流式细胞术在白血病中应用课件.ppt

1、世界卫生组织血液肿瘤分类方案（年）世界卫生组织血液肿瘤分类方案（年）“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的真实本质”。“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志 卷页，年）更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。1白血病分子诊断的意义白血病分子诊断的意义系统诊断系统诊断白血病初发白血病初发异常标记异常标记精确诊断精确诊断准确预后准确预后指导治疗指导治疗科研资料科研资料残留监测残留监测

2、靶向治疗靶向治疗免疫遗传学靶标免疫遗传学靶标诊断诊断2血液肿瘤新分类实验技术平台血液肿瘤新分类实验技术平台 实施血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。34 ()诊断诊断单克隆蛋白数量和特征单克隆蛋白数量和特征血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白尿和血清免疫固定尿和血清免疫固定血清自由轻链和比例血清自由轻链和比例骨髓检查和骨髓活检骨髓检查和骨髓活检 组化组化免疫分型克隆检定，及通过抗体组合能从余免疫分型克隆检定，及通过抗体组合能从余 例患者正常浆细胞

3、中找到检测残留细例患者正常浆细胞中找到检测残留细胞胞 终末器官损害评价终末器官损害评价 全血细胞计数；生化检查全血细胞计数；生化检查:血清肌酐和骨钙测定血清肌酐和骨钙测定 预后评估预后评估球蛋白，微球蛋白球蛋白，微球蛋白,骨髓细胞遗传学和骨髓细胞遗传学和(),(),针对某些特定患者的特殊研究针对某些特定患者的特殊研究5传统流式细胞术的临床应用传统流式细胞术的临床应用细胞计数：、细胞计数：、含量：多倍数、期含量：多倍数、期结果是数据、准确性依赖于良结果是数据、准确性依赖于良好的质控好的质控传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用单参单参“白血病表型白血病表型”

4、，阳性比率，阳性比率大多数细胞为肿瘤细胞大多数细胞为肿瘤细胞多为形态学细胞化学后的确认多为形态学细胞化学后的确认数据由临床医师判断数据由临床医师判断高分辨流式细胞的优点高分辨流式细胞的优点以多参数正常抗原表达为基础以多参数正常抗原表达为基础结果类似病理报告结果类似病理报告用于原发性诊断与鉴别诊断用于原发性诊断与鉴别诊断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断流式细胞术流式细胞术6骨髓异质性系统中的应用骨髓异质性系统中的应用多系列 (,)骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段必须能涵盖所有细胞7应该使用何种抗体？应该使用何种抗体？所有抗体必须为标准的商业化试剂

5、没有什么“秘密武器”或者专门特异的抗体抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量对正常抗原表达的正确认识能帮助你有效地鉴别疾病状态相关的改变8 I II III IV B Lymphoid Maturation CD 10 FMC 7 CD 34 CD 45 CD 19 CD 20 CD 22 TdT CD 5 CD 23 Antigen Expression 103 102 101 高高 分分 辨辨 流流 式式 细细 胞胞 术术 能能 够够 鉴鉴 别别 和和 分分 类类 所所 有有 骨骨 髓髓 细细 胞胞可 以 对 每 一 个 细 胞 进 行 多 特 征 性 的 检 测 并 对 其

6、 相 应 的 系 列 和 成 熟 的 阶 段 进 行 分 类 至 少 检 测 一 万 个 细 胞，分 辨 率 达 到 9 I II III IV V CD 45 CD 33 CD 11b CD 15 CD 34 HLA-DR CD 13 CD 16 Neutrophil Maturation Antigen Density 103 102101 10()11正常粒系成熟模式12正常正常 系成熟系成熟()表达交叉系列的抗原非同步抗原共表达：与、抗原的过度表达：早前中抗原表达缺失：泛抗原易位抗原表达：中淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的淋巴细胞光散射异常：和白血病相关的免疫表型特点白血病相关的免疫表型

7、特点1415R1R2R3R416R1R2R3R41718R1R2R3R4R519R1R2R3R4Date:Name:zhang yixiNo.090824320淋巴瘤白血病成熟R1R2R4R5R621 R1R2R3R4R5R1R2R3R4R5 22R1R2R3R4R523R2R3R4R5R1Date:Name:xu zhongyuNo.090817524R1R2R3R4R525大细胞淋巴瘤26R1R2R3R4R5R6Name:he yinyanDate:No.090727827R1R2R3R428R1R2R3R4R5R6R729报告报告包括出现或缺乏的异常细胞群异常免疫表型相比正常细胞群的抗原

8、强度 增强，减弱，缺失定量层面的判断相对于全部阳性细胞()出现的其它细胞群30R1R2R3R43132克隆小结小结流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断更加确定的诊断排除其他疾病有助于细分亚型更准确的原始细胞辨别和定量有助于预后判断治疗后监测快速33免疫表型分析与分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。34目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（）。态学的完

9、全缓解（）。但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。病细胞。如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。35 :,:,:,:Primary leukemia 3637 ()检测治疗早期的反应佳检测治疗早期的反应佳 加强治疗加强治疗 检测治疗早期的反应差检测治疗早期

10、的反应差 无需加强治疗无需加强治疗 检测复发检测复发加强治疗，准备加强治疗，准备 前前 评估评估 优化的时间优化的时间 后评估后评估 调整免疫抑制治疗时调整免疫抑制治疗时间，等间，等 临床试验结束时的评估临床试验结束时的评估 评价新的抗药物评价新的抗药物或治疗的结果或治疗的结果38与预后当残存白血病细胞，年复发率为残存白血病细胞,年复发率为残存白血病细胞,年复发率为残存白血病细胞 儿童 成人 儿童 成人 42报告模板报告模板43病例一病例一 病例资料：病例资料：女，岁，女，岁，初发初发印象：在点图上设门分析，原始细胞分布区印象：在点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的

11、，主域可见异常细胞群体，约占有核细胞的，主要表达、，（）。淋巴细胞比例要表达、，（）。淋巴细胞比例降低。降低。提示：急性髓系细胞白血病（可能）。提示：急性髓系细胞白血病（可能）。基因：基因：阳性。阳性。02565127681024data.008SSC-Height-101010101001234data.002CD33 PE-44病例一（续）病例一（续）化疗 ：可见残留，细胞约占。基因：阳性。101010101001234data.004SSC-Height-101010101001234data.004CD33 PE-45 ：未做。基因：阴性。：未见免疫表型明显异常的细胞。基因：阴性。10

12、1010101001234Data.004CD33 PE-病例一（续）病例一（续）101010101001234Data.002SSC-Height-46病例二病例二 病例资料：病例资料：男，岁，男，岁，初发初发印象：在点图上设门分析，弱表达分布区印象：在点图上设门分析，弱表达分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的，域可见异常细胞群体，约占有核细胞的，表达、。提示：急性淋巴表达、。提示：急性淋巴细胞白血病（普通型）。细胞白血病（普通型）。基因：阴性。基因：阴性。02565127681024Data.003SSC-Height-101010101001234Data.010CD10 FITC-

13、47 化疗 第个月：未见明显表型异常的残留白血病细胞。（未附图）基因：未做。化疗 第个月：可见残留，在区域可见约的细胞和约的细胞，考虑为残留白血病细胞。（见右图）基因：未做。病例二（续）病例二（续）101010101001234data.002CD10 FITC-101010101001234data.002CD10 FITC-101010101001234data.003CD34 PE-101010101001234data.003Anti-HLA-DR FITC-101010101001234data.002SSC-Height-48病例二（续）病例二（续）化疗 第个月：印象：在点图上设门

14、分析，阴性略向原始延伸的分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞的，主要表达、。提示：结合病史，考虑急性淋巴细胞白血病（普通型）复发。基因：基因筛查示阳性，其余均阴性。02565127681024Data.006SSC-Height-101010101001234Data.006CD22 PE-101010101001234Data.007CD10 FITC-101010101001234Data.007CD10 FITC-49病例三病例三 病例资料：病例资料：女，岁，女，岁，初发初发印象：在点图上设门分析，原始细胞分布区印象：在点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞

15、群体，约占有核细胞的，与域可见异常细胞群体，约占有核细胞的，与淋巴细胞分界不清，表达、。淋巴细胞分界不清，表达、。提示：急性淋巴细胞白血病提示：急性淋巴细胞白血病 。基因：、融合基因均阴性。基因：、融合基因均阴性。02565127681024Data+.002SSC-Height-50病例三病例三 （续（续1 1）2009.05 化疗 第第7 7个月个月：FCMFCM印象印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.01%）、CD34+cCD3+（0.11%）、CD7+CD117+（0.07%）等免疫表型明显异常的T淋巴细胞，考虑为残留白血病细胞。基因基因：未做。101010101001234Data.002CD33 PE-101010101001234Data.003CD7 FITC-101010101001234Data.005cCD3 PE-101010101001234Data.002Anti-HLA-DR FITC-101010101001234Data.002SSC-Height-51