛查检测流程78样品初筛试验筛查试剂阳性反应阴性反应复检试验原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性抗体筛查检测流程79复检阳性反应样品阳性反应免疫印迹试验免疫印迹试验阴性反应报告阴性HCV补充试验检测流程（补充试验检

29、测流程（1）、）、（3）不确定核酸检测核酸检测阳性反应阴性反应报告不确定报告阳性2.复检呈阳性反应的样品，进行补充试验。80临床诊断补充试验检测流程（临床诊断补充试验检测流程（2 2）仅限于检测方法/试剂给出了特定的阈值（与免疫印迹法比较，其阳性预测值不低于95%）时使用。一般采用比值。说明书中会给出此值。81检测结果的解释（1）82检测结果的解释（2）83补充试验策略检测指标的价值为了出具真实可靠的临床诊断报告，补充实验还是非常有必要进行的。84关于抗原 抗原检测是近几年快速发展起来的一种新的检测指标，与 检测相平行。定量检测可用于疗效评价与预后判断 感染窗口期 免疫功能受损或缺陷的群体未发生血清阳转（如感染者、长期透析的肾病患者、器官移植患者或先天性免疫功能缺陷患者）注意：由于血清中抗原含量很低，用常规的等方法很难检出低滴度的样品。阴性的结果并不能排除现症感染的可能 抗原检测并没有进入临床实验室成为常规检测项目。85现阶段怎么办？现阶段怎么办？加强与临床沟通，交流检测技术特点 利用备注栏，做好解释，如“复检”，建议“病毒核酸”检测；关注标本状况，排除干扰因素 了解历史记录，或与其他检验结果核对 了解病人临床情况86THE END87