肿瘤免疫诊断及治疗课件.ppt

1、肿瘤免疫诊断及治疗肿瘤免疫诊断及治疗肿瘤的免疫诊断：通过生化和免疫学技术检测肿瘤抗原、抗肿瘤抗体或通过生化和免疫学技术检测肿瘤抗原、抗肿瘤抗体或其他肿瘤标记物。其他肿瘤标记物。2 肿瘤的免疫诊断包括三个方面：肿瘤的免疫诊断包括三个方面：检查肿瘤标记物质检查肿瘤标记物质 检查特异性抗体检查特异性抗体 检查细胞免疫状态检查细胞免疫状态3 肿瘤标志物的定义：肿瘤标志物的定义：肿瘤标志物肿瘤标志物（tumor marker,TMtumor marker,TM）是指在肿瘤的发生和）是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞

2、反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。一般可以从血或尿中检测。一般可以从血或尿中检测。4 常见的标记物质有：常见的标记物质有：肝癌的甲胎蛋白（肝癌的甲胎蛋白（AFPAFP）结肠癌的癌胚抗原（结肠癌的癌胚抗原（CEACEA）胰腺癌的糖链抗原（胰腺癌的糖链抗原（CA199CA199）前列腺癌的前列腺特异性抗原（前列腺癌的前列腺特异性抗原（PSAPSA）5 是胎儿早期血清中主要的蛋白质。分泌型胚胎抗原，主要是胎儿早期血清中主要的蛋白质。分泌型胚胎抗原，主要由胎肝和卵黄囊产生的糖蛋白。当肝细胞或生殖腺胚胎组由胎肝和卵黄囊产生的糖蛋白。当肝细胞或生

3、殖腺胚胎组织发生恶性病变时，织发生恶性病变时，AFPAFP含量升高含量升高.6 7 糖链抗原（糖链抗原（CA199CA199）（CA19-9CA19-9）在消化道腺癌病人血清中的浓度可明显升高，是）在消化道腺癌病人血清中的浓度可明显升高，是胰腺癌和胆管癌的肿瘤标志物。胰腺癌和胆管癌的肿瘤标志物。参考值参考值 ELISA ELISA法法 03.7 ku/L03.7 ku/L（1 1）胰腺癌胰腺癌(80%95%)(80%95%)、肝癌、胆管癌、胃癌时、肝癌、胆管癌、胃癌时CA19-9 CA19-9 可可明显升高。明显升高。（2 2）急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、胆石症、急性肝炎、急性胰腺炎、胆汁淤

4、积性胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化肝硬化 等等CA19-9CA19-9有不同程度升高。有不同程度升高。（3 3）CA19-9CA19-9、CA50CA50及及CEACEA联合检测可提高阳性检出率联合检测可提高阳性检出率8前列腺特异性抗原前列腺特异性抗原(PSA)血清血清PSA PSA 分子形式：分子形式：复合型复合型PSA(t-PSA)PSA(t-PSA)参考值参考值 4.0 g/L 4.0 g/L F/T F/T比值比值0.250.25游离型游离型PSA(f-PSA)PSA(f-PSA)参考值参考值 1.0 g/L 1.0 g/L （PSAPSA）是一种仅由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白，当正

5、）是一种仅由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白，当正常腺管结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，其血浆中常腺管结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，其血浆中PSAPSA水平升高。正常人血清中水平升高。正常人血清中PSA4ug/LPSA4g t-PSA 4g/L/L判断阳性，则阳性率可达判断阳性，则阳性率可达50%-80%50%-80%。t-PSAt-PSA血清浓度和阳性率血清浓度和阳性率随着病程的进展而增高，因此，随着病程的进展而增高，因此，PSAPSA可作为监测前列腺癌病情可作为监测前列腺癌病情变化和疗效的重要指标。变化和疗效的重要指标。（2 2）前列腺肥大、前列腺炎，也可见前列腺肥大、前列腺炎，也

6、可见t-PSAt-PSA和和f-PSAf-PSA水平轻度升水平轻度升高，必须结合其它检查进行鉴别。高，必须结合其它检查进行鉴别。（3 3）单独使用单独使用t-PSAt-PSA和和f-PSAf-PSA升高来诊断前列腺癌时很难排除前升高来诊断前列腺癌时很难排除前列腺增生症，特别是当列腺增生症，特别是当t-PSAt-PSA在在5 g/L-10 g/L5 g/L-10 g/L时。此时应用时。此时应用t-t-PSAPSA和和f-PSAf-PSA来判断。来判断。t-PSA/f-PSA10%t-PSA/f-PSA25%25%时提示前列腺增生症。其特异性达时提示前列腺增生症。其特异性达90%,90%,正确率正

7、确率80%80%。10 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISA）（Enzyme linked lmmunosorbent Aassay）【原理原理】把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅及抗体或抗原的量

8、成正比。生有色的物质。颜色反应的深浅及抗体或抗原的量成正比。【方法方法】主要有间接法和双抗体夹心法主要有间接法和双抗体夹心法11放射免疫指导外科（放射免疫指导外科（RIGS RIGS）radioimmunoguided surgeryradioimmunoguided surgery 肿瘤外科手术有些难以确定肿瘤的浸润的深度，肿瘤外科手术有些难以确定肿瘤的浸润的深度，具体边缘及隐藏的部分。具体边缘及隐藏的部分。RIGS RIGS 恰好能解决上述难恰好能解决上述难题。题。该方法是将放射性核素如该方法是将放射性核素如131I131I及特异性抗肿瘤单抗及特异性抗肿瘤单抗结合后，从静脉或腔内注入体内可

9、将放射性核素结合后，从静脉或腔内注入体内可将放射性核素导向肿瘤的所在部位，显示清晰的肿瘤影像，此导向肿瘤的所在部位，显示清晰的肿瘤影像，此种放射免疫显像法是一种有较好应用前景的肿瘤种放射免疫显像法是一种有较好应用前景的肿瘤诊断技术。诊断技术。12肿瘤的免疫学治疗13肿瘤的免疫学治疗肿瘤的免疫学治疗1 1 主动免疫治疗主动免疫治疗 给机体输入具有抗原性的瘤苗，刺激机体免疫系统产给机体输入具有抗原性的瘤苗，刺激机体免疫系统产生抗肿瘤免疫以达到治疗肿瘤、预防肿瘤转移和复发的目生抗肿瘤免疫以达到治疗肿瘤、预防肿瘤转移和复发的目的的 。2 2 被动免疫治疗被动免疫治疗 给机体输入外源性的免疫效应物质，使

10、其在宿主体内给机体输入外源性的免疫效应物质，使其在宿主体内发挥抗肿瘤作用。发挥抗肿瘤作用。3 3 细胞因子治疗细胞因子治疗4 4 肿瘤的基因治疗肿瘤的基因治疗 14一 主动免疫治疗 肿瘤的特异性主动免疫治疗肿瘤的特异性主动免疫治疗(ASI)(ASI)是指利用肿瘤细胞或肿瘤是指利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫，增强机抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫，增强机体的抗瘤能力，阻止肿瘤的生长扩散和复发以治疗肿瘤的体的抗瘤能力，阻止肿瘤的生长扩散和复发以治疗肿瘤的方法。方法。15（一）细胞疫苗细胞疫苗 1 1 基因修饰的肿瘤细胞基因修饰的肿瘤细胞 细胞因子的基因或细胞

11、因子的基因或MHCIMHCI分子的基因等转移入分子的基因等转移入肿瘤细胞，降低致瘤性，增强免疫原性。肿瘤细胞，降低致瘤性，增强免疫原性。2 2 基因修饰的树突状细胞（基因修饰的树突状细胞（DCDC）16（二）分子疫苗（二）分子疫苗1 1肿瘤肿瘤抗原疫苗抗原疫苗包括包括TAA/TSATAA/TSA疫苗、疫苗、MHCMHC抗原多肽复合疫苗、抗原多肽复合疫苗、HSP-HSP-肽复肽复合体疫苗，以及人工合成肿瘤肽疫苗等。热休克蛋白合体疫苗，以及人工合成肿瘤肽疫苗等。热休克蛋白(HSP)(HSP)是在生物进化中是在生物进化中高度保守、广泛分布的蛋白质，具有高度保守、广泛分布的蛋白质，具有“分子伴侣分子伴

12、侣”(molecule chaperone)(molecule chaperone)作用，作用，参及多种胞内蛋白的折叠、装配及转运。从肿瘤组织中提取的参及多种胞内蛋白的折叠、装配及转运。从肿瘤组织中提取的HSP-HSP-肽复合肽复合体含有多种肿瘤相关肽，可诱导多个肿瘤特异性体含有多种肿瘤相关肽，可诱导多个肿瘤特异性CTLCTL克隆，发挥特异性杀克隆，发挥特异性杀伤作用，而且不受伤作用，而且不受MHCMHC类抗原限制，因此，类抗原限制，因此，HSP-HSP-肽复合体疫苗展示一定肽复合体疫苗展示一定的应用前景。的应用前景。2 2及肿瘤发生有关的病毒疫苗及肿瘤发生有关的病毒疫苗病毒疫苗不仅可以预防病

13、毒性疾病，更重要的病毒疫苗不仅可以预防病毒性疾病，更重要的可以预防或治疗人类许多及病毒感染密切相关的肿瘤，如乙型肝炎病毒疫可以预防或治疗人类许多及病毒感染密切相关的肿瘤，如乙型肝炎病毒疫苗。目前，以病毒为载体及其他肿瘤抗原或多肽组成的重组病毒疫苗苗。目前，以病毒为载体及其他肿瘤抗原或多肽组成的重组病毒疫苗(如重如重组痘苗病毒组痘苗病毒)正在研制和正在研制和I I期临床试验之中。期临床试验之中。3 3抗独特型抗体疫苗抗独特型抗体疫苗抗独特型抗体作为抗原的内影像，可模拟抗原的结构并抗独特型抗体作为抗原的内影像，可模拟抗原的结构并代替肿瘤抗原成为疫苗，诱发机体产生特异性抗肿瘤免疫应答。制备简便，代替

14、肿瘤抗原成为疫苗，诱发机体产生特异性抗肿瘤免疫应答。制备简便，只需以肿瘤特异性单克隆抗体作为免疫原，制备抗体并筛选具有内影像作只需以肿瘤特异性单克隆抗体作为免疫原，制备抗体并筛选具有内影像作用的抗独特型抗体，不需要分离或鉴别肿瘤抗原。抗独特性疫苗的优点用的抗独特型抗体，不需要分离或鉴别肿瘤抗原。抗独特性疫苗的优点在于不含抗原或抗原片段，制备起来经济，可大量人工合成。抗独特性抗在于不含抗原或抗原片段，制备起来经济，可大量人工合成。抗独特性抗体的分子量体的分子量 小，其免疫原性往往不完全，故需及免疫载体结合。采用抗小，其免疫原性往往不完全，故需及免疫载体结合。采用抗 独独特性抗体疫苗已治疗了淋巴瘤

15、、黑色素瘤、结肠癌、皮肤特性抗体疫苗已治疗了淋巴瘤、黑色素瘤、结肠癌、皮肤T T 淋巴细胞瘤、淋巴细胞瘤、卵巢癌等，其临床疗效有待观察。一组临床试验卵巢癌等，其临床疗效有待观察。一组临床试验 用抗独特型抗体疫苗治疗用抗独特型抗体疫苗治疗了了4040例恶性淋巴瘤，例恶性淋巴瘤，1515获完全缓解获完全缓解 、5050获部分缓解，缓解期为获部分缓解，缓解期为6 6个月左个月左右。抗独特型抗体疫苗治右。抗独特型抗体疫苗治 疗的主要障碍是肿瘤内存在独特型阴性的细胞，疗的主要障碍是肿瘤内存在独特型阴性的细胞，因而可逃脱因而可逃脱 免疫反应的攻击。免疫反应的攻击。17（三）核酸疫苗（三）核酸疫苗DNA疫苗

16、是指人工克隆一段编码肿瘤特异性抗原的DNA，并通过质粒等方式注入机体，使其在体内细胞中有效表达蛋白而成为肿瘤特异性抗原。这种抗原模仿了病毒蛋白等内源性抗原的递呈方式，解除了免疫耐受，诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫应答。DNA疫苗虽有许多问题有待研究，但显示了诱人的前景。18二二 被动免疫治疗被动免疫治疗11 免疫导向治疗免疫导向治疗2 2 过继免疫疗法过继免疫疗法19免疫导向疗法 将具有细胞毒作用的杀伤因子及单克隆抗体偶联制成“生物导弹”，利用单抗能特异性结合肿瘤抗原的特性将杀伤因子“导向”肿瘤病灶，杀伤肿瘤细胞20 常用的杀伤因子：放射性核素放射性核素(131I)(131I)抗肿瘤药物抗肿瘤药

17、物 氨甲蝶呤氨甲蝶呤临床用于急性白血病，尤其是急性淋巴细胞性白血病，绒毛临床用于急性白血病，尤其是急性淋巴细胞性白血病，绒毛膜上皮癌及恶性葡萄胎等效果较好。对头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌及膜上皮癌及恶性葡萄胎等效果较好。对头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌及盆腔肿瘤均有一定疗效。盆腔肿瘤均有一定疗效。阿霉素阿霉素主要适用于急性白血病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血主要适用于急性白血病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血病均有效，一般作为第二线药物，即在首选药物耐药时可考虑应用此病均有效，一般作为第二线药物，即在首选药物耐药时可考虑应用此药。恶性淋巴瘤，可作为交替使用的首先药物。乳腺癌、肉瘤、肺癌、药。恶性淋

18、巴瘤，可作为交替使用的首先药物。乳腺癌、肉瘤、肺癌、膀胱癌等其他各种癌症都有一定疗效，多及其他抗癌药联合使用。膀胱癌等其他各种癌症都有一定疗效，多及其他抗癌药联合使用。毒素毒素 蓖麻毒素蓖麻毒素由由A A、B B两条链组成。两条链组成。A A链比链比B B链稍短，两链之间以一个二硫链稍短，两链之间以一个二硫键相连接。当毒素进入体内，键相连接。当毒素进入体内，A A、B B链分开。链分开。A A链通过渗透经细胞膜进链通过渗透经细胞膜进入细胞浆，主要使真核细胞的核糖体抑制失活，从而抑制蛋白质的合入细胞浆，主要使真核细胞的核糖体抑制失活，从而抑制蛋白质的合成。成。B B链及细胞表面结合，通过内陷作用

19、转入细胞内，它能促使链及细胞表面结合，通过内陷作用转入细胞内，它能促使A A链进链进入胞浆。主要通过抑制蛋白质合成来杀伤癌细胞入胞浆。主要通过抑制蛋白质合成来杀伤癌细胞 白喉毒素白喉毒素 绿脓杆菌外毒素绿脓杆菌外毒素其中放射性核素应用方便、标记简便，易显像及定位定量检测，并能破其中放射性核素应用方便、标记简便，易显像及定位定量检测，并能破坏邻近未被单抗结合的肿瘤细胞，因此应用最多。坏邻近未被单抗结合的肿瘤细胞，因此应用最多。21二二 被动免疫治疗被动免疫治疗 将自身或异体抗肿瘤效应细胞或其前体细胞在体外进行诱导、激活和扩增，然后转输给肿瘤患者，提高患者抗肿瘤免疫力，以达到治疗和预防复发的目的

20、常见的免疫效应细胞有LAK、TIL、CD3AK、CTL2.过继免疫疗法过继免疫疗法22 LAK（lymphokine activated killer）用高浓度IL-2激活来自患者自体或正常供者的外周血单个核细胞，能够杀伤NK不敏感肿瘤细胞 TIL（tumor infiltrating lymphocytes）从切除的瘤组织或癌性胸腹水中分离淋巴细胞，体外经IL-2诱导激活扩增。TIL已应用于临床，主要治疗皮肤、肾、肺、头颈部、肝、卵巢部位的原发或继发肿瘤。CD3AK（CD3 antibody activated killer）抗CD3单抗辅以小剂量IL-2激活外周血单个核细胞。CD3AK细胞

21、在体内、外均有较强的抗瘤活性，目前已有报道在临床应用CD3AK细胞治疗肾癌、黑色素瘤并取得一定的疗效。但是由于肿瘤病人一般状况较差，故从肿瘤病人身上大量抽取外周血诱导CD3AK细胞用于治疗较为困难，采用健康成人外周血诱导CD3AK细胞经体外激活扩增后输给肿瘤病人则是较为可行的治疗方法。CTL 用特异性多肽抗原体外诱导CTL克隆23三 细胞因子疗法 将某些细胞因子注射体内后，可调节、增强一种或多种免疫细胞的活性，发挥更强的抗肿瘤免疫功能 目前临床常用的细胞因子有IL-2、TNF-、IFN-、CSF等24增加增加MHC-IMHC-I分子的表分子的表达达缓解毛细胞白血病缓解毛细胞白血病,对癌症有弱的

22、效应对癌症有弱的效应IFN-IFN-,IFNIFN-IFN-IFN-增加增加MHC-IMHC-I分子的表分子的表达达,激活激活Tc Tc 和和 NK NK 细胞细胞缓解卵巢癌缓解卵巢癌IL-2IL-2使使T T细胞活化和增殖细胞活化和增殖,激活激活NKNK细胞细胞缓解肾细胞癌和黑缓解肾细胞癌和黑色素瘤色素瘤TNFTNF-激活巨噬细胞和淋激活巨噬细胞和淋巴细胞巴细胞减少恶性腹水减少恶性腹水细胞因子用于免疫治疗25四 基因疗法 克隆某些可用于肿瘤治疗的目的基因，体外转染受体细胞，然后回输体内 直接将目的基因体内注射，使目的基因在体内有效表达 增强体内抗肿瘤作用或改善肿瘤微环境以增强抗肿瘤免疫力26

23、目前常用的抗肿瘤目的基因 细胞因子基因 IL-212、IFN-、TNF-、CSF等基因 肿瘤抗原基因 MAGE、CEA等基因 MHC基因 协同刺激分子基因 CD54、LFA-3等基因 肿瘤自杀基因 TK、CD基因等 抑癌基因 RB基因、p53基因等27非特异性免疫治疗 是指应用一些免疫调节剂通过非特异性地增强机是指应用一些免疫调节剂通过非特异性地增强机体的免疫功能，激活机体的抗肿瘤免疫应答，以体的免疫功能，激活机体的抗肿瘤免疫应答，以达到治疗肿瘤的目的。晚期肿瘤病人大多伴有免达到治疗肿瘤的目的。晚期肿瘤病人大多伴有免疫功能紊乱，在手术切除肿瘤后，使用免疫增强疫功能紊乱，在手术切除肿瘤后，使用免

24、疫增强药物有利于调整机体的免疫功能，提高机体抗肿药物有利于调整机体的免疫功能，提高机体抗肿瘤作用，减少肿瘤的复发。在肿瘤放疗和化疗以瘤作用，减少肿瘤的复发。在肿瘤放疗和化疗以后，机体免疫功能受到明显损害，使用免疫增强后，机体免疫功能受到明显损害，使用免疫增强药物可以促进机体免疫功能的恢复。目前在肿瘤药物可以促进机体免疫功能的恢复。目前在肿瘤治疗中应用较多的如卡介苗，短小棒状杆菌，酵治疗中应用较多的如卡介苗，短小棒状杆菌，酵母多糖，香菇多糖，母多糖，香菇多糖，OK432OK432以及一些细胞因子如以及一些细胞因子如IL-2IL-2等均属于此类。等均属于此类。2829HBV或HCV感染及原发性肝癌

25、 HBV(Hepatitis B virus)HCV(Hepatitis C virus)3031l人类乳突病毒Human Papilloma virusHPV感染及宫颈癌32EBV：Epstein-Barr virusEBV感染及鼻咽癌EBV是Epstein和Barr于1964年首次地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。33HTLV-1感染及成人T细胞白血病 HTLV-1人类T淋巴细胞白血病病毒型 34HBV疫苗及肝癌的预防 乙型肝炎病毒感染是目前严重的公共卫生问题。肝癌高发区其乙肝病毒携带率高80%的肝癌病人均有乙肝病毒感染。在肝癌病人中发现了乙肝病毒DNA整合到肝细胞的DNA中，因此阻断HBV感染是预防原发性肝癌的重要途径，而接种乙肝疫苗是控制乙肝最根本和有效的措施。WHO指出在HBV低流行区应选择性使用疫苗，而在中高流行区所有婴儿都应接种疫苗，应把乙肝疫苗的应用纳入扩大的计划免疫中去。实践证明对新生儿特别是HBsAg阳性及(或)HBeAg阳性母亲的新生儿进行乙肝疫苗接种免疫效果可靠。在江苏省启东市至1990年底已接种新生儿41717人疫苗接种率达98.6%，5岁时抗HBS阳性率达82%。目前已观察到慢性肝炎下降的趋势，接种乙肝疫苗预防肝癌的远期效果有待进一步观察证实 35