脂肪干细胞医学知识培训课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《脂肪干细胞医学知识培训课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 脂肪 干细胞 医学知识 培训 课件
- 资源描述:
-
1、脂肪干细胞医学知识汇报提纲汇报提纲脂肪干细胞医学知识2一、研究背景一、研究背景 动物体内,脂肪组织不仅是重要的能量贮存库和动物体内,脂肪组织不仅是重要的能量贮存库和赋形组织,还是保持内环境稳定及具有分泌激素和细赋形组织,还是保持内环境稳定及具有分泌激素和细胞因子的重要部位。脂肪细胞增殖与分化失常是导致胞因子的重要部位。脂肪细胞增殖与分化失常是导致肥胖及肥胖及型糖尿病的重要因素。因此,脂肪细胞分化型糖尿病的重要因素。因此,脂肪细胞分化的研究一直是国内外医学及生物学领域的研究热点之的研究一直是国内外医学及生物学领域的研究热点之一。一。脂肪干细胞医学知识3 背景知识背景知识脂肪干细胞医学知识4 背景
2、知识背景知识脂肪干细胞医学知识5二、脂肪源间充质干细胞的优点二、脂肪源间充质干细胞的优点 首先,从人类医学角度说,获取脂肪间充质干首先,从人类医学角度说,获取脂肪间充质干细胞比骨髓源性干细胞容易的多。皮下脂肪切除术细胞比骨髓源性干细胞容易的多。皮下脂肪切除术是一种普通的外科手术,其安全性高、对患者带来是一种普通的外科手术,其安全性高、对患者带来的痛苦小。即的痛苦小。即AMSCs具有易获得性、安全、可迅具有易获得性、安全、可迅速扩增及多向分化能力等特点,其将成为具有广阔速扩增及多向分化能力等特点,其将成为具有广阔治疗应用前景的一类成体干细胞。治疗应用前景的一类成体干细胞。脂肪干细胞医学知识6 其
3、次,脂肪组织比骨髓中所含干细胞比率大。其次,脂肪组织比骨髓中所含干细胞比率大。通通过成纤维细胞集落形成单位比较脂肪组织显示,成人过成纤维细胞集落形成单位比较脂肪组织显示,成人骨髓来源细胞中成纤维细胞集落形成单位出现频率为骨髓来源细胞中成纤维细胞集落形成单位出现频率为1/500001/500001/10000001/1000000,而当脂肪组织用胶原酶消化,而当脂肪组织用胶原酶消化,除去上层漂浮的成熟脂肪细胞,下层细胞中成纤维细除去上层漂浮的成熟脂肪细胞,下层细胞中成纤维细胞集落形成单位的频率为胞集落形成单位的频率为1/1001/100,说明脂肪组织中,说明脂肪组织中干细干细胞数目至少是骨髓的胞
4、数目至少是骨髓的500500多倍多倍 。脂肪间充质脂肪间充质干细胞优点干细胞优点脂肪干细胞医学知识7 最后,从经济和社会效益看,从脂肪组织中获最后,从经济和社会效益看,从脂肪组织中获取干细胞可将原本认为是废弃物的脂肪,如临床上取干细胞可将原本认为是废弃物的脂肪,如临床上脂肪抽吸术后的脂肪组织及动物屠宰后不可实用的脂肪抽吸术后的脂肪组织及动物屠宰后不可实用的内脏脂肪等变为干细胞库的重要来源,具有极大的内脏脂肪等变为干细胞库的重要来源,具有极大的经济与社会效益。经济与社会效益。脂肪间充质脂肪间充质干细胞优点干细胞优点脂肪干细胞医学知识8 关于脂肪间充质干细胞标志,目前尚无统一标关于脂肪间充质干细胞
5、标志,目前尚无统一标准。一般认为,脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干准。一般认为,脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均表达细胞均表达CD44、CD105、STRO-1、CD166及及CD117。其中。其中CD117是一种干细胞因子受体,在全是一种干细胞因子受体,在全能或多能干细胞中表达,包括胚胎干细胞。能或多能干细胞中表达,包括胚胎干细胞。表面标记表面标记脂肪干细胞医学知识9 除了上述几种标记外,脂肪间充质干细胞也表达除了上述几种标记外,脂肪间充质干细胞也表达其他多种分子标记,包括其他多种分子标记,包括CD29(1-整合素,在血管整合素,在血管发生治疗中起重要作用)、发生治疗中起重要作用)、CD4
6、4(透明质酸盐)和(透明质酸盐)和CD49e(5-整合素,在细胞粘附纤连蛋白中起重要整合素,在细胞粘附纤连蛋白中起重要作用)等。作用)等。表面标记表面标记脂肪干细胞医学知识10 不同研究组对脂肪间充质干细胞表面标记的鉴不同研究组对脂肪间充质干细胞表面标记的鉴定结果并不完全一致,如定结果并不完全一致,如Gronthos等发现等发现AMSCs不不表达表达STRO-1,但,但Zuk等发现表达等发现表达STRO-1。这些不一。这些不一致的结果可能与细胞所处状态及纯度有关。致的结果可能与细胞所处状态及纯度有关。表面标记表面标记脂肪干细胞医学知识11报道文献报道文献AMSCs表面标记表面标记阳性阳性阴性阴
7、性Gronthos,2001CD44、CD49d、CD49e、CD54、CD55、CD59、CD105、CD106和和HLA-ABCCD14、CD45、CD50、CD56、HLA-DR和骨髓和骨髓基质细胞表面分子基质细胞表面分子STRO-1Zuk,2002CD13、CD29、CD44、CD105、CD71、STRO-1CD14、CD16、CD31、CD34、CD45、CD106、CD56De Ugarte,2003CD13、CD29、CD44、CD105、CD90、STRO-1CD49d、CD54、CD34、CD106Aust,2004CD10、CD13、CD29、CD44、CD90、和、和H
8、LA-ABCCD11b、CD45和和HLA-DR表面标记表面标记脂肪干细胞医学知识12 近几年的研究结果表明,近几年的研究结果表明,在合适诱导剂下,脂在合适诱导剂下,脂肪间充质干细胞和骨髓干细胞一样,肪间充质干细胞和骨髓干细胞一样,可向脂肪、软可向脂肪、软骨、成骨、神经元细胞、成肌细胞、血管内皮细胞骨、成骨、神经元细胞、成肌细胞、血管内皮细胞等方向分化。等方向分化。三、多向分化潜能三、多向分化潜能多向分化潜能多向分化潜能脂肪干细胞医学知识13Strem BM,2005多向分化潜能多向分化潜能脂肪干细胞医学知识14分化分化方向方向相关文献相关文献骨骼肌骨骼肌Mizuno,2002;Bacou,2
9、004;陈希平陈希平,2004心肌心肌Rangappa,2003;Planat-Benard,2004;Yamada,2006(棕棕色脂肪组织色脂肪组织);张端珍张端珍,2005;王燕王燕,2005成骨成骨Zuk,2001,2002;Halvorsen,2000;Hattori,2004;陈希哲陈希哲,2004软骨软骨Huang,2004;Winter,2003;严笠严笠,2005脂肪脂肪Zuk,2001,2002;Sen,2001;Von Heimburg D,2001神经神经Safford,2004;Ashjian,2003;Rchman,2004;杨立业杨立业,2003,2004脂肪干细
10、胞医学知识15 脂肪间充质干细胞向不同细胞分化是在特异性脂肪间充质干细胞向不同细胞分化是在特异性诱导因子作用下进行的。诱导因子作用下进行的。下面介绍常用的一些多向诱导分化因子及诱导下面介绍常用的一些多向诱导分化因子及诱导后的细胞特性。后的细胞特性。多向分化潜能多向分化潜能脂肪干细胞医学知识16 细胞类型细胞类型 诱导物诱导物 细胞特性细胞特性 脂肪细胞脂肪细胞 地塞米松,异丁基甲基黄嘌,胰岛素等 细胞中充满脂滴,油红o染色阳性成骨细胞成骨细胞 2-磷酸抗坏血酸,-甘油磷酸,地塞米松等钙化性基质产物,茜素红染色阳性骨骼肌细胞骨骼肌细胞 地塞米松,氢化可的松,或5-氮杂胞苷 多核形态,骨骼肌肌性素
11、重链/MyoD表达 心肌细胞心肌细胞 5-氮杂胞苷 细胞圆形,-肌动蛋白和肌钙蛋白-I表达 神经元细胞神经元细胞 -巯基乙醇或者异丁基甲基黄嘌,消炎痛等细胞缩小、周围有多个神经突起 内皮细胞内皮细胞 血管内皮细胞生长因子,碱性成纤维细胞生长因子 细胞之间形成网格样结构,表达内皮细胞特异性抗原 肝肝(实质实质)细细胞胞肝细胞生长因子,抑瘤素M表达白蛋白和-胎蛋白 脂肪干细胞医学知识17脂肪干细胞医学知识18肝实质细胞肝实质细胞 在在20062006年年4 4月第月第1616卷卷4 4期的自然科学进展上,裴雪涛期的自然科学进展上,裴雪涛等人发表的文章人脂肪来源的干细胞体外培养特性及等人发表的文章人
12、脂肪来源的干细胞体外培养特性及分化为肝细胞样细胞的研究。分化为肝细胞样细胞的研究。脂肪干细胞医学知识19 脂肪源性干细胞的分离因物种不同消化方法不同。脂肪源性干细胞的分离因物种不同消化方法不同。本实本实验室采用型胶原酶消化法分离获得猪脂肪源干细胞,表达脂验室采用型胶原酶消化法分离获得猪脂肪源干细胞,表达脂肪干细胞表面标记,在合适诱导剂下,这些细胞分化成了成肪干细胞表面标记,在合适诱导剂下,这些细胞分化成了成骨细胞、成肌细胞和脂肪细胞,在此作一简单介绍。骨细胞、成肌细胞和脂肪细胞,在此作一简单介绍。四、猪四、猪AMSCs的培养及诱导分化的培养及诱导分化脂肪干细胞医学知识20 细胞培养细胞培养7-
13、8 天后,细胞生长即可达天后,细胞生长即可达80%-90%融合,贴壁细融合,贴壁细胞紧密排列成漩涡状、网状、辐射状,有一定的方向性,集落大小胞紧密排列成漩涡状、网状、辐射状,有一定的方向性,集落大小不一,含数个至数百个细胞不等;集落中细胞形态为典型梭形细胞不一,含数个至数百个细胞不等;集落中细胞形态为典型梭形细胞(图图A),这就是我们所要分离获得的猪,这就是我们所要分离获得的猪AMSCs。原代培养。原代培养14 d 左右左右即可形成致密单层即可形成致密单层(图图B)。BAAMSCs的培养特性的培养特性脂肪干细胞医学知识21CD44+(50)CD105+(100)CD14(50)CD34 (10
14、0)CD106(100)HLA-DR(50)利用免疫组织化学方法检测猪利用免疫组织化学方法检测猪AMSCsAMSCs特异性表面标记,结果:特异性表面标记,结果:CD44CD44和和CD105CD105呈阳性。呈阳性。CD14CD14,CD34,CD106,HLA-DRCD34,CD106,HLA-DR均为阴性。均为阴性。AMSCs的表面标记的表面标记脂肪干细胞医学知识22 在地塞米松、抗坏血酸和在地塞米松、抗坏血酸和磷酸甘油钠的诱导作用下,猪脂磷酸甘油钠的诱导作用下,猪脂肪间充质干细胞逐渐由成纤维样的长梭形(对照组,图肪间充质干细胞逐渐由成纤维样的长梭形(对照组,图A A)变为成)变为成骨样的
15、方块形,细胞堆积呈卵圆形或方形(图骨样的方块形,细胞堆积呈卵圆形或方形(图B B)。AB成骨诱导成骨诱导成骨诱导后的形态学观察成骨诱导后的形态学观察脂肪干细胞医学知识23B 茜素红染色检测诱导细胞的矿物质沉积状况,结果:猪脂肪间茜素红染色检测诱导细胞的矿物质沉积状况,结果:猪脂肪间充质干细胞在成骨诱导第充质干细胞在成骨诱导第7 7天开始出现小的点状钙化斑(天开始出现小的点状钙化斑(A A),诱导),诱导第第1414天形成广泛的钙化结节(天形成广泛的钙化结节(B B)。诱导)。诱导2121天钙化结节更加明显连天钙化结节更加明显连接成片(接成片(C C)。)。D D为对照组。为对照组。CB成骨诱导
16、成骨诱导脂肪干细胞医学知识24 actinOCN 165bpCOL-1 539bp actinRT-PCR检测成骨标志基因检测成骨标志基因COL-1(型骨胶原)及型骨胶原)及OCN(骨钙素)表达(骨钙素)表达 M:marker;1-4分别为第0天,7天,14天,21天OCN的表达;5-8为COL-1的表达。结果:在成骨诱导分化的早期(第结果:在成骨诱导分化的早期(第7 7天),可检测到成骨特天),可检测到成骨特异性基因异性基因型骨胶原和骨钙素的表达,随着诱导时间的增加,型骨胶原和骨钙素的表达,随着诱导时间的增加,2 2个基因的表达量呈上升趋势。个基因的表达量呈上升趋势。成骨诱导成骨诱导RT-P
展开阅读全文