教培用血液分子生物学基因治疗课件.ppt

1、血液分子生物学基因治疗2 2、间接疗法：、间接疗法：以正常的基因替代致病基因以正常的基因替代致病基因。导入外源正常基因，代替有缺陷的基因导入外源正常基因，代替有缺陷的基因,使细使细胞恢复正常功能而达到治疗疾病（尤其是遗传病）胞恢复正常功能而达到治疗疾病（尤其是遗传病）的目的。的目的。而对靶细胞而言，而对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的没有去除或修复有缺陷的基因基因。正常基因的分离与克隆正常基因的分离与克隆转基因动物研究大事记表达后，再回输到体内。选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，基因的结构和功能。*在gag,pol,env 序列去除的区域，插入目的基因1)逆转录病毒（retrovirus）

2、例如：我国学者薛京伦实施的F的基因治疗。是将外源基因定位导入细胞的染色体上。三、基因治疗的现状与前景选择适当的受体细胞并在体外有效表达。RNA病毒能整合到染色体以及基因表达水平较高等。措 施：LTR LTR（3）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很难适用于人类。仔 鼠假妊娠回植患者体内四、基因治疗存在的问题与论理学进行基因治疗必须具备下列条件：磷酸钙磷酸钙+DNA 混合微细颗粒混合微细颗粒 沉淀反应沉淀反应2030min 细胞在沉淀物中暴露细胞在沉淀物中暴露 524h 方法简单，但转化效率低。方法简单，但转化效率低。DNA脂膜脂膜Xba IBstXIXba IneoXbaIBstXIneo正常

3、基因座位正常基因座位带有珠蛋白基带有珠蛋白基因的质粒因的质粒 重组后，插入外源基因片段带有重组后，插入外源基因片段带有neo基因（新霉素抗性基基因（新霉素抗性基因），重组后的细胞在含有因），重组后的细胞在含有neo 的培养基中生长，没有插入新基的培养基中生长，没有插入新基因的细胞死亡，将有重组的细胞筛选出来。因的细胞死亡，将有重组的细胞筛选出来。感染细胞重组病毒逆转录病毒载体构建的技术路线逆转录病毒载体构建的技术路线 *gag,pol,env gag,pol,env 序列去除，保留序列去除，保留LTR LTR 和和，使使 逆转录病毒成为无复制能力的缺陷病毒。逆转录病毒成为无复制能力的缺陷病毒。

4、*在在gag,pol,env gag,pol,env 序列去除的区域，插入目的基因序列去除的区域，插入目的基因 序列和报告基因序列（如序列和报告基因序列（如GFP)GFP)。*将目的基因、其两端的将目的基因、其两端的LTR LTR 以及以及这一序列插入这一序列插入 经改造的质粒内。经改造的质粒内。HSV Gene-TK 1987年，世界上第一只商业化转基因绵羊在英国著名的罗斯林研究所诞生。表 达clone sheep Dolly几年，或整个生命周期）；自杀基因(suicide gene)是一类前体药物转换酶基因，其编码的特异性酶类将原先对细胞无毒或毒性极低的前体药物在肿瘤细胞内代谢成毒性产物，

5、从而达到杀死肿瘤细胞的目的。*在gag,pol,env 序列去除的区域，插入目的基因表 达特点：导入速度快，操作步骤不复杂，对DNA大小无限制，不需要载体，整合效率较高，它可以直接获得纯系。1、复合免疫缺陷综合征的基因治疗同源重组（homologus recombination）:外源基因和染色体上的基因在同源序列间发生重组而插入染色体。*生物合成：病毒核酸的复制及蛋白质的合成。肿瘤基因治疗是人们十分关注的问题，进行了广泛的探索。（白介2）（肿瘤坏死因子）细胞膜细胞膜 自杀基因自杀基因(suicide gene)(suicide gene)是一类前体药是一类前体药物转换酶基因，其编码的特异性酶类将原先物转换酶基因，其编码的特异性酶类将原先对细胞无毒或毒性极低的前体药物在肿瘤细对细胞无毒或毒性极低的前体药物在肿瘤细胞内代谢成毒性产物，从而达到杀死肿瘤细胞内代谢成毒性产物，从而达到杀死肿瘤细胞的目的。胞的目的。目前研究过的自杀基因有十余种，最常目前研究过的自杀基因有十余种，最常用的是用的是HSV-TK/GCVHSV-TK/GCV和和CD/5-FCCD/5-FC两种自杀基因两种自杀基因系统。系统。药物前体药物前体 无毒无毒Gene酶酶 药物复合物药物复合物 有毒有毒 细胞死亡细胞死亡