医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训课件.ppt

1、医学微生物学实验脓医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原汁和粪便标本中病原菌的检测菌的检测自然界中的微生物v已经发现的微生物大约13万5千种，被认为非常危险的有600种，在人间传染的病原微生物380种。这些微生物存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹。v空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。v存在于人体消化道的细菌细菌超过800种，数量可达100万亿（1014），菌体重量11.5公斤。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测2医学微生物学实验综合性实验三(P38)v空气与人体体表细菌

2、学检查空气的细菌学检查P38手指皮肤的细菌学检查P41医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测3空气的细菌学检查P38 空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。v环境：不利于微生物生长。v种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌的数量比较多。v作用：可迅速全球传播。v危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道传染病。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测4v实验方法：自然沉降法是根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直

3、的自然方式沉降到培养基表面；培养以后，计数菌落形成单位（colony forming unit，CFU），了解空气的污染情况。v实验步骤：每组1块平板，选择采样地点（实验室、宿舍、卫生间、饭堂或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后盖上盖子，作标记。37温箱培养24小时，观察结果。CFU/m3 50000NAT86N(直径7cm平板）。N：平板上的菌落数。A：平板面积(平方厘米)。T：采样时间(分钟)。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测5空气的细菌学检查空气的细菌学检查组号地点时间(min)菌落形成单位(CFU)1卫生间152食堂153门诊大厅1

4、54呼吸科病房155呼吸科ICU156外科病房157外科ICU158外科治疗室159婴儿室1510实验室15医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测6手指皮肤的细菌学检查P41 在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。因此，经手传播的疾病很多，范围很广，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手间接传播的疾病。v常住菌：常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。v暂住菌：暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的

5、非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测7v医务人员，经常要与病人接触，不管是直接接触，还是间接接触，都有传播病菌的可能。虽然病菌的直接来源是患者,但是造成病菌扩散的主要途径则是气溶胶和医务人员的手。因此，经常洗手和消毒是控制医院内交叉感染的主要方法。v实际上，预防感染措施中，最简单又十分有效的方法就是洗手。据测定，只用自来水洗手可使暂暂住菌住菌总数减少40%，用肥皂洗手可减少80%以上。v洗手？医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测8常规的洗手方法常规的洗手方法（甲和丙操作）v将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。v反复搓揉双手，搓

6、揉时间不应少于 30秒。v用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。能有效地去除大多数手上的暂住菌。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测9医学微生物学实验室标准洗手方法标准洗手方法（乙和丁操作）v用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。v分别搓擦分别搓擦10101515次。次。v保持双手低于肘部，保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。流水冲洗一分钟以上。1.1.掌心对掌心搓擦掌心对掌心搓擦 2.2.手指交错掌心对手背搓擦手指交错掌心对手背搓擦 3.3.手指交错掌心对掌心搓擦手指交错掌心对掌心搓擦4.4.两手互握互搓指背两手互握互搓

7、指背 5.5.拇指在掌中转动搓擦拇指在掌中转动搓擦 6.6.指尖在掌心中搓擦指尖在掌心中搓擦医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测101.掌心对掌心搓擦掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦手指交错掌心对掌心搓擦4.两手互握互搓指背两手互握互搓指背 5.拇指在掌中转动搓擦拇指在掌中转动搓擦 6.指尖在掌心中搓擦指尖在掌心中搓擦医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测11医务人员洗手指征v接触传染病患者之后。v接触携带多耐药性细菌的病人之后。v接触病人的血液、体液、分泌物和排泄物之后。v接触高危病室两个病人之间、新生儿室两个新生儿之

8、间。v接触旧钱币之后。v上厕所前前后。v进行微生物操作或作血、尿等生化、免疫测定之后。v在施行各种手术前后。v诊断、治疗、护理特别易感染的病人之前。v进食之前。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测121 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。2人1块平板上:甲、丙常规洗手下:乙、丁标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测13医学微生物学实验综合性实验一(P2)v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（二）临床标本的检查程序 细菌的分离与培养P7目的要求：掌握分离、纯化微生物的基本操作技术。医

9、学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测14常见病原性球菌的检查程序常见病原性球菌的检查程序P47P47：直接涂片、革兰染色、镜检直接涂片、革兰染色、镜检脓汁、痰、咽部分泌物脓汁、痰、咽部分泌物 观察菌落性状、溶血性、色素观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板培养血琼脂平板培养 涂片染色镜检涂片染色镜检 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 生化反应生化反应 纯培养纯培养 动物实验动物实验 药敏实验药敏实验血液、穿刺液血液、穿刺液 肉汤增菌培养肉汤增菌培养 培养液涂片染色境检培养液涂片染色境检 常见肠道致病菌的检查程序常见肠道致病菌的检查程序P48P48：粪便粪便 SS SS琼脂、伊红美蓝平板培养琼脂、

10、伊红美蓝平板培养 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 血清学鉴定血清学鉴定 血、骨髓血、骨髓 增菌培养增菌培养 双糖铁培养基双糖铁培养基 染色镜检染色镜检 生化反应生化反应 医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测15v平板划线分离法：平板划线分离法：借助于划线，将混杂的多种多种细菌，在固体培养基表面分散成单个单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团。在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部位置不断增值的稠密群体称为单菌落单菌落。在固体培养基表面，由多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物,称为菌苔菌苔。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测16平板分区划线分离法

11、步骤（5区）v接种环烧灼灭菌，以免污染标本。v取标本在平板表面上方密集涂布510mm2。v烧掉接种环上多余的标本（火焰背面烤干烧灼）。v晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。v接种环与平板呈3040度角，通过密集涂布部分13次，使接种环重新沾上少量标本(细菌)，然后在平板表面，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。v转动平板，接种环通过第一区1次，同样的方法划第二区。如此依次划完35区。v接种环烧灼灭菌（火焰背面烤干烧灼），以免污染环境。v将平板倒置（盖在下，底朝上），37培养1824h

12、。要充分利用平板面积，要充分利用平板面积，5 5区间隔尽量小，不能划破琼脂。区间隔尽量小，不能划破琼脂。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测17510mm2 30条线平板划线不少于150条线医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测18平板划线分离法P8v甲脓汁标本普通平板（黄色）v乙脓汁标本普通平板v丙粪便标本伊红美蓝（紫色）v丁粪便标本伊红美蓝医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测19实验分组实验分组v俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。v每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为甲、乙、丙、丁。甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5

13、丙 丁甲 乙 8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 讲 台医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测20接种环烧灼灭菌v使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。v使用后，先在火焰背面将把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。v金属杆快速通过火焰23次，杀灭表面微生物医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测21接种环直径3mm环面垂直垂直离开液面：快速3ul,慢速1ul。环面水平水平离开液面：快速6ul,慢速2ul。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测22医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测24接种环

14、与平板接触点和划线方法？医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测25医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测26510mm2 30条线平板划线不少于150条线医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测2737培养24小时 医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测2837培养24小时 医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测2937培养24小时 医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测3037培养24小时 医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测31安全警告v接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v气溶胶粒径100um沉降很快，50um在0.4s内扩散开，5

15、um通过呼吸道直接到达肺泡。vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。v实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测32思考题v为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?v为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌?v为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害?v做细菌培养时，平板为什么要倒置?v培养细菌的常用方法有哪些?v从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项?医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测33实验内容v空气的细

16、菌学检查P38普通平板(1组1块）v手指皮肤的细菌学检查P41普通平板(2人1块 划分8格）v平板划线分离法P8 甲，乙脓汁标本普通平板(黄色，1人1块）丙，丁粪便标本伊红美蓝(紫色，1人1块）医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测34常用器材摆放顺序：电源插座常用器材摆放顺序：电源插座试管架试管架酒精灯酒精灯污物盘。污物盘。试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机的顺试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测35酒精棉球酒精棉球碘酒棉球碘酒棉球镊子镊子电炉、石棉网电炉、石棉网手套手套微生物学公共器材柜微生物学公共器材柜-2-2 （东侧边台中段）（东侧边台中段）医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测36实验室器材实验室器材 整齐有序整齐有序医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测37