第15章-甾体激素类药物的分析课件-.ppt

1、第十五章 甾体激素类药物的分析C20C214616ABCD1235789101112131415171819基本结构基本结构环戊烷骈多氢环戊烷骈多氢菲菲 第一节第一节 基本结构与分类基本结构与分类1甾体激素甾体激素性性 激激 素素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素 雄性激素及雄性激素及蛋白同化激素蛋白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素 分分 类类OHOOHOCH2OHHHH 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素4 433酮基酮基C C1717醇酮基醇酮基氢化可的松氢化可的松OHOOHOHFHOCH3OHCH3肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OHOHOHCH3HHHOHFCH3O肾上腺皮质激

2、素肾上腺皮质激素曲安奈德曲安奈德OHOHCH3HHHHOFCH3OOPONaOONaOH肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠 肾上腺皮质激素结构特征肾上腺皮质激素结构特征主要活性基团主要活性基团性性 质质4 433酮酮UVUV、与羰基试剂反应与羰基试剂反应 C C1717醇酮基醇酮基还还 原原 性性雄性激素雄性激素OCH3HHCH3OHHCH3甲睾酮甲睾酮OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睾酮丙酸睾酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙雄性激素及蛋白同化激素结构特征雄性激素及蛋白同化激素结构特征主要活性基团主要活性基团性性 质质4 433酮酮UV

3、UV、与羰基试剂反与羰基试剂反应应 C C1717羟基羟基可成酯可成酯孕激素孕激素OCH3HHHCH3OHCH3C C1717-甲酮基甲酮基黄体酮黄体酮OCH3HHCH3OOHCH3OCH3CH3孕激素孕激素醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮OHOHHHCH3HCCH炔诺酮炔诺酮孕激素孕激素OHOHHHH3CHCCH炔诺孕酮炔诺孕酮孕激素孕激素孕激素结构特征孕激素结构特征主要活性基团主要活性基团性性 质质4 433酮酮UVUV、与羰基试剂反应与羰基试剂反应C C1717甲酮基甲酮基与与亚硝基铁氰化钠反亚硝基铁氰化钠反应应雌性激素雌性激素OHCH3HHHCCHHO炔雌醇炔雌醇雌性激素雌性激素OHCH3HH

4、HHHO雌二醇雌二醇雌性激素结构特征雌性激素结构特征主要活性基团主要活性基团性性 质质A A环为环为3OH 3OH 苯环苯环UVUV、与重氮苯磺酸盐与重氮苯磺酸盐反应反应C C1717羟基羟基可成酯可成酯（一）物理性质（一）物理性质（化学性质见鉴别试验）（化学性质见鉴别试验）第二节第二节 理化性质与鉴别试理化性质与鉴别试验验21.1.性状与溶解度性状与溶解度2.2.熔点熔点3.3.比旋度比旋度4.4.吸收系数吸收系数（二）鉴别试验（二）鉴别试验薄层色谱法薄层色谱法 制备衍生物测定熔点制备衍生物测定熔点 高效液相色谱法高效液相色谱法 紫外分光光度法紫外分光光度法 红外分光光度法红外分光光度法 化

5、学鉴别法化学鉴别法鉴别试验鉴别试验（一）（一）化学鉴别法化学鉴别法1.与强酸的呈色反应与强酸的呈色反应甾体激素类药物甾体激素类药物呈色呈色 H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl母核的一般鉴别试验母核的一般鉴别试验药药 物物显显 色色荧荧 光光加水稀释加水稀释醋酸可的松醋酸可的松黄或微带黄或微带橙橙X颜色消失溶液颜色消失溶液澄清澄清 炔雌醇炔雌醇橙红橙红黄绿黄绿玫瑰红色絮状玫瑰红色絮状沉淀沉淀炔雌醚炔雌醚橙红橙红黄绿黄绿红色沉淀红色沉淀泼尼松泼尼松橙橙X黄至蓝绿黄至蓝绿泼尼松龙泼尼松龙深红深红X红色消失，有红色消失，有灰色絮状沉淀灰色絮状沉淀 与硫酸显色反应与硫酸显色反应2.2.官能团的反

6、应官能团的反应肾上腺皮质肾上腺皮质激素药物激素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OH（1）C17 醇酮基醇酮基还原性还原性呈色反应呈色反应此外还有斐林试此外还有斐林试液、多伦试液液、多伦试液甾酮类激素药物甾酮类激素药物腙腙（黄色）（黄色）羰基试剂羰基试剂C C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼（2 2）酮基的呈色反应酮基的呈色反应具有甲酮基具有甲酮基或活泼亚甲或活泼亚甲基的甾体激基的甾体激素类药物素类药物呈色呈色 亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛（3 3）甲酮基）

7、甲酮基黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化钠氰化钠其他甾体其他甾体淡橙色或淡橙色或不显色不显色雌激素类雌激素类药物药物红色偶氮染料红色偶氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸（4）酚羟基酚羟基含炔基的含炔基的甾体激素甾体激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银（5）炔烃的沉淀反应炔烃的沉淀反应RCCHAgNO3RCCAg有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl（6 6）有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈蓝紫色呈蓝紫色 一般先进行水解，生成相应的一般先进行水解，生成相应的羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴别。别。（7 7）酯的

8、反应酯的反应-3-3-酮酮、苯环苯环、其他共轭结构、其他共轭结构（二）（二）UV UV 法法1.结构依据结构依据240nm240nm左右左右280nm左右左右结构特征：酚羟基结构特征：酚羟基、C C17 17 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO（三）（三）IRIR法法1505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm-1OH酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨苯环的骨架振动架振动COHHHCH3O结构特征：结构特征：-3-3-酮、酮、C C1717-甲酮基甲酮基黄体酮黄体酮1700cm-1 C=O20位酮基

9、位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H双键双键（四）（四）TLCTLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的要求供试品溶液所显主斑点的颜颜色色和和位置位置与对照品溶液的主斑点相同。与对照品溶液的主斑点相同。（五五）HPLCHPLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱要求在含量测定项下记录的色谱图中，供

10、试品峰的图中，供试品峰的t tR R与对照品峰的与对照品峰的t tR R一致。一致。（一）有关物质的检查（一）有关物质的检查第三节第三节 特殊杂质与检查特殊杂质与检查 3检查方法（具有一定分离能力）检查方法（具有一定分离能力）TLCTLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）HPLCHPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）药物药物二氨基二氨基萘比色萘比色法测定法测定氧瓶燃烧氧瓶燃烧(二）硒二）硒的的检查检查有毒有毒来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2)脱氢脱氢（三）有机溶剂残留量的检查（三）有机溶剂残留量的检查甲醇甲醇 0.30.3丙酮丙酮 5.0

11、%5.0%内标法内标法 +校正因子校正因子以以地塞米松磷酸钠为例地塞米松磷酸钠为例 GCGC法法.（四）游离磷酸盐的检查（四）游离磷酸盐的检查磷钼酸比色法磷钼酸比色法比色法比色法 紫外分光光度法紫外分光光度法含量测定含量测定高效液相色谱法高效液相色谱法 第四节第四节 含量测定含量测定4一、一、HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPLC（大多内标法）大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）色法有干扰）二、二、UV法法-3-酮酮 24

12、0nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素1.1.四氮唑比色法四氮唑比色法 2.2.异烟肼比色法异烟肼比色法 3.3.Kober反应比色法反应比色法 三、比色法三、比色法 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C C1717-醇酮基醇酮基强还原性强还原性1.1.原理原理一、一、四氮唑比色法四氮唑比色法有色甲瓒有色甲瓒四氮唑盐四氮唑盐醇酮基醇酮基 a a 1717COH-还原还原 CNNNNH三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）nmmax4904

13、80 e2 H2.2.四氮唑盐的种类四氮唑盐的种类Cl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3蓝四氮唑（蓝四氮唑（BT）525 nm3.方法方法对照品法对照品法2525氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC4045暗暗485nm4.4.讨论讨论（1）溶剂和水分的影响溶剂和水分的影响水含量大时，呈色减慢，不超过水含量大时，呈色减慢，不超过5对对结果没有影响结果没有影响醛具有一定还原性，会使吸光度增加，醛具有一定还原性，会使吸光度增加，以无醛乙醇（无水乙醇）为溶剂。以无醛乙醇（无水乙醇）为溶剂。（2 2）碱的种类及加入顺序碱的种类及加入顺序以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲

14、基铵的结果最佳的结果最佳加入顺序：加入顺序：四氮唑盐四氮唑盐（3 3）空气中的空气中的O O2 2与光线的影响与光线的影响对光及对光及O2敏感，避光敏感，避光隔绝空气、快速、充隔绝空气、快速、充N N2 2（4 4）温度与时间温度与时间室温（室温（2525）反应反应404045 min45 min（5）基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C11=O C11OHC21OH C21-酯酯肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基1.原理原理异烟腙（黄）异烟腙（黄）酮基酮基异烟肼异烟肼 3 3CHCl（缩合）缩合）（二）（二）异烟肼比

15、色法异烟肼比色法420 nmCONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）2.2.方法方法对照品法对照品法6060异烟肼异烟肼无水甲醇无水甲醇对照液对照液供试液供试液A暗暗603.3.讨论讨论反应专属性反应专属性（1）C3=OC17=O、C20=O C11=O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C C3 3酮基酮基（2）溶剂的选择溶剂的选择无水甲醇无水甲醇无水乙醇无水乙醇对试剂的稳定性对试剂的稳定性好、呈色强度较好、呈色强度较无水乙醇中高、无水乙醇中高、但对植物油的溶但对植物油的溶解度小解度小 酸酸:异烟肼异烟肼 =2:1最大吸收度最大吸收度（3）酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸的种类和浓度及异烟

16、肼的浓度（4 4）水分、温度、）水分、温度、O O2 2与光线的影响与光线的影响 含水量含水量腙水解腙水解A%O O2 2与光线对反应的影响不大与光线对反应的影响不大t (1)原理原理H2SO4-乙醇乙醇加热加热H2Omax=465加热加热雌激素雌激素黄色黄色桃红桃红max=515（三）（三）Kober反应比色法反应比色法OHCH3O雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚CH3CH3OCH3CH3Omax=465nmmax=515nm 2 2SOH 2 2SOHOH2 2铁酚试剂铁酚试剂(NH4)2Fe(SO4)2+H2SO4+H2O2+苯酚苯酚*铁盐的作用铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性加强红色产物的稳定性*酚的作用酚的作用 加快红色产物的形成加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光消除反应产生的荧光Thank You!