实验六肝炎甲乙丙的意义课件.ppt
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- 实验 肝炎 甲乙丙 意义 课件
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1、一、乙型肝炎表面抗原(一、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)测定)测定二、分析肝炎标志物检验结果二、分析肝炎标志物检验结果三、类风湿因子(三、类风湿因子(RF)的测定)的测定四、分析生化全项结果四、分析生化全项结果 乙型肝炎的病原体是乙肝病毒(乙型肝炎的病原体是乙肝病毒(HBV),由),由于至今还不能成功地对该病毒进行分离培养,于至今还不能成功地对该病毒进行分离培养,所以,乙肝的诊断主要依赖于乙肝标志物所以,乙肝的诊断主要依赖于乙肝标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、抗抗HBc)的检测,在大型医院检验科应用的检测,在大型医院检验科应用PCR技术进行技术进行HBVDNA(乙肝核酸
2、)检测,(乙肝核酸)检测,来判断来判断HBV是否复制,乙肝患者传染性强弱。是否复制,乙肝患者传染性强弱。HBsAg是临床使用最广泛的诊断乙肝的指标。是临床使用最广泛的诊断乙肝的指标。因此,本实验来介绍因此,本实验来介绍HBsAg的检测。的检测。1、ELISA 2、金标法金标法洗板洗板待测待测抗原抗原底物底物温育温育显色E酶标酶标抗体抗体EEEEEEEE洗板洗板固相固相抗体抗体1、ELISA 按照试剂盒确定的按照试剂盒确定的Cut-offCut-off值判断结果值判断结果 ELISAELISA测定的测定的“灰区灰区”(可疑结果的含义)(可疑结果的含义)【测定原理测定原理】HBsAg 胶体金法检测
3、试剂条采用胶体金法检测试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术,高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术,试剂条含有被预先固定于膜上测试区(试剂条含有被预先固定于膜上测试区(T)和质)和质控区(控区(C)的抗体。)的抗体。G区:金标特异性抗体(兔型)C区:羊抗兔IgT区:特异性抗体 吸水纸标本标本 这条带是这条带是HBsAg 抗体抗体-HBsAg-金标粒子的复合金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性,则测试区(物在膜上结合形成的。如是阴性,则测试区(T)内将没有紫红色条带。无论内将没有紫红色条带。无论HBsAg是否存在于标是否存在于标本血样中,一条紫红色条带都会出现在质控区本
4、血样中,一条紫红色条带都会出现在质控区(C)内。质控区()内。质控区(C)内所显现的紫红色条带是)内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本,层析过程是否正常的标准,判定是否有足够标本,层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。同时也作为试剂的内控标准。在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,使在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,使用前将试剂条和血样标本恢复至室温(用前将试剂条和血样标本恢复至室温(20-30)。)。1 从原包装铝箔袋中取出试剂条,从原包装铝箔袋中取出试剂条,在在1小时内应尽快地使用。小时内应尽快地使用。2 将试剂条插入血将试剂条插入血清清/血浆标本中。注意:血清血浆标本
5、中。注意:血清/血浆标本液面不能血浆标本液面不能超过试剂条的标记线。超过试剂条的标记线。3 等待紫红色条带的等待紫红色条带的出现,测试结果应在出现,测试结果应在15分钟时读取。分钟时读取。30分钟后分钟后判定无效。弱阳性标本会在判定无效。弱阳性标本会在15分钟至分钟至30分钟出分钟出现现T线。线。阳性(阳性(+):两条紫红色条带出现。一条位于测试区:两条紫红色条带出现。一条位于测试区(T)内,另一条位于质控区()内,另一条位于质控区(C)。阳性结果表明:)。阳性结果表明:标本中含有乙肝表面抗原(标本中含有乙肝表面抗原(HBsAg)。)。阴性(阴性(-):仅质控区(仅质控区(C)出现一条紫红色条
6、带,在测试区()出现一条紫红色条带,在测试区(T)内无紫红色条带出现。阴性结果表明:标本中检测不内无紫红色条带出现。阴性结果表明:标本中检测不出乙肝表面抗原(出乙肝表面抗原(HBsAg)。)。无效:质控区(无效:质控区(C)未)未出现紫红色条带,表明不正确的操作过程或试剂条已出现紫红色条带,表明不正确的操作过程或试剂条已变质损坏。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并变质损坏。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在,应立即用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与当地供应商联系。停止使用此批号产品,并与当地供应商联系。金溶胶标记蛋白
7、质,胶体金颗粒具有高电子密度的特性,故在金标蛋白的抗金溶胶标记蛋白质,胶体金颗粒具有高电子密度的特性,故在金标蛋白的抗原抗体结合处,原抗体结合处,显微镜显微镜下可见黑褐色颗粒;当这些标记物在相应的标记处大下可见黑褐色颗粒;当这些标记物在相应的标记处大量聚集时,可在量聚集时,可在载体膜上载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点呈现肉眼可见红色或粉红色斑点(线线),从而用于抗,从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。原或抗体物质的定位或定性。注意:注意:测试区(测试区(T)内的紫红色条带可显现)内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是,在规定的观察时出颜色深浅的现象。但是,在规定的观察时间内,不论该色带
8、颜色深浅,即使只有非常间内,不论该色带颜色深浅,即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。弱的色带也应判为阳性结果。HBsAg 试剂条在试剂条在15 分钟时可检测出分钟时可检测出5ng/mlHBsAg,30分钟时可检测出分钟时可检测出1ng/ml HBsAg。并与并与ELISA 试剂条比较,实验表试剂条比较,实验表明明HBsAg 试剂条的灵敏度可达到试剂条的灵敏度可达到99.7%,特异性为特异性为99.66%。二、分析肝炎标志物检验结果(一)乙型肝炎的诊断标志物乙型肝炎的诊断标志物乙型肝炎表面抗原(乙型肝炎表面抗原(HBsAgHBsAg)乙肝病毒前乙肝病毒前S1S1抗原抗原抗乙肝病毒前抗乙肝病毒前
9、S1S1抗体抗体乙肝病毒前乙肝病毒前S2S2抗原抗原抗乙肝病毒前抗乙肝病毒前S S2 2抗体抗体 乙型肝炎核心抗原(乙型肝炎核心抗原(HBcAgHBcAg)乙肝核心抗体乙肝核心抗体-IgG-IgG 乙型肝炎表面抗体(抗乙型肝炎表面抗体(抗-HBs-HBs)乙型肝炎乙型肝炎e e抗原(抗原(HBeAgHBeAg)乙型肝炎乙型肝炎e e抗抗体体(抗抗-HBe)乙肝核心抗体乙肝核心抗体-IgM-IgM乙型肝炎表面抗原乙型肝炎表面抗原(HBsAg)(HBsAg)生物学性状生物学性状v 存在于存在于DaneDane颗粒的表面颗粒的表面v 位于病毒表面位于病毒表面v 是一种糖蛋白是一种糖蛋白v 4 4种亚
10、型种亚型(adr,adw,ayr,aywadr,adw,ayr,ayw)v 判断判断HBVHBV感染的指标之一感染的指标之一v 刺激机体产生保护性抗体即抗刺激机体产生保护性抗体即抗-HBs-HBsDane 颗粒颗粒(schematicSurface AgCore Ag(also“e”Ag)DNAHBV 阳性血清电镜图阳性血清电镜图Dane 颗粒 检测检测方法方法:T SPRIASPRIA(固相放射免疫法)(固相放射免疫法)T ELISAELISA(酶联免疫吸附试验(酶联免疫吸附试验)T RPHARPHA(反向间接血凝试验(反向间接血凝试验)T 化学发光法化学发光法E 可对血清中的可对血清中的H
11、BsAgHBsAg进行定量检测,进行定量检测,对肝炎病人动态疗效对肝炎病人动态疗效观察很有价值观察很有价值临床意义临床意义(1 1)乙肝的筛选和普查。)乙肝的筛选和普查。(2 2)HBsAgHBsAg阴性不能完全排除乙型肝炎。阴性不能完全排除乙型肝炎。(3 3)同时出现)同时出现HBsAgHBsAg和抗和抗-HBs-HBs,可能是不同亚型重复感染。,可能是不同亚型重复感染。(4 4)如果仅表现为)如果仅表现为HBsAgHBsAg阳性者,传染性较弱。阳性者,传染性较弱。乙型肝炎表面抗体乙型肝炎表面抗体(HBsAb)生物学性状生物学性状v 是一种保护性抗体是一种保护性抗体 位于病毒表面位于病毒表面
12、v 是机体感染或接种乙肝疫苗的标志是机体感染或接种乙肝疫苗的标志v 如一过性如一过性HBsAgHBsAg阳性,则抗阳性,则抗-HBs-HBs可以为阴性可以为阴性临床意义临床意义(1 1)抗)抗-HBs-HBs阳性提示急性感染后的康复。阳性提示急性感染后的康复。(2 2)在接受抗)在接受抗-HBs-HBs阳性血液的受血者中,可出现短暂性的抗阳性血液的受血者中,可出现短暂性的抗-HBs-HBs阳阳性。性。(3 3)HBVHBV疫苗接种后,可出现抗疫苗接种后,可出现抗-HBs-HBs阳性。阳性。(4 4)抗)抗-HBs-HBs与与HBsAgHBsAg同时阳性可见于暴发性肝炎或慢性活动性肝炎患同时阳性
13、可见于暴发性肝炎或慢性活动性肝炎患者。者。(5 5)HBsAgHBsAg含量消失同时伴抗含量消失同时伴抗-HBs-HBs的出现,是目前临床上慢性乙型肝的出现,是目前临床上慢性乙型肝炎治疗的最终目标。炎治疗的最终目标。乙型肝炎乙型肝炎e e抗原抗原(HBeAg)(HBeAg)生物学性状生物学性状v 是乙肝传染性的标志是乙肝传染性的标志 v HBeAg HBeAg阳性可能性越大阳性可能性越大v HBsAg HBsAg效价越高检出率就越高效价越高检出率就越高v HBeAg HBeAg阳性标志着较强的感染和传染性阳性标志着较强的感染和传染性 乙型肝炎乙型肝炎e e抗体抗体(HBeAb)生物学性状生物学
14、性状v 多出现于急性肝炎恢复期的病人中多出现于急性肝炎恢复期的病人中v 比抗比抗-HBs-HBs转阳要早转阳要早v 常在常在HBsAgHBsAg即将消失或已经消失时检出即将消失或已经消失时检出v 存在于乙肝恢复期及痊愈的病人血清中存在于乙肝恢复期及痊愈的病人血清中v 也可出现于慢性肝炎也可出现于慢性肝炎v 肝硬化或无症状的肝硬化或无症状的HBsAgHBsAg携带者可长期存在携带者可长期存在乙型肝炎核心抗体乙型肝炎核心抗体(HBcAb-IgMHBcAb-IgM)生物学性状生物学性状v 早期早期HBVHBV感染的特异性血清学标志感染的特异性血清学标志 v 效价降低常提示预后较好效价降低常提示预后较
15、好v 有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎 v 暴发型乙型肝炎诊断暴发型乙型肝炎诊断 乙型肝炎核心抗体乙型肝炎核心抗体(HBcAb-IgGHBcAb-IgG)生物学性状生物学性状v 出现较早出现较早v 不是保护性抗体不是保护性抗体v 有流行病学调查意义有流行病学调查意义HBVHBV血清学标物血清学标物临床意义临床意义血液传染性血液传染性HBsHBsAgAg抗HBsHBs抗HBcHBcHBeHBeAgAg抗HBeHBe+-+-潜伏期或者急性乙肝早期潜伏期或者急性乙肝早期高高+-+-急性或者慢性感染,以抗急性或者慢性感染,以抗HBV-IgMHBV-IgM鉴别(鉴别(
16、“大三阳大三阳”)高高+-+-+乙肝后期或者慢性携带者(乙肝后期或者慢性携带者(“小三阳小三阳”)低低-+-+痊愈或者恢复期,有免疫力痊愈或者恢复期,有免疫力无无-+-痊愈,有免疫力痊愈,有免疫力无无-+-过去感染,但无法检出抗过去感染,但无法检出抗HBsHBs;低水平慢性感染;低水平慢性感染未知未知-+-疫苗接种或者很早以前曾感染过疫苗接种或者很早以前曾感染过无无 不同血清标志物组合模式的临床意义乙肝病毒前乙肝病毒前S1S1蛋白蛋白(pre-S1)(pre-S1)生物学性状生物学性状v 仅在仅在HBV-DNAHBV-DNA阳性血清中检出阳性血清中检出v 传播病毒的危险性明显高传播病毒的危险性
17、明显高 属属HBV表面抗原的组成部分,前表面抗原的组成部分,前S1抗原(蛋白)反抗原(蛋白)反映病毒的复制,与映病毒的复制,与HBV的传染性有关。前的传染性有关。前S1抗原检抗原检出率以慢型活动性肝炎(乙肝)最高,急性乙肝时,出率以慢型活动性肝炎(乙肝)最高,急性乙肝时,前前S1抗原与抗原与HBeAg平行存在,比平行存在,比HBsAg消失早,作消失早,作为反映病毒消除的指标优于为反映病毒消除的指标优于HBsAg。前。前S1抗原与抗原与HBV-DNA的相关性优于的相关性优于HBeAg,可作为病毒复制与,可作为病毒复制与传染性标志。血清前传染性标志。血清前S1抗原相对含量的变化可以提抗原相对含量的
18、变化可以提示示HBV的愈后,持续阳性,则预示的愈后,持续阳性,则预示HBV向慢性化转向慢性化转变。前变。前S1抗原已成为检测乙型肝炎的新指标。抗原已成为检测乙型肝炎的新指标。两对半和三对的检测方法两对半和三对的检测方法检测方法检测方法两对半两对半三对三对双抗夹心法双抗夹心法前前S1S1双抗夹心法双抗夹心法表面抗原表面抗原HBsAgHBsAg双抗夹心法双抗夹心法表面抗体表面抗体HBsAbHBsAb双抗夹心法双抗夹心法e e抗原抗原HBeAgHBeAg竟争法竟争法e e抗体抗体HBeAbHBeAb竟争法竟争法核心抗体核心抗体HBcAbHBcAb 2006年年3月月16日我院检验科检测日我院检验科检
19、测1名名RA患者,其结果患者,其结果 HBsAg(-)HBeAg(-)HBsAb(-)HBeAb(-)HBcAb(-)Pre-S1Ag(+)1.样本取样有问题,比如溶血、血脂含量高、样本取样有问题,比如溶血、血脂含量高、还有其他许多未明的抑制因子。还有其他许多未明的抑制因子。2.突变,一般国内试剂盒突变,一般国内试剂盒PCR检测时设计的靶检测时设计的靶位点都是针对主流的流行株,个别少见毒株或位点都是针对主流的流行株,个别少见毒株或突变的毒株则无法检测。突变的毒株则无法检测。检验人员通过复查结果正确,在检验报告单上检验人员通过复查结果正确,在检验报告单上注明建议临床作注明建议临床作HBV DNA
20、检查。检查。理由:理由:将将ELISA检测阴性的血清,使用检测阴性的血清,使用PCR技技术检测乙肝核酸,结果发现,在术检测乙肝核酸,结果发现,在HBSAg阴阴性的血清中性的血清中HBV DNA阳性率占阳性率占10,索凤霜,索凤霜等人报道,在等人报道,在295例例HBSAg阴性的血清标本中阴性的血清标本中Pre-S1Ag(+)13例,占例,占4.4%。说明在说明在HBSAg阴性的血清中阴性的血清中Pre-S1Ag(+)确实存在,如果只作乙肝两对半,就会造确实存在,如果只作乙肝两对半,就会造成漏检,漏检的这部分患者如果参加义务成漏检,漏检的这部分患者如果参加义务献血,将对输血的安全性造成危害。所有
21、,献血,将对输血的安全性造成危害。所有,当存在上述模式时,乙肝建议再作乙肝核当存在上述模式时,乙肝建议再作乙肝核酸检查,看病毒是否复制酸检查,看病毒是否复制 生物学性状生物学性状 免疫学检测学检测免疫免疫免疫学检测学检测免疫免疫 属小属小RNA病毒科病毒科 特异性抗体检测特异性抗体检测 ELISA 化学发光法化学发光法 机体感染机体感染HAV后,可产生后,可产生IgM、IgA、IgG抗抗体,抗体,抗HAV-IgM是病毒衣壳蛋白抗体。抗是病毒衣壳蛋白抗体。抗HAV-IgA是肠道粘膜分泌的局部抗体,抗是肠道粘膜分泌的局部抗体,抗HAV-IgG病愈后可长期存在。抗病愈后可长期存在。抗HAV-IgG阳
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