致病性大肠埃希氏菌及其检验-课件.ppt
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- 致病性 大肠 埃希氏菌 及其 检验 课件
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1、致病性大肠埃希氏菌及其检验大肠埃希氏菌,俗称大肠杆菌,是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员,每克粪便中约含109个.大肠埃希氏菌随粪便排出后,广泛分布于自然界.水、牛乳及其他食品一旦检出大肠埃希氏菌,即意味着这些物品直接或间接被粪便污染。正常情况下,大肠埃希氏菌不致病,而且还能合成维生素B和维生素K,生产大肠菌素,对机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组织或器官时,可作为条件致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃希氏菌属主要分为五大类,首先根据发病机理分为三大类,1、产毒素型大肠埃希氏菌(ETEC),2、侵袭型大肠埃希氏菌(EIEC)3、肠道致病性大肠埃希
2、氏菌(EPEC)近来又提出另外两类4、出血性大肠埃希氏菌(EHEC)5、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)致病性大肠埃希氏菌中,一般认为能产生耐热ST)和不耐热(LT)肠毒素的两种菌株均可引起人的食物中毒。引起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动物性食品,如乳与乳制品、肉类、水产品等,牛和猪是传播这种病菌、引起中毒的主要原因。1996年7月在日本就发生了大肠杆菌0157型引起的食物中毒,造成9017多人中毒,10人死亡,其原因与生食萝卜苗有关,其中92例并发出血性肠炎及出血性尿毒症。2001年,再江苏、安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌0157:H7食物中毒,造成177人死亡,中毒人数超过2万人。如仔猪黄
3、、白痢、猪水肿病、牛腹泻和败血症等均可由大肠杆菌引起。一、埃希氏菌属生物学特性形态与染色 本属细菌为革兰氏阴性两端钝圆、中等大小的无芽孢杆菌,绝大多数周生鞭毛,能运动,周身还有菌毛,不产生荚膜,某些菌株有荚膜。普通大肠埃希氏菌Escherichia Coli 培养特性 1)需氧及兼性厌氧菌 2)对营养的要求不高,在普通琼脂上就生长良好,在15C-45范围内均可生长,但最适生长温度为37,最适pH为7.2-7.4。3)在普通琼脂平板上培养24小时,可形成圆形、凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小的菌落其菌落与沙门氏菌比较相似,但是,大肠杆菌菌落对光(45角折射)观察可见荧光。4)在肉汤培
4、养基中生长18-24小时变为均匀浑,而后底部出现粘性沉淀物,并伴有臭味。5)在鲜血琼脂平板上生长,有些菌株可见溶血环。6)在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7)在SS琼脂平板上多不生长,少数生长的细菌,也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落;8)在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌落 9)在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色 埃希氏菌在SS琼脂平板上形成红色菌落 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基是肠道细菌的选择培养基,含胆盐、乳糖和pH指示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸,将指示剂变红。(麦康基琼脂,18小时,37)革兰氏阴性杆菌 革兰氏
5、阳性杆菌大肠杆菌扫描电镜照片大肠杆菌透射电镜照片大肠杆菌革兰氏染色照片 大肠杆菌平板菌落照片一、埃希氏菌属生物学特性 生化特性 1)可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气,有些不典型的菌株不发酵或迟缓发酵乳糖;2)不同菌株对蔗糖,卫矛醇、水杨苷发酵结果不一致;3)本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧。4)不产生H2S,不液化明胶,不分解尿素;5)、不能在氰化钾培养基上生长,靛基质试验阳性,V-P试验阴性,不利用枸橼酸盐。后四项生化特性是典型的大肠埃希氏菌,与此不一致的即为非典型大肠埃希氏菌菌。IMViC试验:如IMViC试验为+、+、-、-,且乳糖发酵,表明被检物已有粪便污染,有发生肠道
6、传染病的危险,这是卫生细菌中常用的检测指标。(I:吲哚形成试验,M:甲基红试验,Vi:V-P试验,C:枸橼酸盐利用试验)I-吲哚(indol)试验 色氨酸吲哚玫瑰吲哚 吲哚试剂 M-甲基红(methyl red)实验葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基红 -葡萄糖丙酮酸 甲基红 +V-VP(Voges-Proskauer)试验 葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰红色化合物+胍基化合物 葡萄糖丙酮酸 乙酰甲基甲醇V-VP(Voges-Proskauer)试验 葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰红色化合物+胍基化合物 葡萄糖丙酮酸 乙酰甲基甲醇V-VP(Voges-Proskauer)试验 葡萄糖丙酮酸乙酰甲基
7、甲醇二乙酰红色化合物+胍基化合物 葡萄糖丙酮酸 乙酰甲基甲醇C-枸橼酸盐利用(citrate utilization)试验 利用枸橼酸盐生长+不能利用 -一、埃希氏菌属生物学特性 抵抗力 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强,55经60分钟或60加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月,在温度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感,青霉素对它的作用弱,易产生耐药菌株.一、埃希氏菌属生物学特性 致病性:(1)致病因素 侵袭力:大肠杆菌具有抗原和菌毛,抗原有抗吞噬作用,有抵抗抗体和补体的作用,菌毛能帮助细菌黏附于黏膜表面.有侵袭力的菌株可以侵犯肠道表皮层引起炎症.内毒
8、素:大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性 肠毒素:有两种,不耐热肠毒素(LT),成分可能是蛋白质,加热65经30min即被破坏.LT与霍乱菌肠毒素作用相似,都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化酶,使ATP转变为CAMP,促进肠黏膜细胞的分泌功能,使肠液大量分泌,引起腹泻;耐热肠毒素(ST)无免疫性,耐热,100经10-20min不被破坏,也可使肠道细胞的CAMP水平升高,引起腹泻.LT与ST的比较特性不耐热肠毒素耐热肠毒素分子量较大,73000较小,1500-5000耐热性不耐热耐热免疫原性有无B亚单位受体 肠黏膜GM1神经节苷酯肠黏膜GM1神经节苷酯致病机理活化细胞腺苷酸环化酶,细胞内cAMP含量升高,
9、分泌功能亢进,引起腹泻活化细胞鸟苷酸环化酶,细胞内cGMP含量升高,分泌功能亢进,引起腹泻一、埃希氏菌属生物学特性致病性:(2)所致疾病 肠外感染:泌尿系统感染最常见病原菌。还可引起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。腹泻:产毒素大肠杆菌是婴儿及旅游者腹泻的主要原因;致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因;侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。一、埃希氏菌属生物学特性 血清学特性 大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原(O),鞭毛抗原(H)和荚膜抗原(K)三部分组成。1)O抗原 成分为细胞壁上的糖、类脂和蛋白质复合物,也是细菌的内毒素,热稳定性较强,高压蒸汽处理2小时不被破坏。每一血清型只含有一
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