肺炎支原体检测培养基培训课件.ppt

1、研发单位：第四军医大学研发单位：第四军医大学生生 产产 商：瑞凯生物科技商：瑞凯生物科技 资质：资质：什么是支原体支原体是一种介于细菌和病毒之间，无细胞壁的最小病原微生物。比细菌小，比病毒大，可通过滤菌器，显微镜下观察不到。支原体的大小为0.20.3um,无细胞壁，不能维持固定形态而呈多边形。没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如头孢类，青霉素类不敏感。对热抵抗力差，通常55摄氏度经15分钟处理可使之灭活，因此应严格控制培养温度在37摄氏度。繁殖所需物质特殊，所以许多培养基培养时间长。因此更适合支原体繁殖的物质及配合比例，就显得尤为重要，同时也是不同培养基的主要技术区别所在。支原体的分类

2、：支原体的分类：1.1.自然界目前已经发现的自然界目前已经发现的150150多种；多种；2.2.与人有关的（人类能感染的）：与人有关的（人类能感染的）：人型支原体（人型支原体（MHMH）、解脲支原体（、解脲支原体（UUUU）、肺炎支原体（、肺炎支原体（MPMP）、生殖支原体（、生殖支原体（MGMG）显微镜下观察肺炎支原体显微镜下观察肺炎支原体肺炎支原体传播途径及发病率肺炎支原体传播途径及发病率1.1.通过呼吸道飞沫传染；通过呼吸道飞沫传染；2.2.可散发流行；可散发流行；3.3.全年均可发病；全年均可发病；4.4.易感染的人群儿童，青少年；易感染的人群儿童，青少年；5.5.发病率：由支原体引起

3、的感冒占整个感冒发病率：由支原体引起的感冒占整个感冒20%-40%，支原体肺炎的，支原体肺炎的发病率可占所有肺炎病例的发病率可占所有肺炎病例的30%-40%。引起感冒的几种原因及检测与治疗细菌感染，可通过检查血常规，测定白细胞，中性粒细胞高低来判断。小时出结果。头孢类，青霉素类抗生素。病毒感染，通过血常规，测定淋巴细胞高低来判断。小时出结果。无特效药，用解热镇痛来缓解，靠免疫力。肺炎支原体感染。大环内酯类抗生素（破坏细胞中蛋白质合成）1 血清学检测，也称抗体检测，检测患者血液中是否存在支原体抗体。小时出结果。目前普遍采用。2检测，依靠大型设备，手段繁琐，无临床价值，目前只做科研使用。传统培养法

4、直接查病原体，所需时间长，但准确率高。肺炎支原体几种检测方法对比1：血清学检测（抗体检测），3小时出结果是指抗体产生后经3小时检验，但从人感染支原体到体内产生抗体需要5天，且治愈后抗体在体内衰退仍需月。所以说无论什么时间做抗体检测结果都不准确。：传统培养法，直接查患者体内病原体，准确率高，但所需时间长（小时）。：瑞凯培养法，准确率高，直接提取患者咽部分泌物查病原体，发病前2-3天就能查到，培养时间短小时报结果。目前医院检查肺炎支原体常用手段及治疗目前医院检查肺炎支原体常用手段及治疗常用抗体检测，患者由于时间问题未产生抗体时，靠经验用药，天后，如无缓解再测抗体，产生后换药治疗。联合用药，增加患者

5、负担，造成滥用抗生素。抽血检测患者痛苦，易造成交叉感染。操作时采样，血清离心繁杂费时费力。瑞凯培养法检测的临床意义直接查病原体，发病前天就可在呼吸道分泌物中发现肺炎支原体，实现早期发现，快速正确诊断，及时治疗。根据患者病情各异，指导正确用药。避免滥用抗生素，减少患者负担。无需采血，减少患者痛苦及恐怖心里。肺炎型支原体药敏检测培养基的作用机理肺炎型支原体药敏检测培养基的作用机理pHpH为碱性为碱性红色（营养物质红色（营养物质+葡萄糖葡萄糖+酚酚红红+抑菌剂）抑菌剂）肺炎支原体肺炎支原体pHpH为酸性为酸性黄色黄色3737培养培养葡萄糖葡萄糖分解分解H+产品由培养基与药敏板组成药敏板制备药敏板内分

6、别包备11种不同浓度的抗生素，为低浓度，为高浓度。两孔未包备。肺炎支原体药敏检测培养基的使用步骤常温下使培养基解冻，滴加50ul到药敏板12号A孔，再加50ul石蜡油封盖以防挥发。用无菌棉拭子（或咽拭子）在口腔咽部捻转数次取出棉拭子置于培养瓶内，搅动数次，对着瓶壁尽量挤压出其中液体，然后取出棉拭子弃之。移液器将接种后的培养基分别滴加到药敏实验板除阴性对照孔外的23个小孔内，每孔50ul，然后每孔再加50ul的液体石蜡。将药敏板连同培养瓶内剩余培养基放置37C恒温箱培养24小时。结 果 判 断阳性判断：A:培养瓶和药敏板的12号A孔培养基应保持原来的红色，如果变黄操作过程可能出现问题，建议放弃本

7、次试验。B:培养瓶和药敏板的12号B孔保持原来的红色为阴性，变黄判定为阳性。药敏判断：标本判定阳性后再分别观察111号孔，如果A、B两孔均呈黄色说明肺炎支原体对该抗生素耐药。A孔呈黄色，B孔保持红色，则是中度敏感；如果A、B两孔均保持原来的红色则肺炎支原体对该抗生素敏感。肺炎支原体37培养50ul/孔50ul/孔敏感中敏耐药 注注 意意 事事 项项1 1：培养液：培养液-4-4C C至至-15-15C C冷冷 冻保存，不能反复解冻。冻保存，不能反复解冻。2 2：取样位置准确，取样：取样位置准确，取样 量足。量足。3 3：取样后在：取样后在1010分钟分钟 内接种到培养基。内接种到培养基。4 4

8、：3737C C恒温。恒温。解答大家关心比较多的问题：解答大家关心比较多的问题：1.采样部位：采样部位：咽喉部位咽喉部位（舌腭弓、（舌腭弓、悬雍垂、悬雍垂、扁桃体）扁桃体）2.采样方法：采样方法：A.棉拭子浸润生理棉拭子浸润生理盐水后并挤压出棉盐水后并挤压出棉拭子液体采样更佳；拭子液体采样更佳；B.捻转数次，粘取捻转数次，粘取尽量多（没有具体尽量多（没有具体量值）的分泌液；量值）的分泌液；C.棉拭子压住舌棉拭子压住舌根部，令患者咬住根部，令患者咬住30秒左右取出。秒左右取出。3.采样后，咽拭子能放置多久？采样后，咽拭子能放置多久？我们建议采样后立即将咽拭子放入培养我们建议采样后立即将咽拭子放入

9、培养 基内，据国外文献报道，基内，据国外文献报道，MP离开宿主后离开宿主后 会很快死亡（会很快死亡（15分钟以内）。另外这样也分钟以内）。另外这样也 避免了感染其他杂菌的可能。（门诊的使用）避免了感染其他杂菌的可能。（门诊的使用）4.培养基能否快速解冻？培养基能否快速解冻？可以。科室可以根据当天的大概用量，早上在恒温可以。科室可以根据当天的大概用量，早上在恒温 箱里快速解冻。箱里快速解冻。5.当天解冻了，没有用完的培养基，能再冻起来吗？当天解冻了，没有用完的培养基，能再冻起来吗？不能反复冻融。但是您可以把它冷藏起来，不能反复冻融。但是您可以把它冷藏起来，明天继续用。培养基在冷藏环境下至少可明天

10、继续用。培养基在冷藏环境下至少可 以保存一周以上。以保存一周以上。6.如果培养结果偶尔出现浑浊、如果培养结果偶尔出现浑浊、沉淀或者半红半黄的情况，沉淀或者半红半黄的情况，应该如何判断？应该如何判断？出现这样的情况全部判断为出现这样的情况全部判断为 阴性。培养基内发生的这种阴性。培养基内发生的这种 变化不是由于存在变化不是由于存在MP引起的，而是因为患者口腔引起的，而是因为患者口腔 内的食物残留或者其他口腔杂菌引起的。培养基内的食物残留或者其他口腔杂菌引起的。培养基 特异性极强，只有特异性极强，只有MP能在其中快速生长繁殖，而能在其中快速生长繁殖，而 其他微生物的代谢和酸性物质不敏感，才会出其他

11、微生物的代谢和酸性物质不敏感，才会出 现以上情况。？现以上情况。？7.试剂的准确率如何？试剂的准确率如何？经临床对比验证，我们的经临床对比验证，我们的 培养基检验结果的准确率培养基检验结果的准确率 达到了达到了98以上。以上。菌株菌株 试验试验100%准确。准确。8、标本量是否对结果有影响？、标本量是否对结果有影响？从之前各医院的使用结果上看，标本量对培从之前各医院的使用结果上看，标本量对培 养时间有一定的影响，如果没有达到足够的养时间有一定的影响，如果没有达到足够的 标本量（即采取的咽部分泌物量），就可标本量（即采取的咽部分泌物量），就可 能无法在能无法在24小时内检出阳性，但小时内检出阳性

12、，但24小时小时 后仍可能出现阳性。所以采集时尽可后仍可能出现阳性。所以采集时尽可 能取足标本。能取足标本。9.口内微量的支原体是口内微量的支原体是 否会导致结果阳性？否会导致结果阳性？不会！当咽部提取的不会！当咽部提取的 分泌物内支原体量没分泌物内支原体量没 有达到有达到104106时时 （也就是没有达到肺炎（也就是没有达到肺炎 支原体的发病基数），支原体的发病基数），24小时内结果不会呈现阳性，但是由于本小时内结果不会呈现阳性，但是由于本 试剂的敏感性达到试剂的敏感性达到10-8，延长培养时间也，延长培养时间也 可能出现阳性。可能出现阳性。9.关于临床效果对比？关于临床效果对比？培养法本身

13、就是微生物检验的金标准，培养法本身就是微生物检验的金标准，如果与其它检查抗体的检验方法对比，如果与其它检查抗体的检验方法对比，是没有什么可比性的，因为这是两种是没有什么可比性的，因为这是两种 完完全不同的检查方法全不同的检查方法，临床目的和意，临床目的和意 义也是完全不一样，义也是完全不一样，MP培养更适合用培养更适合用 于早期筛查和指导临床用药；于早期筛查和指导临床用药；如果比较应该在培养方法之间比较，也只有快速出如果比较应该在培养方法之间比较，也只有快速出 结果的培养才能真正实现早确诊、早治疗，对指导结果的培养才能真正实现早确诊、早治疗，对指导 临床用药意义更大临床用药意义更大；真正具有意

14、义的效果观察应该是根据试剂真正具有意义的效果观察应该是根据试剂 检验结果，结合临床医生对患者的诊断以检验结果，结合临床医生对患者的诊断以 及用抗及用抗MP药后结果来综合判断试剂的检药后结果来综合判断试剂的检 验效果。验效果。10.关于临床试用关于临床试用 由于肺炎支原体的发病率仅占肺炎由于肺炎支原体的发病率仅占肺炎患者的患者的30%左右，如果仅仅观察左右，如果仅仅观察10例例20例，是不能真实反应检查效果例，是不能真实反应检查效果的，也不能因此得出任何结论。所的，也不能因此得出任何结论。所以也就不能真正观察出试剂的有效以也就不能真正观察出试剂的有效率。建议观察率。建议观察50100例之间，结合

15、例之间，结合临床诊断及用抗临床诊断及用抗MP药后效果作出判药后效果作出判断，断，同时鼓励临床医生多送较典型的肺炎支原体患者同时鼓励临床医生多送较典型的肺炎支原体患者标本进行试标本进行试验对比，相对较有实际意义。验对比，相对较有实际意义。11、关于假阳性很多同类培养基假阳性率高的原因很多同类培养基假阳性率高的原因 试剂试剂的抑菌剂失效；的抑菌剂失效；试剂本身特异性不高（目前一般试剂本身特异性不高（目前一般 试剂主要存在这个原因试剂主要存在这个原因）；）；由于产品存在出结果时间缺陷，由于产品存在出结果时间缺陷，但又想在短时间内出结果，因此但又想在短时间内出结果，因此 在产品中故意少加抗菌剂或只加在

16、产品中故意少加抗菌剂或只加 抗菌谱小的抗菌剂，抗菌谱小的抗菌剂，让其它细菌让其它细菌 快速繁殖导致阳性结果，从而达快速繁殖导致阳性结果，从而达 到到“表象表象”的快速。的快速。12、关于假阴性、关于假阴性产生假阴性原因产生假阴性原因取样后没有及时进行培养取样后没有及时进行培养；培养温度没有控制好，过低或过高培养温度没有控制好，过低或过高；储存条件不足以及放置温度不符合要求致使试剂失效；储存条件不足以及放置温度不符合要求致使试剂失效；取样部位不正确取样部位不正确；取样量不足取样量不足；取样前患者使用过抗取样前患者使用过抗MP药物药物。13、关于特异性：、关于特异性：1、MP检测培养基的特异性是根

17、据检测培养基的特异性是根据MP培养基的执行标准，培养基的执行标准，通过陕西省医疗器械检测中心实验室数据合格的有效结果通过陕西省医疗器械检测中心实验室数据合格的有效结果 批复，是有合法临床依据的；批复，是有合法临床依据的；2、MP的特异性检测依据主要是根据国家相关的检验标准规的特异性检测依据主要是根据国家相关的检验标准规 定，检验组：加入定，检验组：加入MP阳性标准株检验结果为阳性；对照阳性标准株检验结果为阳性；对照 组：加入呼吸道其它细菌检验结果为阴性。标准株组（检组：加入呼吸道其它细菌检验结果为阴性。标准株组（检 验组）的阳性率与其他细菌组（对照组）的阴性率的平均验组）的阳性率与其他细菌组（

18、对照组）的阴性率的平均 值就是特异性值；值就是特异性值；3、本试剂是选择性培养试剂，不适合其它支原体和其它细、本试剂是选择性培养试剂，不适合其它支原体和其它细 菌生长，通过本产品最适合菌生长，通过本产品最适合MP快速生长的核心技术，同快速生长的核心技术，同 时加入不影响支原体繁殖的高效抑菌剂，将其它微生时加入不影响支原体繁殖的高效抑菌剂，将其它微生 物抑制或者杀灭；物抑制或者杀灭；4、各种微生物的生长环境要求不同、生长时间以、各种微生物的生长环境要求不同、生长时间以 及在培养过程中产生的分解产物也不同，所以及在培养过程中产生的分解产物也不同，所以 产生的产生的PH值环境也不同。值环境也不同。谢 谢 观赏！谢谢！